不同存储温度的huMSC-exo对UVB辐照HaCaT细胞的修复作用研究

目的探究了不同存储温度的huMSC-exo对UVB辐照HaCaT细胞的修复作用,为外泌体存储选择适宜的温度条件提供理论依据。方法采用超速离心法从huMSC培养基上清中提取外泌体,用Western blot、纳米颗粒跟踪分析技术和透射电镜技术进行表征,并置于–80、–20、4、25和45℃存储1、3、7、14、30、50、100和150 d。构建UVB辐照HaCaT光老化细胞模型,用huMSC-exo处理24 h后观察细胞形态、检测细胞存活率、SA-β-gal活性、T-SOD活性、MDA和LDH含量。结果huMSC-exo呈具有清晰膜的茶托样结构,尺寸中位数为114 nm,30~150 nm囊泡数量占比约61.42%,表达外泌体表面标记蛋白CD9、CD63和CD81。–80℃和25℃存储1~150 d的huMSC-exo能显著提高UVB辐照HaCaT细胞存活率、恢复细胞形态、降低SA-β-gal活性、部分恢复细胞T-SOD、MDA和LDH水平;–20℃存储的huMSC-exo对HaCaT的增殖活性、细胞形态和SA-β-gal活性有恢复作用;4℃存储的huMSC-exo能减轻细胞老化水平;45℃存储的huMSC-exo无显著修复作用。结论–80℃、25℃存储的huMSC-exo能够显著恢复UVB辐照引起的HaCaT损伤,–20℃、4℃huMSC-exo作用效果次之,45℃的huMSC-exo无显著影响,提示–80℃和25℃能够较好地维持huMSC-exo的生物学功能。