黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的筛选与特性研究

采用80℃水浴法从黄颡鱼肠道分离到65株芽孢杆菌,牛津杯法拮抗试验筛选到3株抑菌活性很强的菌株,API 50CHB试剂盒鉴定它们为枯草芽孢杆菌。选取抑菌活性最强的F14进行特性研究。结果显示:F14在80℃、90℃和沸水浴中处理5min后的存活率分别为96.7%、95.3%、52.9%。随时间的延长,F14在90℃和沸水浴中的存活率均出现了较大幅度的下降。沸水浴处理10min时,其存活率减少至8.3%。在pH 3.0—5.0的范围内,处理F14 1h、2h后的存活率分别在98%、87%以上。F14代谢粗提物具有较强的抑菌作用,病原性嗜水气单胞菌在粗提物中培养2h,细菌数量就开始急剧下降,至24h时已检测不到活的细菌。此外,喷洒在饲料中的F14在室温、4℃和20℃条件下储存,细菌数量在4℃和20℃存储20d均无显著变化,仅在室温下存储至第20天时显著减少。研究表明,F14抗菌谱较广,抑菌作用强,耐高温和酸性环境,在饲料中稳定性好,具有作为水产益生菌应用的潜力。

黄颡鱼肠道及养殖水体中菌群的分析

对黄颡鱼肠道及所处水体菌群的数量和组成进行了分析。结果显示,黄颡鱼各肠段中好氧和兼性厌氧菌数量的对数值分别为5.27±0.74、6.26±0.36、7.56±0.61。厌氧菌数量远大于好氧和兼性厌氧菌,相差约2～3个数量级,双歧杆菌为厌氧菌的优势菌。养殖水体中细菌数量的对数值为4.80±0.73,表明水体中营养盐浓度不高。黄颡鱼肠道与养殖水体中的优势菌基本相同,均为气单胞菌属、肠杆菌科和不动杆菌属。此外,对患细菌性出血病的黄颡鱼肠道菌群的研究结果显示,患病鱼肠道细菌数量显著增加,气单胞菌相比健康黄颡鱼增加18.3%～33.6%,细菌种类明显减少。表明气单胞菌等重要条件致病菌需要在一定条件下、达到一定的优势度才能体现其致病性。

二价镉对梨形环棱螺毒理效应的研究

为评价Cd^2＋对梨形环棱螺的毒理效应,采用暴露重金属的方法,研究了不同质量浓度氯化镉（Cd^2＋分别为0、0.05、0.10、0.20和0.50 mg/L）在不同暴露时间（0-14 d）下对梨形环棱螺几种抗氧化酶活性及氧化损伤的影响。结果显示：Cd^2＋对梨形环棱螺肝脏和鳃中过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽硫转移酶（GST）、还原性谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）均有显著影响,表现为动态变化过程,并有明显的时间剂量效应;螺肝脏和鳃组织中DNA单链断裂程度随暴露的剂量增加而增加;肝脏在暴露的前4 d内,DNA完整性（F比值）一直下降,鳃组织在暴露的第1天时,DNA损伤显著或极显著,随后F值上升,显示断裂的DNA有一定程度的修复,然后DNA单链断裂程度继续加重,F值持续下降,直至第14天。结论：低浓度的Cd^2＋暴露可引发梨形环棱螺的氧化应激和脂质过氧化。上述指标对Cd^2＋污染敏感,可以作为Cd^2＋污染监测的生物标志物。

氰戊菊酯对鲤SOD活性和MDA含量以及肝肾细胞形态的影响

通过不同质量浓度的氰戊菊酯对鲤进行21d半静置染毒,测定不同时间血清、肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化,观察染毒后氰戊菊酯对鲤肝、肾组织结构的影响。结果表明:暴露于氰戊菊酯中的鲤,肝脏及血清中SOD活性均呈现先上升后降低的变化规律,且血清中SOD活性变化先于肝脏中的变化,暴露21d后活性极显著低于空白对照组;而MDA含量均随着暴露时间的延长显著增加,上升时间主要集中在暴露后的第3～14天。苏木精-伊红染色显示,鲤肝血窦扩张充血,肝细胞空泡变性及溶解并形成局部坏死病灶等,0.8μg/L染毒第21天、4.05μg/L和20.25μg/L染毒3d后上述损伤明显;鲤肾间质细胞增多,炎性细胞浸润,部分肾小管与基底膜分离,管壁细胞水样变性,高剂量组染毒21d还兼有肾小球萎缩,大量含铁血黄素沉着等。超显微观察发现,高剂量染毒21d肝细胞核萎缩,核内异形染色体边集化、粗面内质网水肿、松散甚至断裂,胞质中出现空泡,脂滴大量增多等。以上损伤不仅具有剂量相关性,还具有时间积累效应。

氰戊菊酯对草鱼肝微粒体CYP3A活性的影响

通过设计1.2、6.0、12.0μg/L 3个氰戊菊酯质量浓度组,1个空白对照组,1个恩诺沙星阳性对照组,进行氰戊菊酯对草鱼肝微粒体CYP3A活性影响及草鱼CYP3A活性的组织分布研究。结果表明:CYP3A存在于肝脏、鳃、肾脏、脾、肠、脑组织中,其中肝脏中活性最高;氰戊菊酯能显著抑制CYP3A的活性,随暴露时间的延长抑制作用增强,但抑制趋势减弱,3 d内趋势最强,各试验浓度组之间的差异不显著。建议临床用药,尤其是联合用药、多次用药时要充分考虑氰戊菊酯对代谢酶活性的影响。