转红色荧光蛋白基因唐鱼的遗传分析和生物学研究

转红色荧光蛋白基因唐鱼(Tanichthys albonubes)测交获得实验鱼,以表达红色荧光蛋白为表型性状,采用点杂交和遗传学分析相结合的方法,研究外源基因的遗传传递规律,并对转基因唐鱼和非转基因唐鱼的生长和繁殖等方面进行了比较。结果显示:测交后代表型的分离规律基本符合经典的孟德尔单显性基因遗传模式,外源基因属于单位点整合,测交后代中没有发现沉默整合个体;实验鱼的生长和可量性状对比实验表明,转基因唐鱼和非转基因唐鱼在仔鱼期到性成熟之间,生长速度无显著差异,性成熟个体的外部形态除体色外也无差别,繁殖力方面基本无显著差异。本研究结果表明了培育转红色荧光蛋白基因唐鱼纯系的可行性;同时在生长、繁殖方面的研究结果为评价转基因唐鱼的生态安全奠定了基础。

RNA干扰技术在鱼类中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物体内利用双链RNA(double strand RNA,dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)的现象。RNAi主要通过核酸酶Dicer切割dsRNA生成21～23nt的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),继而由siRNA识别并靶向降解同源靶基因mRNA,从而抑制靶基因的蛋白表达。文章综述了RNA干扰技术的原理、siR-NA的制备及在鱼类中的研究进展。

珠江流域不同江段鲮生长差异性研究

通过对珠江流域不同江段鲮 (Cirrhinamolitorella)生长特征的差异性分析 ,发现西江和东江的鲮比北江的形态参数变异大 ;各江段鲮生长出现小型化 ,说明珠江鲮已经捕捞过度 ,应严格控制捕捞规格 ,年龄不得低于 3+,体长不得低于 2 5cm ;根据体重与体长的相关曲线发现 ,同体长的鲮东江的体重大于北江和西江 ;1～ 4龄鲮的生长指标和增长率东江和西江的高于北江 ,这种生长的差异性与作者对其遗传多样性水平丰欠的研究相一致 ,而与各江段饵料丰欠的研究有待进一步开展。作者认为应优先保护遗传多样性更丰富的东江和西江鲮种群 ,同时增加北江种群的遗传多样性 。

鱼类标志技术的研究进展

鱼类标志技术在鱼类遗传育种和引种驯化中得到广泛应用,同时它也是一种研究鱼类分布、种群密度、洄游和鱼类资源等的重要方法。综述了鱼类标志技术的种类、优缺点及研究应用等,以期推动鱼类标志技术的发展。

微卫星标记对中国引进加州鲈养殖群体遗传多样性的分析

为了解我国引进加州鲈养殖群体的种群遗传结构和种质资源现状,本文发展了加州鲈的微卫星标记。用磁珠富集法获得加州鲈微卫星标记267个,设计并合成了85对微卫星引物对加州鲈的基因组进行遗传多样性分析,从中筛选出18对并从网上查询获得3对共21对引物对加州鲈的基因组DNA进行扩增。PCR扩增产物在8%的聚丙烯酰胺凝胶中分离,硝酸银染色,经紫外成像后对电泳条带进行统计分析。计算得到三个群体的平均等位基因数分别为2.3、2.3和2.1;多态信息含量(PIC)为0.0906—0.7480;平均杂合度观测值分别为0.384、0.396和0.356;杂合度期望值为0.375、0.403和0.368。统计结果初步表明3个不同群体平均杂合度处于中等偏低水平,遗传多样性不高。

大口黑鲈早期生长发育规律的研究

为了研究大口黑鲈Micropterus salmodies早期生长的发育规律,选用8个全同胞家系的大口黑鲈,每月从每个家系中随机选取30～40尾,对其体重和体长进行测量。运用Gompertz、Logistic和Von Bertalanffy3种非线性模型对大口黑鲈体重和体长的生长进行非线性曲线拟合分析,同时利用幂函数方法对大口黑鲈体重与体长的生长关系进行分析。结果表明:3种非线性模型均能较好的模拟大口黑鲈体重和体长的生长,而Logistic模型拟合效果更佳;进一步分析体重和体长的最佳拟合参数,发现体重和体长的拐点月龄分别为5.77月龄和4.95月龄,拐点处体重和拐点处体长分别为146.35 g、13.75 cm;幂函数方程能很好地拟合大口黑鲈体重和体长之间的关系,其方程为W=0.076L2.650(R2=0.998)。研究结果可为大口黑鲈养殖中的饲养管理和品种选育提供参考。

大口黑鲈肝脾肿大病病原研究

为了查明2009年10月广东省佛山地区养殖大口黑鲈（Micropterus salmoides）中暴发的传染性疾病的病原，对病鱼的肝脏、脾脏和腹隔膜进行切片电镜观察，发现细胞质中有大量病毒颗粒，切面为六角形，直径约145～150nm，病毒为二十面体对称结构、无囊膜、似虹彩病毒的病毒粒子。用除菌的病鱼组织滤液感染健康大口黑鲈，被感染鱼死亡率达90％以上。根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白（MCP）基因序列设计特异引物，提取人工感染发病鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织的DNA进行PCR扩增，将扩增片段进行序列测定与分析，结果表明该序列与已报道的鳜（Sinipercachua~0传染性脾肾坏死病毒（InfectiousSpleenandKidneyNecrosisVirus，ISKNV）MCP基因同源性为98％。电镜观察和MCP基因测序分析结果显示，该病毒的分类地位为虹彩病毒科（Iridoviridae）细胞肿大病毒属（Megalocytivirus）。

真鲷(Pagrus major)脂蛋白脂肪酶基因表达与内脏脂肪蓄积营养调控定量研究

采用竞争性PCR方法 ,进行 4种营养状况对真鲷脂蛋白脂肪酶 (LPL)基因mRNA表达水平与内脏脂肪蓄积影响的定量研究。结果表明 ,真鲷LPL基因在肝脏存在营养诱导性表达 ,饥饿、高脂食物均是其表达诱导因子 ;在腹腔肠系膜脂肪组织存在组成性表达 ,其表达水平受摄食状态的影响 ,但饲料脂肪水平却不起作用。当真鲷喂食高脂食物时 ,诱导产生的大量肝脏LPL将为肝脏提供更多的来源于食物的游离脂肪酸 ,使肝脏有可能出现营养诱导性脂肪蓄积 ,但真鲷腹腔肠系膜脂肪组织LPL基因表达水平未出现适应性变化 ,其腹腔肠系膜脂肪组织将不可能作为营养诱导性蓄脂器官。由于上述营养状况对真鲷体重、腹脂指数、肝指数均没有产生显著性影响 ,说明真鲷具有在不同营养状况下与哺乳类相似的维持其内脏脂肪蓄积稳定的代谢机制 ,推测真鲷应存在某种在功能上与哺乳类相似的肥胖基因。

重组虹鳟生长激素酵母对罗非鱼的促生长作用研究

采用表达重组虹鳟生长激素的酵母工程菌Y33作为饲料添加剂投喂奥尼罗非鱼鱼种。结果表明 ,酵母胞内表达的虹鳟生长激素具有生物活性 ,能够经口服被鱼体肠道吸收 。

大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究

根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGF-I基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS-RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明:(1)IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1 317 bp、712 bp和1 941 bp;(2)在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G-A突变;内含子3的第40个碱基为一个"A"的插入-缺失突变,第307位为C-T突变,683位是G-A突变;内含子4上的696碱基处有一个20 bp的插入-缺失突变,在1 563位为G-A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;(3)内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为Hind III限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNP G208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS-RFLP检测方法。内含子4上SNP G1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS-RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;(4)在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNP G1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。

大口黑鲈遗传育种研究进展

我国于20世纪80年代引进大口黑鲈北方亚种,现已成为我国重要的淡水养殖经济鱼类。对近年来国内外大口黑鲈的地理分布与亚种分类、选择育种、杂交育种、多倍体育种、DNA分子标记辅助育种等方面的研究进展进行了综述,并对其进行了展望。

鳗鲡某些繁殖生物学特性的研究

自然界生活的成年鳗鲡,普遍是雌性个体较大,雄性个体较小。体长在400mm以下全为雄性,700mm以上全为雌性。400～700mm之间雌、雄均有出现。随着体长的增长,雄鳗出现率渐减,而雌鳗出现率渐增。肥满度是雌性稍大于雄性。雌、雄个体的体长与体重关系为W=5 596×10-8L3 492,W♀=4 72×10-7L3 165,W♂=1 317×10-8L3 717。体围与体长、消化道长与体长的关系分别为Y=0 22L-34 82,D=0 56L-12 11。达性成熟年龄的雌、雄鳗蓄养在淡水或海水中,其性腺成熟系数都很小。在人工催熟情况下,雌、雄鳗的性腺成熟系数都显著增加;在一定范围内,雌鳗体重与体围都随催熟注射次数的增加而逐渐增大;肝体系数也有一定的增加。

黄喉拟水龟一龄龟生长的研究

对黄喉拟水龟 (MauremysmuticaCantor)一龄龟生长的研究表明 :在自然温度、人工饲以鱼肉的条件下 ,黄喉拟水龟生长 41 8d ,体重由 9 8g增加到 1 0 0 1 g,平均日增重 0 2 2 g ,成活率为 93 4%。体重、背甲长、背甲宽与日龄呈正相关 ,背甲长与宽呈正相关 ,背甲长、背甲宽与体重同样呈正相关。黄喉拟水龟一龄龟在 50 g以下时生长缓慢 ,50 g以上时生长速度明显加快。在相同环境条件下 ,个体间的生长速度差异较大。一龄龟最大个体可为同龄最小个体的

中国养殖大口黑鲈的亚种分类地位探讨

采用形态学方法和微卫星特异分子标记两种方法鉴定了中国养殖大口黑鲈Micropterus salmoides的分类地位。结果表明：中国养殖大口黑鲈的侧线鳞为58～68片，肋骨数为15对，这与原产地大口黑鲈北方亚种较一致；选择鉴别两亚种的特异性微卫星标记（Md06、Msal21）对中国养殖大口黑鲈进行特异性扩增，并以原产地大口黑鲈佛罗里达亚种和大口黑鲈北方亚种样品作为对照，结果为中国养殖大口黑鲈的特异性扩增片段大小和原产地北方亚种扩增条带相同。综合形态学和分子标记两方面的结果，表明中国养殖大口黑鲈应属于大口黑鲈北方亚种Micropterus salmoides salmoides。

大口黑鲈对四种蛋白质饲料原料的表观消化率研究

为大口黑鲈的营养研究和配合饲料研制提供理论依据，试验以Cr2O3为消化指示物，测定了大口黑鲈（Micropterus salmoides）对进口白鱼粉、国产鱼粉、普通豆粕和发酵豆粕的干物质、蛋白质和脂肪的表观消化率。试验饲料由基础饲料和试验原料以70：30的质量比混合挤压成软颗粒饲料。试验结果表明，大口黑鲈对动物性蛋白白鱼粉和红鱼粉的干物质表观消化率分别为78．56％和9．12％，高于植物性蛋白普通豆粕的68．28％和发酵豆粕的72．19％，而发酵豆粕的干物质表观消化率比普通豆粕要高一些。大口黑鲈对4种饲料原料的蛋白质表观消化率在80．21％～85．55％，对4种饲料原料的脂肪表观消化率为81．18％～91．06％。大口黑鲈可以很好地利用4种饲料原料中的蛋白质和脂肪。

转基因水生动物的应用研究

1966年Lin首次报道了将外源基因注入小鼠卵中的显微注射方法。1982年诞生了首例转基因动物——转基因小鼠。1984和1985年转基因虹鳟和鲫鱼研究获得成功。经过二十多年来的努力，转基因水生动物尤其是转基因鱼的研究有了长足的发展。转基因水生动物研究可分为基础研究及应用研究两方面。基础研究方面，与哺乳类相比鱼类产卵量大、胚胎经基因转移操作后不需放回母体内培育，且携带的与人类相关的病原体较少，因此硬骨鱼类成为脊椎动物生物学研究的模型动物，通过转基因以研究基因的结构与功能、基因的表达调控、发育生物学、生理学、遗传学等。应用研究方面，通过转基因技术培育经济性状得到改善的水生动物新品种，以提高其生长速度和饲料转化率，改善品质，控制繁殖或性别表型，增强对病原体的抗性、对环境因子的耐受性或生存能力等；通过转基因使水生动物作为生物反应器表达生产重要药物或生物活性物质；通过转基因改变观赏鱼的表型提高其观赏价值等。有学者预测鱼类将会是首先进行商业性应用的转基因动物，也有学者预测转基因鱼进入市场有望在我国首先实现。笔者对转基因水生动物应用研究方面的进展及存在问题作一综述。

大口黑鲈GHRH-LP和GHRH基因序列同源性、基因结构和时序表达研究

促生长激素释放激素(Growth hormone releasing hormone,GHRH)是生长激素释放调控的重要因子。过去人们一直将鱼类的促生长激素释放激素样多肽(Growth hormone releasing hormone like peptide,GHRH-LP)误认为是GHRH,直到最近才分离出GHRH基因。为了了解GHRH和GHRH-LP基因的结构特征及表达差异,研究克隆了大口黑鲈(Micropterus salmoides)GHRH和GHRH-LP基因,同时应用实时定量PCR技术研究了这两个基因的组织表达及发育时序表达情况。结果显示,大口黑鲈GHRH的成熟肽由27个氨基酸残基组成,GHRH-LP的成熟肽由44个氨基酸残基组成。两个基因均由5个外显子和4个内含子组成,但两者成熟肽编码区在外显子上的分布有明显不同。与其他脊椎动物比较,GHRH同源性为74%—100%,而GHRH-LP同源性为41%—96%,两者间具有一定的相似性(37%—63%)。GHRH基因仅在前脑和延脑中表达,而GHRH-LP基因在中枢神经系统及外周组织中均有表达;在胚胎发育过程中GHRH在神经胚后期检测到表达,其表达水平在仔鱼出膜1d后显著提高,而GHRH-LP在囊胚期及后续发育过程中均检测到表达。基因结构、序列同源性及表达谱研究均表明,GHRH和GHRH-LP存在显著差异,应为具有不同功能的两个基因。

8种随机引物扩增鳜鱼病毒核酸的初步研究

从感染鳜鱼病毒 (Sinipercachuatsivirus)的鳜鱼中分离病毒 ,提纯核酸作模板 ,用 8种带酶切位点的引物 ,进行病毒核酸随机扩增。探讨了在多聚酶链反应 (PCR)过程中 ,引物长度、Mg2

日本鳗鲡初孵仔鱼耗氧率的初步研究

研究了不同盐度、温度、光照条件下日本鳗鲡仔鱼 ( 4 .4 2± 0 .0 34 mm )的耗氧情况。结果表明 ,幼鱼的耗氧率随盐度的升高而下降 ,随温度的升高而上升 ,耗氧率遮光比在自然光下要低。同时还测定了幼鱼的窒息点。

草鱼MyoD基因原核表达研究

采用PCR方法对草鱼MyoD基因开放阅读框进行了改造扩增,构建了草鱼MyoD基因的原核表达载体pBV 220-M yoD,并进行了初步的原核表达研究。结果表明,构建的原核表达载体pBV 220-M yoD含有草鱼My-oD基因完整的开放阅读框;该原核表达载体表达产物的相对分子质量为34 ku,其表达产物占全菌蛋白的10.8%,表达量较低。