草鱼垂体生长激素分离纯化及其抗体制备的研究

应用碱性抽提、亲和层析、凝胶过滤和离子交换层析等技术从草鱼垂体中分离提纯出纯度高的 草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）。用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测表明草鱼ＧＨ与大马哈鱼ＧＨ抗血清 具有明显的免疫交叉反应，而与大马哈鱼催乳素（ＰＲＬ）抗血清没有交叉反应，聚丙烯酰胺凝胶电 泳表明草鱼 ＧＨ为单一蛋白带，其分子量约为２２５００道尔顿；等电聚焦揭示出草鱼 ＧＨ主要由等电 点为４．７和５．０的两条蛋白带组成。用纯化的草鱼ＧＨ制备了其特异的兔抗血清。在ＥＬＩＳＡ测定中， 该抗血清与大马哈鱼ＧｔＨ及牛ＧＨ完全没有交叉反应，而与大马哈鱼ＧＨ只有当其浓度高达２ｕｇ／ ｍｌ时，才有微弱的交叉反应．草鱼 ＧＨ抗血清的效价确定为１： ４００００左右。应用草鱼 ＧＨ及其抗血清 建立了酶标受体测定法（ＥＬＩＳＡ－ＲＡ）并检测了草鱼ＧＨ的生物活性。结果表明，草鱼ＧＨ具有与草 鱼肝细胞ＧＨ受体特异结合的生物活性。免疫细胞化学研究表明草鱼ＧＨ抗血清只与草鱼垂体间 叶（ＰＰＤ）的生长激素分泌细胞特异结合，而与前叶（ＲＰＤ）及后叶（ＰＩ）细胞均无染色反应。

水温与草鱼免疫应答关系的研究

通过在不同水温条件下,用CFRV疫苗免疫后的草鱼血清中和抗体效价和免疫保护力的变化探讨水温与草鱼免疫应答的关系。结果表明:(1)水温在10℃以下,草鱼的免疫应答受到抑制,它以CFRV疫苗的免疫临界温度是10℃;(2)在免疫临界温度之上,草鱼的免疫应答随温度的升高而增强,超过草鱼的适宜生长温度(32℃以上),其应答反应反而有下降的趋势;(3)免疫诱导期的水温是决定草鱼免疫应答发生与否和免疫应答强弱的重要因素之一。

草鱼垂体催乳素的分离、纯化与鉴定的研究

草鱼垂体催乳素的分离、纯化与鉴定的研究陈松林，邓文涛，陈细华，夏盛芹（中国水产科学研究院长江水产研究所淡水鱼类种质资源与生物技术国家重点实验室，沙市４３４０００）催乳素（ＰＲＬ）是由动物脑垂体合成与分泌的一种多肽激素，其在鱼类的主要功能是调节鱼体渗透...

草鱼生长激素非竞争式酶联免疫吸附测定法的建立及鉴定(英文)

应用草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）单克隆抗体及多价兔抗血清建立了草鱼ＧＨ非竞争式酶’联免疫吸附测定ＥＬＩＳＡ系统。用正辛酸法对腹水单抗进行了分离纯化，获得了高纯度的单抗制备物。聚丙烯酸胺凝胶电泳表明纯化的单抗由分子量分别为５５ｋＤ和２５ｋＤ的两条蛋白带组成。用纯化单抗铺底，用兔抗血清作后续抗体建立了一种测定草鱼ＧＨ的非竞争式双抗夹心ＥＬＩＳＡ方法。交叉试验表明该测定系统只与草鱼ＧＨ和基因重组鲤生长激素（ｒｃＧＨ）具有剂量依存的结合反应，而与大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）、牛生长激素（ｂＧＨ）、大马哈鱼促性腺激素（ｓＧｔＨ）、及黑鲢促性腺激素（ｂｓｃＧｔＨ）等均无交叉反应。该 ＥＬＩＳＡ方法的灵敏度可达０．８ｎｇ／ｍｌ，组内变异系数为 ５．９ ％，组间变异系数为７．６％，回收率达９０％以上。初步应用表明，鲤和团头鲂垂体抽提液、草鱼血清、鲤血清及鲫血清在该测定系统中有剂量依存的反应曲线，而大口鲶、黄颡鱼、中华鲟及黄鳝鱼垂体抽提液及大口鲶、胡子鲶和罗非鱼血清在该测定系统中没有交叉反应。

草鱼催乳素抗血清的制备与鉴定

应用从草鱼垂体中分离纯化的催乳素（ＰＲＬ）免疫兔子制备了特异抗血清。用常规酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测表明该抗血清与大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）及促性腺激素（ｓＧｔＨ）完全没有交叉反应，而与草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）有微弱交叉反应。免疫细胞化学染色表明该抗血清主要与草鱼垂体前叶（ＲＰＤ）催乳素细胞发生结合反应，与垂体问叶（ＰＰＤ）细胞有微弱染色反应，但与神经垂体（ＮＰ）及垂体后叶（ＰＩ）细胞则完全没有免疫结合反应。