核酸斑点杂交分析法检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)

于1995年7月在青岛市城阳对虾养殖场采集患暴发性流行病的中国对虾样品，提纯HHNBV并研制了一组地高辛标记的HHNBV核酸探针。采用核酸斑点杂交方法研究了此组核酸探针的灵敏度和特异性。结果表明，此组探针检测HHNBVDNA的灵敏度为62.5pg，对469ng病虾胃中的病毒可以检出；此组探针与3．75ug健康对虾组织和2ng健康对虾DNA均无交叉反应。1997年，应用此组特异性核酸探针检测了发病虾池对虾及紧急抢捕虾，检测结果显示为强烈的HHNBV阳性，表明此组核酸探针在对虾杆状病毒的检测、对虾暴发性流行病的诊断和抗特种病原对虾育种等方面具有很高的应用价值。

用对虾的致病病毒人工感染克氏原螯虾

用从对虾病料提取的无包埋体对虾病毒（ＮＯＳＶ）人工接种淡水的克氏原螯虾，螯虾发病死亡。再用死亡螯虾组织接种健康螯虾传代，传至第９代，接种的螯虾每代都发病死亡。用显微镜观察发病螯虾的组织切片，发现其胃、前肠上皮、鳃、结缔组织等的细胞核明显肿大和嗜伊红着染。经超薄切片观察，在发病螯虾的胃肠部、鳃组织的细胞核内有大量的杆状样病毒粒子，病毒大小为１１０～１４０ｎｍ×３４０～４３０ｎｍ，有囊膜，在细胞核内不形成包埋体。将人工感染致死的螯虾组织悬液上清回归健康对虾，对虾于１～５ｄ内死亡。显示对虾的ＮＯＳＶ人工感染螯虾已获成功。

克氏原螯虾的血淋巴细胞原代培养

取克氏原螯虾（ Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ） 血淋巴液， 与抗凝剂混匀后离心， 去上清， 用含１５ ％ 犊牛血清及１００ Ｕ／ｍＬ青霉素、１００ μｇ／ｍＬ 链霉素的Ｌ１５ 培养液悬浮血淋巴细胞， 移至培养瓶， （２８ ±１） ℃培养。细胞于１２ ｈ 内贴壁， 形态不一， 可见透明细胞、小颗粒细胞及大颗粒细胞３ 种类型， 多数不分裂， 可维持１５ ｄ 以上。上述方法重复至少２５ 次，