中国明对虾caspase2基因克隆及其在抗白斑综合征病毒中的表达分析

采用RACE技术克隆获得中国明对虾caspase2基因cDNA序列全长,并对该序列进行分析。结果显示,中国明对虾caspase2基因全长为1517 bp,开放阅读框长924 bp,5'非编码区长78 bp,3'非编码区长515 bp,命名为FcCasp2。推测该基因编码307个氨基酸,预测分子量为34.21 ku,理论等电点为7.62。同源性和系统进化分析发现,FcCasp2基因与凡纳滨对虾caspase2和斑节对虾caspase的相似性分别为88%和80%,与其他节肢动物caspase家族基因聚为一类。荧光定量RT-PCR结果显示,FcCasp2基因在肝胰腺中的相对表达量最高,在肌肉中表达量最低。WSSV感染后该基因在中国明对虾肌肉、肝胰腺和鳃丝中的表达量有不同的时空表达趋势,表明FcCasp2基因可能参与中国明对虾生物胁迫的应答反应。

中国南海自由生活线虫两个新纪录种描述

发现、描述并图示了我国自由生活线虫两个新纪录种,即须毛拟双单宫线虫Paramphimonhystrella barbula Leduc,2014和漫游环吸咽线虫Cricohalalaimus vagabundus Bussau,1993。须毛拟双单宫线虫特征是口腔细长呈长锥状或漏斗状,化感器卵圆形,具2圈各具10根粗短的颈刚毛,尾锥柱状,锥状部分因具有一个大的尾腺细胞而膨胀,交接刺细长,仅基部稍弯曲,引带短,平行于交接刺的末端。本研究标本特征符合该种原始描述的发现于新西兰大陆坡深海的模式标本特征,只是南海的标本个体稍大,第二圈颈刚毛稍长。漫游环吸咽线虫的特征是细长的身体布满宽的环纹,头端具3圈刚毛状感觉器,化感器纵向伸长,长环状或缝隙状,尾丝状,末端具2根尾端刚毛,形似尾端二叉分支,交接刺弧形弯曲,腹面具翼膜,无引带和肛前辅器,具1根肛前刚毛。该南海标本特征与本种原始描述的发现于东太平洋秘鲁海盆的模式标本的特征基本吻合,只是该标本的尾相对较长,内唇刚毛和体刚毛较短。

北黄海夏季微微型浮游植物的分布

利用荧光显微技术(Epifluorescence microscopy,EFM)对2006年夏季北黄海水域80个站点的微微型浮游植物进行了检测,并对其在平面和垂直分布上的变化以及昼夜变化情况进行了研究。检测到聚球藻(Synechococcus,Syn)和真核球藻(Picoeukaryotes,Euk)两类微微型浮游植物,未检测到原绿球藻(Prochlorococcus,Pro),其中Syn以富含藻红素的Syn细胞(PE细胞)为优势种类,而富含藻蓝素的Syn细胞(PC细胞)数量较少。在荣城湾以东的水域,各水层Syn和Euk的丰度都较其它水域的高。Syn在北黄海冷水团及附近水域下30m深处和底层水体中出现明显的低值区,Euk丰度受冷水团影响不明显。在垂直分布上,水表层和水下10m深处Syn的丰度高于水下30m深处和底层,而Euk在垂直分布上无明显差异。在昼夜变化上,各水层Syn、Euk丰度的白昼与夜间变化趋势无明显区别。

上皮细胞离子通道对雌性生殖道内液体微环境的调节作用：对生殖与不孕的影响(英文)

雌性生殖道内适宜的液体微环境对一系列生殖事件起至关重要的作用。位于生殖道上皮细胞顶膜或基底膜的一系列离子通道和转运体,通过对水、电解质的跨膜转运,从而调节雌性生殖道内液体的分泌与吸收。本综述着重探讨了上皮细胞钠离子通道和囊性纤维化跨膜电导调节体对雌性生殖道内液体容量和成分的调节以及它们在不同生殖事件,比如精子获能及着床中的重要作用。同时对因离子通道失活或失调引起的雌性生殖道内液体微环境稳态失衡导致的一系列病理改变,如卵巢过度刺激综合征、输卵管积水以及不孕提出了新的见解。

微宇宙法分析小檗碱对模拟池塘生态系统的影响

试验设定3个药物浓度梯度处理组和1个对照组,采用微宇宙法分析化感物质小檗碱对模拟池塘生态系统水化指标、浮游生物及养殖对象的影响.结果表明,小檗碱作用下各处理组的pH、DO含量与NO_2^--N含量均呈现缓慢下降趋势,96 h时各试验组DO与NO_2^--N含量与对照组差异显著(p<0.05);而COD、NH_3-N、及PO_4^(3-)-P则呈现缓慢上升趋势,96 h时40 mg·L^(-1)试验组COD与NH_3-N含量与对照组差异显著(p<0.05).小檗碱可以显著抑制模拟池塘生态系统的藻类及小型浮游动物的生长(p<0.05),且对蓝藻的生长抑制作用最强,10 mg·L^(-1)小檗碱作用96 h时对蓝藻细胞密度及生物量抑制率分别为66.2%、63.6%,同时对草金鱼的存活率无显著影响(p>0.05),但此时DO含量较低且COD、NH_3-N含量有所升高,因此在水产上使用小檗碱杀藻的同时,需开增氧机以保证水体中DO含量并酌量添加微生态制剂等降低水体COD及NH_3-N含量.

毛蚶蛋白抗肿瘤活性研究

目的：分离得到毛蚶蛋白活性组分并研究其体外抗肿瘤机制及对免疫细胞的作用。方法：低温水提及硫酸铵沉淀法获取毛蚶蛋白活性组分；MTT法检测50、100、200和400μg/mL的毛蚶蛋白活性组分分别作用24、48和72 h后对人结直肠癌细胞HT-29、HCT116，人肝癌细胞HepG-2，人肺癌细胞A549的细胞毒活性；倒置相差显微镜下观察细胞活性及Giemsa染色观察毛蚶蛋白活性组分对肿瘤细胞及核形态变化的影响，流式细胞术检测毛蚶蛋白活性组分对人结直肠癌HT-29细胞周期及凋亡的影响；MTT法检测毛蚶蛋白活性组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7生长的影响，中性红法测定其对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬能力的影响，Griess法检测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌NO的影响。结果：毛蚶蛋白活性组分对多种人肿瘤细胞系有抑制作用，且呈作用时间与剂量依赖性；流式细胞术结合Giemsa染色发现，其主要引起HT-29细胞G2-M期阻滞，多核细胞增加，并具一定的诱导细胞凋亡作用；在50-100μg/mL下能刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7生长，增强其吞噬能力及NO分泌活性。结论：毛蚶蛋白活性组分具有一定抗肿瘤活性，主要机制为引起肿瘤细胞G2-M期阻滞及诱导其凋亡，且具一定免疫激活作用。

毛蚶抗癌活性蛋白对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的考察毛蚶抗癌蛋白（ASAP）活性组分体外对人慢性粒细胞性白血病K562细胞的细胞毒作用,初步探讨其作用机制。方法 ASAP由毛蚶软体经常规低温水提和硫酸铵沉淀法制备;Bradford法测定ASAP样品的蛋白质浓度,计算蛋白质含量;倒置相差显微镜下观察ASAP作用后K562细胞形态变化,姬姆萨染色观察细胞和细胞核的变化;MTT法检测ASAP对K562细胞存活的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化;Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡和细胞周期相关蛋白胱天蛋白酶原3（35 ku）,胱天蛋白酶3（17 ku）,程序性细胞死亡因子4（PDCD4）和P53的表达。结果 MTT实验结果表明,ASAP 50,100和200 mg·L^-1作用24-72 h对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性,24,48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.851,0.8977和0.8997（P〈0.01）。镜下观察发现,ASAP 200 mg·L^-1作用48 h,K562细胞出现变形或核碎裂等形态变化。流式细胞术结合姬姆萨染色显示,ASAP可浓度依赖性地引起K562细胞凋亡和G2/M期阻滞,其中ASAP 200 mg·L^-1处理48 h,K562细胞早期凋亡率为（32.8±0.1）%〔对照组（3.7±1.1）%〕（P〈0.01）,晚期凋亡率为（31.2±2.2）%〔对照组（9.9±0.8）%〕（P〈0.01）;G2/M期细胞为（55.2±1.7）%〔对照组（15.3±0.8）%〕（P〈0.01）。Western蛋白质印迹法实验结果显示,ASAP作用0-40 h,K562细胞中胱天蛋白酶原3（32 h时）明显下调（P〈0.01）,胱天蛋白酶3表达明显增加（P〈0.01）,而随着ASAP作用时间的延长,PDCD4和P53蛋白表达均下调（P〈0.01）。结论诱导K562细胞凋亡和G2/M期阻滞可能是ASAP细胞毒作用的主要机制;ASAP诱导的细胞凋亡是胱天蛋白酶3通路依赖的,诱导K562细胞凋亡和G2/M期阻滞可能与PDCD4和P53蛋白表达下调相关。

自然养殖水体投喂CpG ODN和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗WSSV的免疫保护作用

用添加CpG寡聚核苷酸(CpG ODN)和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母(VP28-yl)的饵料投喂凡纳滨对虾,进行田间中试实验。投喂30 d后进行WSSV感染实验,评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用。投喂实验结束后,CpG ODN投喂组对虾的相对增重率达到(65.8±7.8)%(P<0.05),这暗示CpG ODN可能具有促生长作用。WSSV攻毒后,CpG ODN和VP28-yl投喂组对虾中WSSV拷贝数与对照组相比均显著降低(P<0.05),相对免疫保护率分别可达到26.7%和36.7%。在投喂结束和WSSV刺激后,CpG ODN组对虾中的呼吸爆发水平均显著升高(P<0.05)。而在VP28-yl投喂组,WSSV引起的细胞凋亡则显著受到抑制(P<0.05)。此外,WSSV刺激后,STAT基因在CpG ODN组和VP28-yl组对虾中的表达水平均显著上调(P<0.05),分别在第5天和第3天达到最大值,而对照组中则显著下调。研究结果表明,CpG ODN和VP28-yl增强了凡纳滨对虾抗病毒免疫力,对养殖对虾病毒性疫病的防控具有显著作用,可以作为免疫增强剂添加在饵料中,具有在养殖生产中推广使用的前景。

毛蚶抗癌蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用

目的:从毛蚶软体部位中分离出具有一定抗癌活性的毛蚶蛋白组分,研究其对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用。方法:以新鲜毛蚶软体部分为原材料,分离获得毛蚶抗癌蛋白组分(命名为NS);倒置相差显微镜观察不同浓度(50、100、200、400μg/mL)NS组分对MCF-7癌细胞生长的影响,将200μg/mL NS组分作用MCF-7细胞不同时间(12、24、48 h)后,Giemsa染色观察癌细胞及核形态的变化,流式细胞术检测NS组分对MCF-7细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:与阴性对照组比较,各浓度NS组分对人乳腺癌MCF-7细胞生长均具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01);倒置相差显微镜下可见200μg/mL NS组分作用MCF-7细胞12 h后,部分细胞收缩变圆、脱落,24、48 h后细胞脱落现象更加明显;Giemsa染色发现,NS组分处理12 h后细胞出现有丝分裂相增加,继而出现多核或核碎裂等现象;流式细胞术检测发现NS组分主要引起细胞G2-M期阻滞;NS处理组凋亡率均较对照组明显升高(P均<0.01),且随着药物作用时间的延长,细胞凋亡比例逐渐增加。Western blot检测发现NS组分作用MCF-7细胞后p53及procaspase-3蛋白表达量均上调。结论:毛蚶抗癌蛋白NS组分体外对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒作用主要通过引起细胞发生G2-M期阻滞、诱导细胞凋亡实现的,期间伴随p53及procaspase-3蛋白表达上调。

海藻种质管理信息系统的开发与应用

建立了一个藻类种质管理信息系统。分析了海藻种质数据间的关系，并根据用户权限和数据逻辑一致性、种质属性的完整性将数据分成4大部分，实现了数据的自动分发和关系建立。针对实际应用设计检索查询功能和人机界面，实现了网络发布功能。

不同过滤条件下黄色物质的吸收光谱演化特征分析

在实验室对青岛近岸现场水样进行处理、分析,获得了原始状态下水样和被过滤(0.22μm,0.45μm)黄色物质水样的吸收光谱数据,除进一步验证了黄色物质光谱分布模式外,还测得黄色物质光吸收随滤膜孔径的变化。30个现场样品在波长380nm处吸收系数统计平均值Ay(380)分析表明,当使用0.45μm过滤器对水样进行处理,所获得的Ay(380)值要比未经过处理的现场水样所测得的Ay(380)值高约2.1%;而用0.22μm过滤器对现场水样进行处理,所获得的Ay(380)值要比未经过处理的现场样品所测得的Ay(380)值高约12.6%,要比用0.45μm过滤器处理的现场样品所测得的Ay(380)值高约10.3%,这些数据的获得为现有已获黄色物质数据的"归一化"和统一评判以及未来黄色物质测量数据的准确性判断与比较提供了参考。

三种脂质体介导的花鲈胚胎干细胞转化效率的比较

通过3种脂质体(genejammer,genejuice和metafectene)介导绿色荧光蛋白基因转化花鲈胚胎干细胞,探讨不同脂质体介导的花鲈胚胎干细胞(LJES1)的转化效率,以及影响外源基因转化效率的因素,如细胞接种时间、初始接种密度、DNA和脂质体用量以及它们之间的比例等。实验发现,genejammer转化LJES1细胞效率最高,适合于该细胞系的转化。对于同一种脂质体,DNA与脂质体用量的比例对于绿色荧光蛋白基因转化LJES1最为重要,DNA与genejammer的比例为1∶6时,转化效率最高,为27.3%;DNA与genejuice的比例为1∶4时,转化效率最高,为12.1%;而DNA与metafectene的比例为1∶3时,转化效率达到最高,为5.3%。随着DNA、脂质体量的增加,转化效率有所提高,但达到一定的用量后,转化效率反而下降。

微生物消毒剂抗性机理

在物体表面和传播介质中,消毒剂能有效抑制或杀死微生物,广泛用于食品、卫生、健康、防疫等领域。在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情期间,全球消毒剂的使用量激增,对有效防控病毒传播和防止疫情扩散起到重要作用。但消毒剂的不正确使用会降低其有效性,甚至会诱导微生物产生抗性,从而增加传染性疾病的传播风险。微生物的消毒剂抗性基因还会通过繁殖传代增殖或在不同种属间水平转移而加剧其污染和传播风险,严重威胁到公共卫生安全。目前,抗生素抗性基因(ARG)的广泛出现引起了全球对公共卫生的关注,但对消毒剂的抗性认识非常有限。本文综述了近年来微生物对消毒剂抗性的研究,着重就微生物通过形成生物膜、降低细胞膜通透性、过量表达外排泵、产生消除或减弱消毒剂的特异性酶、改变作用靶点等方式产生抗性的机理进行综述。另外针对微生物消毒剂抗性的获得和传播,对染色体和质粒介导的抗性基因、环境中微生物消毒剂抗性与抗生素抗性的关联进行了论述。消毒剂抗性基因能通过质粒、噬菌体等可移动遗传元件,以转化、转导或接合的方式转移传播,对科学消毒提出新要求。

苏北浅滩筏架附生绿藻群落结构变化及与环境因子的相关性探究

苏北浅滩是研究浒苔绿潮早期形成机制的重要区域,该区域紫菜养殖筏架上附生绿藻的群落结构变化对浒苔绿潮的发生具有重要影响,环境因素在其中发挥了重要作用。为了探明导致苏北浅滩绿藻群落结构变化的主要环境因素,本文通过分子生物学和种群生态学方法对筏架附生绿藻群落结构进行了研究,结果表明:(1)苏北浅滩筏架附生绿藻群落主要由浒苔(Ulva prolifera)、盘苔(Blidingia sp.)、缘管浒苔(Ulva linza)、曲浒苔(Ulva flexuosa)和其他绿藻5个类群构成;(2)绿藻群落具有明显的演替现象,环境温度是导致绿藻群落结构变化的关键环境因素,适低温性的绿藻逐渐被浒苔等适应较高温度的绿藻取代;(3)浒苔的生物量从3月的1.65 g/m增加到了5月的31.78 g/m,所占比例也从低于5%达到接近40%,生物量的大量积累为绿潮早期漂浮斑块的形成提供了物质基础。本文研究结果为黄海绿潮的早期预警和防控提供了生态学依据。

绿潮迁移过程中环境要素与浒苔藻体生物学特征的相关性分析

浒苔(Ulva prolifera)引起的大规模绿潮起源于黄海南部,在向北迁移过程中生物量迅速扩增,在海州湾附近(35°N左右)迅速增加达到峰值。在绿潮漂浮迁移过程中,海水表层温度、溶解无机氮(dissolved inorganic nitrogen,DIN)和磷酸盐(PO4^(3-)P-)变化显著。本文以迁移过程中的浒苔为研究对象,分析了环境要素变化与浒苔藻体的生物学特征间的关系。结果显示,随着绿潮的漂浮迁移,浒苔藻体光系统Ⅱ最大光化学量子产量Fv/Fm从0.7逐渐降低至0.45左右,光系统Ⅱ实际光化学量子产量Y(Ⅱ)从0.55逐渐降至0.25左右;硝酸还原酶活性(nitrate reductase activity,NRA)从2.7μmol/L NO2^(-)/(mg·h)降至0.5μmol/L NO2-/(mg·h)左右;生殖分配率(RA)从15%逐渐上升至50%左右。相关性分析表明,DIN与浒苔藻体的生物学特征相关性呈极显著,表明在漂浮迁移中,DIN对浒苔的生物学特征至关重要。温度对浒苔藻体光合活性和NRA的影响极显著;光照强度对浒苔藻体光合活性的影响极显著,对NRA的影响显著;盐度和PO4^(3-)-P显著影响浒苔藻体的光合活性和NRA,而这四种环境要素与浒苔形成生殖细胞的相关性不显著。本文认为,绿潮漂浮迁移过程中,浒苔藻体光合活性、营养盐吸收等生物学特征对环境中DIN的变化响应最敏感,其他环境要素对浒苔藻体的影响程度大小依次为温度、PO4^(3-)-P、盐度和光照强度。绿潮漂浮迁移过程中环境要素的变化直接影响了浒苔的生长与生殖,尤其是海州湾附近(35°N左右)是浒苔藻体状态改变的分水岭。

微藻生物技术产业前景和研发策略分析

微藻生物技术近年来得到各国政府和企业的高度重视.本文分析了微藻生物技术产业的发展态势,认为虽然微藻生物能源技术有解决世界能源、环境和粮食问题的巨大潜力,但在近期内不太可能产业化;不过我国和西方发达国家相比,发展微藻生物(能源)技术有一定的生产成本优势.在这种认识的基础上,本文提出了我国发展微藻生物技术产业的研发策略,即微藻生物能源技术的开发重点应该放在基础研究上,微藻生物技术的产业化开发重点放在高附加值产品上,同时兼顾微藻生物技术处理废水.

毛蚶水提物对人肿瘤细胞生长的抑制作用研究

目的考察毛蚶水提物体外抗肿瘤活性,研究其抗肿瘤作用机制。方法MTT法检测毛蚶水提物对9种人肿瘤细胞系生长的影响,并通过Giemsa染色光学显微镜下观察肿瘤细胞核的变化;流式细胞术及TUNEL染色检测毛蚶水提物对HT-29细胞周期的影响和凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspaes-3的表达情况。结果毛蚶水提物对人结直肠癌HT-29、HCT-116细胞,肝癌HepG-2、BEL-7402细胞及肺癌A549细胞具有较强的抑制作用,抑制作用呈作用时间和剂量依赖性。流式细胞术结合细胞Giemsa染色结果显示,毛蚶水提物能引起人结直肠癌HT-29细胞G2-M期阻滞,多核细胞增加。TUNEL染色显示毛蚶水提物有一定诱导细胞凋亡的作用。400μg.mL-1毛蚶水提物对HT-29细胞Caspase-3蛋白的表达具有下调作用。结论毛蚶水提物体外具有广谱抗癌活性;毛蚶水提物抑制人结直肠癌HT-29细胞生长的主要机制为诱导细胞凋亡及引起肿瘤细胞G2-M期阻滞,进而形成多核细胞,最终导致肿瘤细胞死亡。

寡核苷酸药物及寡核苷酸制备技术研究进展

寡核苷酸是生物医学和生命科学研究中调节基因表达的基本工具,并被开发为基因靶向治疗药物,用于治疗病毒、肿瘤和遗传病。寡核苷酸药物主要包括反义寡核苷酸、小干扰RNA、核酶、脱氧核酶、反基因、Cp G寡核苷酸、转录因子诱饵和核酸适配体等。天然的寡核苷酸在体内很容易被降解,特异性低,且有毒副作用。因此,药物寡核苷酸通常带有特定的修饰基团,如硫代磷酸二酯键、氟代、甲基以及锁核酸等,以增强寡核苷酸在体内的稳定性,提高特异性,并降低其毒副作用。目前,寡核苷酸主要采用化学方法合成,但化学合成的寡核苷酸初产物纯度低,而纯化十分困难。大规模核酸合成仪和纯化设备十分昂贵,因而大量合成和纯化寡核苷酸的成本高昂,大大限制了寡核苷酸药物的研究和应用。尽管已经涌现了多种多样的核酸扩增和检测方法,但用于扩增寡核苷酸的方法极少,且均不适合大量制备寡核苷酸。一种新的基于热循环的寡核苷酸扩增方法,称为"聚合酶-内切酶扩增反应"(Polymerase-endonuclease amplification reaction,PEAR),能够使寡核苷酸等小分子核酸在双酶催化下,利用独特的"滑动-切割机制"进行自我复制,并实现指数扩增。PEAR反应简单、高效、稳定。该方法已成功制备硫代和氟代修饰的寡核苷酸,与化学合成法相比,该技术不依赖于大规模DNA合成仪,降低了生产成本,适合大量生产高纯度的寡核苷酸,将有助于推动寡核苷酸药物的研究和应用。

北欧海海水可培养细菌多样性

【目的】为了解北欧海表层海水可培养细菌多样性与所在水文环境的关系。【方法】利用2216E、R2A和海水培养基对该海域暖流区、寒流区、海盆区及交汇区等多个区域不同站位的表层海水样品中的可培养细菌进行分离培养,通过16S r RNA基因测序对分离的菌株进行分类鉴定,并构建系统发育树进行系统发育分析。【结果】从北欧海表层海水中共分离到407株细菌,通过RFLP分析选取其中154株进行测序,结果表明此154株细菌分属于3个门,18个属,27个种。3个门包括变形菌门、厚壁菌门和放线菌门,优势属为假交替单胞菌属、嗜冷杆菌属等,优势种为食琼脂假交替单胞菌、海雪嗜冷杆菌等,并分离到闪烁交替单胞菌等多株嗜冷菌。比较不同区域的微生物多样性可以看出,γ-变形菌纲的细菌在各个区域均占较高比例。交汇区的细菌多样性最高,分离到了10个不同属的细菌,而海盆区细菌多样性最低,只分离到了4种。除了海盆区外,其他3个区域的样品中都分离到了特有的类群。【结论】从以上结果可以看出,北欧海域有较为丰富的微生物资源,且交汇区微生物多样性较其他区域高。