紫菜分子遗传学研究进展

紫菜因其重要的经济价值和独特的生物学特性而颇具研究价值。近年来,紫菜遗传学研究随着分子生物学技术的进步得以迅速发展,本文从分子标记技术在紫菜遗传学中的应用以及紫菜基因组的研究两方面对紫菜的分子遗传学发展现状作一综述。

禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗设计、表达制备及动物实验研究

目的设计并获得一种安全、高效,并能对以H5N1亚型为主的多种禽流感病毒亚型产生保护的复合基因工程疫苗。方法利用分子生物学和分子免疫学方法对国内以及周边国家流行的禽流感毒株进行全面分析,利用生物信息学技术合理设计亚单位加表位的全新复合结构疫苗的氨基酸序列;利用大肠杆菌密码子优化技术根据疫苗氨基酸序列获得基因序列;通过全基因合成的方法获得该疫苗的基因,并通过大肠杆菌表达系统对该疫苗进行表达;目的蛋白经过包涵体洗涤和色谱纯化后复性;通过ELISA评价其抗原特异性,并乳化制备成禽流感蛋白疫苗,通过小鼠体内免疫试验检测其免疫效力。结果设计了包含通用性的辅助性T细胞表位、B细胞表位以及CTL表位的串接疫苗结构;全基因合成获得了该复合疫苗的基因序列;该基因在大肠杆菌表达系统中得到了高效表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白30%;经过粗纯和精纯后的目的蛋白纯度达到95.5%,复性后获得可溶性蛋白溶液,浓度可达2.4 mg/mL。结论通过小鼠实验,验证了该H5N1亚型基因工程疫苗的抗原性,证实该基因工程疫苗在免疫小鼠体内激发体液免疫的同时调动了细胞免疫。小鼠免疫试验证明,该疫苗可以在小鼠体内有效诱发免疫应答。

青岛裙带菜孢子体野生种群遗传多样性的AFLP分析

采用优化的基因组总DNA提取方法,按照经典的AFLP分析路线,对30株青岛近海野生裙带菜（Undaria pinnatifida）孢子体种群内遗传多样性进行了AFLP分析。利用1对引物扩增出38条清晰可重复的带,其中32条呈现多态性,多态位点比例为84.21%,根据引物扩增的指纹图谱,计算出的种群内部平均观测等位基因数（Na）为1.8421、平均有效等位基因数（Ne）为1.3754、平均基因多样性指数,即Nei’s基因多样性指数（H）为0.2351,Shannon’s多样性信息指数（I）为0.3684。该种群内遗传距离的分布范围从0.0267-0.8044,结果显示,野生种群内个体间各项遗传指数水平均较高,种群内遗传变异丰富。聚类分析表明,在遗传距离为0.21的阈值处,30个个体划分为2大类群,推测青岛野生裙带菜进化上在遗传距离为0.21时发生第一次分化。

中国明对虾脑发生和分化的细胞学观察

采用组织学和细胞学方法,初步研究了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)脑的发生和分化过程。成神经细胞起源于原肠胚期,至膜内无节幼体期位于幼体前端;脑神经节起始于无节幼体Ⅰ期(N1),1对;无节幼体Ⅲ期(N3)脑神经节前端愈合;状幼体Ⅰ期(Z1)分化出嗅脑和前中后脑,此时前脑和中脑前端两侧愈合;仔虾期脑的大部分已经愈合,但后脑仍分离。随发育脑体积增加,髓质占脑体积的比例增加。脑神经细胞在无节幼体Ⅵ期(N6)初步分化为2类:Ⅰ类神经细胞核着色浅,异染色质较少;Ⅱ类神经细胞着色深,核内异染色质较多。神经分泌细胞(NSC)在Ⅱ期(Z2)出现,胞体巨大,电镜下可见分泌颗粒;随着发育该细胞数量逐渐增多。神经细胞体群在糠虾期(M)部分形成,至仔虾期(P)主要神经细胞体群初具规模。中国明对虾至仔虾早期脑的基本结构已经分化完成,但神经分泌细胞的种类和数量的增加有待进一步的发育完成。[中国水产科学,2007,14(1):15-22]

石鲽仔、幼鱼性腺发育的组织学观察

利用组织学方法对人工培育的石鲽(Kareius bicoloratusBasiewsky)仔、幼鱼性腺发育进行研究。结果表明,性腺的发育与体长密切相关。刚孵化石鲽的原生殖细胞数目为2个,孵化3 d数目增至8个,之后经过迁移,至孵化9 d到达生殖嵴。在全长为7.2～8.5 mm(孵化9～11 d)的仔鱼中,性腺原基中的体细胞迅速增殖并包围原生殖细胞,后者在全长10～15 mm(孵化后10～35 d)的仔幼鱼中增殖成为生殖干细胞。原始性腺在全长15～30 mm(孵化40～60 d)的幼鱼中逐渐发育完善,呈细线状,位于腹腔后部中肾管下方紧贴体壁。雌性性腺最早在全长32.5 mm(孵化66 d)的个体中出现分化特征,至全长89～102 mm时雌性性腺特征完全分化。雄性性腺的分化较雌性性腺晚,最早在全长为91 mm的幼鱼中开始,至全长为114～118 mm时雄性性腺分化特征已经十分明显。

硫应激单环刺螠差异表达的初步研究

采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究了100μmol/L硫化物环境与正常海水中耐硫生物单环刺螠mRNA的表达差异,初步筛选出7条体腔液细胞的差异表达基因,其中1个cDNA克隆片段与其它物种的MAP kinase kinase kinase(MAPKKK)有较高同源性。进一步采用RT-PCR技术对其在硫化物刺激前后的表达进行了检测,结果显示该基因在对照和应激后2 h6、h的个体中表达较弱;刺激12 h后表达量增高,并随应激时间增加,呈明显上调趋势。表明单环刺螠MAPK信号通路可被硫化物刺激激活,进而通过该信号通路调节下游生理反应,为进一步研究单环刺耐硫特性的分子机制奠定了基础。

刺参vasa-like基因克隆及其在组织中的表达分析

vasa基因编码DEAD-box家族成员中一种ATP依赖的RNA解旋酶,在生殖系分化过程中发挥着重要的作用。本研究采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从刺参(Apostichopus japonicus)精巢中克隆得到vasa的全长cDNA序列。该cDNA序列全长2167bp,开放阅读框1593bp,编码530个氨基酸,具有DEAD-box家族蛋白的全部9个保守域。经同源比对和系统进化分析,确定其属于DEAD-box家族的VASA亚家族成员。利用半定量RT-PCR检测,vasa mRNA专一性的在刺参性腺中表达,据此,刺参vasa基因有望用于其生殖系起源和分化的研究。

紫菜属生活史和繁殖方式多样性的研究进展

综述了紫菜属种间以及种内的生活史多样性和繁殖方式多样性,以及减数分裂发生位置和性别形成等相关方面的研究进展;旨在加深和完善对紫菜属生活史和繁殖方式的认识,并推动近年来受本领域关注的对生活史多样性的形成机制的研究及其在育种实践中的应用。

脱色优势菌DRBD-6的初步研究

本研究以黄河泥土、小清河淤泥样品为研究对象,从样品中分离、筛选到了1株对偶氮染料酸性红B有脱色优势的细菌DRBD-6。对该菌的形态观察、生理生化实验的结果,可以初步判定该菌属于奈瑟氏球菌科中的不动杆菌属。以温度、pH、时间设计的正交实验优化了该菌的脱色条件,结果表明,DRBD-6菌株最佳脱色条件是pH=7,T=42℃,t=24 h。

西北太平洋沉积物中细菌多样性的研究

利用提取且纯化的西北太平洋地区深海沉积物DNA为模板,利用细菌通用PCR引物扩增16S rDNA片段,构建其文库,建立阳性克隆子RFLP(Restriction Fragment Length Polymor-phism)酶切图谱.据酶切图谱选择部分克隆测序,并与数据库中的序列进行比对.结果表明,测序的27个序列分属于4个类群:变形细菌(Proteobacteria)、绿屈挠菌(Chloroflexi)、浮游霉菌(Planctomycetes)和酸杆菌(Acidobacteria);其中以变形细菌最多,占62.96%.

禽流感疫苗研究进展

禽流感是一种禽类的烈性传染病,在世界范围内广泛流传,严重威胁着养禽业.尤其是高致病性禽流感的流行,病死率极高,常常使国家和人民蒙受巨大的经济损失.禽流感的传染性极强,并可跨物种进行传播,禽流感作为一种全新的病种,已成为人类健康和生命的严重威胁,而面对禽流感病毒的侵害,人类自身却毫无免疫防护,所以必须加强禽流感的预防.由于禽流感病毒广泛存在于各种禽类和野生鸟类体内,因此禽流感的控制是一项长期艰巨的任务,疫苗的开发和使用是应对这项艰巨任务最实际、最有效和最经济的手段.理想的疫苗应该是在具备良好的安全性的前提下,不仅能够调动机体的体液免疫,产生病毒中和抗体,更能够充分调动机体的细胞免疫来充分发挥病毒清除机制.

三种赤潮藻多克隆抗体制备及特异性分析

中国是全球受赤潮危害较重的国家之一(周名江等,2001),随着现代化工农业生产的迅猛发展,沿海地区人口的增多,大量工农业废水和生活污水排入海洋,导致近年来赤潮的频繁发生和规模的不断扩大,严重破坏了渔业资源和海产养殖业,并威胁着人类的生命安全。中国海岸线较长,引起赤潮爆发的藻种种类多样,赤潮异弯藻(Heterosigmaakashiwo)、共生甲藻(Symbiodinium sp.)、链状亚历山大藻(Alexandrium catenella)等藻种是常见的赤潮藻,危害较为严重,也是目前研究较多的主要赤潮藻。