橡胶草悬浮细胞遗传转化体系的建立

橡胶草(Taraxacum koksaghyz Rodin),也称为俄罗斯蒲公英,是菊科菊苣族蒲公英属多年生宿根型草本植物,目前被认为是一种潜在的产胶替代植物和研究橡胶生物合成的理想模式植物。为了建立橡胶草悬浮细胞的遗传转化体系,笔者测定了悬浮细胞对农杆菌抑菌剂替卡西林(Ticarcillin)以及对潮霉素(Hygromycin B)的敏感性;采用携带p CAMBIA1302的根癌农杆菌GV3101侵染悬浮细胞,用绿色荧光蛋白(GFP)和潮霉素来检测转化的成功率。结果表明:0~300 mg·L-1的Ticarcillin对悬浮细胞的生长和增殖没有影响,用于进行抗性愈伤筛选的潮霉素适宜质量浓度为10 mg·L-1。抗性愈伤的绿色荧光镜检(GFP检测)以及潮霉素和GFP基因的PCR检测均表明,将OD600值为0.6的携带p CAMBIA1302农杆菌按照细胞菌液与悬浮细胞的比例为1∶1.2混合侵染30 min后移至共培养基培养10 d,再移至选择培养基进行筛选培养可高效获得转基因阳性的愈伤组织。本研究为进一步优化橡胶草悬浮细胞遗传转化体系奠定了基础。

巴西橡胶树HbICE2基因的克隆及表达分析

ICE(inducer of CBF expression)介导的非依赖ABA信号传导途径在植物应对低温胁迫反应中起重要的调节作用。采用RT-PCR技术从橡胶树无性系热研8-79的叶片中扩增到1条全长c DNA,共1 677 bp,包括1 593 bp的开放阅读框,编码530个氨基酸,含有bHLH结构域,其中包含19个特征性的保守KMDRASILGDAI(D/E)YLKELL氨基酸序列,命名为HbICE2(Gene Bank登陆号:KY406163)。该基因编码的蛋白分子质量为58.02 KDa,理论等电点为5.95。荧光定量PCR分析结果表明,HbICE2主要在叶片和树皮中表达,而且在原生皮中的表达量显著高于再生皮,在抗寒性较强的橡胶树无性系PR107的树皮中表达量显著高于抗寒性弱的橡胶树无性系热研8-79。HbICE2可能在橡胶树树皮应对低温胁迫的反应中起重要的调节作用。

橡胶园长期间作理论探讨

为探讨胶园长期间作技术,分析了胶园间作现状,探讨了胶园长期间作理论。胶园间作是增加胶园产出,提高胶农收入有效和快捷的重要途径,但目前只有部分1~3龄的幼树胶园间作和少量中老龄胶园仅间种几种耐荫作(植)物,多数胶园或胶园多数时间内未能开展间作利用。未能开展间作的原因是可间作时间短或可间作作物种类少等。导致可间作时间短或可间作作物种类少等的原因是胶园内光照等环境条件有规律性或不确定性的变化,而这种变化与橡胶树树冠生长习性有关。降低种植密度、加宽行距和修剪树冠可改善园内光照等条件,但有效期短或导致橡胶减产等。由于园内光照条件等的变化主要是因橡胶树树冠生长习性所致,因此必须考虑和利用橡胶树树冠生长习性才能高效地构建比较稳定的且有一定强度光照等的园内环境。由此推测,选用以直立型树形或小树冠橡胶树品种为种植材料,结合较宽大行的宽窄行种植形式为核心技术建设胶园,辅以不作诱导分枝和大行间开展合理间作等栽培技术措施,即胶园全周期间作模式有可能实现胶园长期间作生产。

一种用于观察木薯显微结构的冰冻切片技术

采用直接包埋法冰冻切片、蔗糖保护法冰冻切片和石蜡切片3种方式对木薯的根、茎、叶等组织进行切片,并在显微镜下观察和拍照。结果表明,在合适的蔗糖浓度下,蔗糖保护法用于木薯不同器官的冰冻切片,可以真实的反映细胞的显微结构,且切片组织完整性和图片清晰度效果良好。