黎药艾纳香化学成分研究

目的:研究黎药艾纳香的抗菌活性成分。方法:采用硅胶柱色谱、凝胶色谱、高效液相色谱和波谱学技术对艾纳香进行系统化学成分分离和鉴定。结果:从黎药艾纳香中共分离得到12个单体化合物,分别鉴定为:6,7-二羟基香豆素(1)、蚱蜢酮(2)、反式对羟基桂皮酸(3)、双(4-羟苄基)醚(4)、原儿茶酸(5)、原儿茶醛(6)、3-(hydroxyucetyl)indole(7)、咖啡酸乙酯(8)、sterebin A(9)、eugenyl-O-β-D-glucoside(10)、4-allyl-2,6-dimethoxyphenol glucoside(11)、blumeaene K(12)。抗细菌活性评价显示化合物4对枯草芽孢杆菌具有较强抑制作用,MIC值为64μg/mL,化合物1、4、5、6、8、11、12分别对大肠埃希菌,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有不同程度抑制活性。结论:其中,化合物1~11为首次从该植物中分离得到,该研究有助于阐明艾纳香抗菌药效物质基础。

艾纳香内生真菌抗细菌和炭疽菌的活性研究

为获得丰富的艾纳香内生真菌资源,筛选出抗性生防菌株,用于活性次生代谢产物的发现,通过水琼脂法对海南产艾纳香进行内生真菌分离,通过ITS序列分析,对其进行鉴定和分析。采用滤纸片法评价内生真菌发酵产物对细菌的抑制活性,采用平板对峙培养法评价艾纳香内生真菌对植物炭疽菌的拮抗作用。本研究共分离鉴定出191株内生真菌,分属于27属,45种,其中优势菌属为Diaporthe、Paraphoma、Ectophoma、Penicillium、Talaromyces、Hypoxylon、Phomopsis、Colletotrichum和Fusarium。抗细菌活性结果显示,Clonostachys、Fusarium和Diapothe属活性较强。抗炭疽病菌试验显示,Talaromyces、Ectophoma和Penicillium属活性较强。本研究初步探讨了海南产艾纳香内生真菌种类的多样性,并首次对其进行了抗病原菌活性筛查,获得的活性菌株可作为微生物源菌剂开发的重要材料。

艾纳香种质资源表型性状遗传多样性分析

【目的】分析艾纳香种质资源表型性状的多样性,为良种选育提供科学依据。【方法】以159份艾纳香种质资源为材料,进行9个数量性状和13个质量性状的测定,并采用遗传多样性分析、相关性分析、主成分分析和聚类分析等方法进行遗传多样性分析。【结果】数量性状中遗传多样性指数最高的是株高(2.072),变异系数最大的是花枝数(32.76%);质量性状中遗传多样性指数最高的是叶片形状(1.201)。相关性分析表明,在数量性状中,冠幅与株高、叶宽、叶柄长度、花枝长度、花枝开张角度呈极显著正相关(P<0.01);在质量性状中,叶脉花青苷显色强度与主茎花青苷显色强度、叶片边缘花青苷显色强度和叶柄花青苷显色强度呈极显著正相关(P<0.01)。前8个主成分的累计贡献率达到64.32%,根据各性状的载荷量大小将各因子依次命名为产量因子、显色因子、叶光滑度因子、叶片边缘因子、叶片形状因子、叶片绿色因子和花枝角度因子。基于表型性状,以离差平方和法在遗传距离为10处将供试材料分为3个类群,类群Ⅰ有39份材料,占总数的24.53%;类群Ⅱ有38份材料,占总数的23.90%;群Ⅲ有82份材料,占总数的51.57%。【结论】159份艾纳香种质资源的表型性状具有丰富的遗传多样性,叶片形状的变异类型较为丰富,叶宽可作为日后选育高产艾纳香种质的指导目标性状。

NAA处理对艾纳香扦插生根生理生化特性的影响

为探讨NAA对艾纳香(Blumea balsamifera)扦插生根的影响,4 a生艾纳香健康枝条用500 mg/L NAA处理,对生根过程中的生理生化特征进行了研究。结果表明,艾纳香扦插生根率与内源IAA、GA含量和IAA/ABA呈正相关,而与ABA含量呈负相关。NAA处理能提高插穗的IAA含量,降低ABA含量,有助于不定根的产生。插穗生根率与多酚氧化酶(PPO)活性正相关,与吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性负相关。NAA处理能够提高插穗PPO活性,降低IAAO活性,对插穗生根有利。可溶性蛋白、可溶性总糖含量与生根率均呈正相关关系。NAA处理可促进插穗的可溶性总糖、可溶性蛋白的积累,提高插穗的细胞分化和代谢能力。因此,500 mg/L NAA处理插穗可促进不定根的生长发育。

萘乙酸对冬季迟缓期的艾纳香生长和有效成分含量的影响

目的研究萘乙酸对冬季迟缓期艾纳香生长和有效成分质量分数的影响。方法以一年生艾纳香种子苗为试验材料,在冬季艾纳香生长迟缓期进行3次喷施萘乙酸。测定艾纳香的株高、地径、叶长和叶宽等生长指标以及生物量。采用紫外-可见分光光度法测定艾纳香不同部位中总黄酮的相对含量,并计算总黄酮的绝对含量。采用GC法测定艾纳香叶片中l-龙脑的相对含量,并计算其绝对含量。结果萘乙酸可以显著促进艾纳香生长,尤其是叶片干质量的积累,其中10 mg/L萘乙酸处理组的叶片干质量最高,为134.73 g,分别是1、100 mg/L萘乙酸和CK处理组的1.70、2.01和7.71倍。不同质量浓度的萘乙酸对艾纳香叶片中总黄酮和l-龙脑影响各不相同。1 mg/L萘乙酸和CK处理组的总黄酮相对含量最高,显著高于其他处理组,并且1 mg/L萘乙酸处理组的总黄酮绝对含量最高。CK处理组的l-龙脑相对含量最高,而10 mg/L萘乙酸处理组的艾纳香叶片中l-龙脑绝对含量最高。结论在冬季艾纳香生长迟缓期施加萘乙酸可以显著促进艾纳香生长和叶片干质量的增加,提高总黄酮和l-龙脑的绝对含量。

镁对生长期艾纳香内源激素、产量和有效成分积累的影响

【目的】明确施镁对生长期艾纳香内源激素、产量和有效成分l-龙脑积累的影响情况。【方法】以1年生艾纳香种子苗为试验材料,用七水合硫酸镁提供镁元素,共设置4个镁水平,分别为0.0(CK)、1.5、15.0、150.0mg·mL^(-1),采用酶联免疫吸附法分别测定艾纳香叶片赤霉素(GA_3)、生长素(IAA)、脱落酸(ABA)、玉米素(ZR)等4种内源激素含量。使用电子秤测定艾纳香药材产量,利用GC测定生长期不同阶段艾纳香叶片有效成分l-龙脑百分含量,通过计算确定l-龙脑单株产量。【结果】在处理第30 d、60 d和第90 d时,不同施镁水平显著增加了艾纳香中GA_3、IAA、ABA和ZR等4种内源激素含量,显著增加了生长期艾纳香药材产量,其中1.5、15.0mg·mL^(-1)镁水平影响效果最显著。在处理第60 d和第90 d时,不同施镁水平下艾纳香中l-龙脑百分含量差异极显著(P<0.01),在处理第60 d时,CK组l-龙脑百分含量最低,较1.5、15.0和150.0 mg·mL^(-1)镁处理组分别显著降低了34.37%、35.48%和25.00%。在处理第90 d时,1.5 mg·mL^(-1)镁处理组l-龙脑百分含量显著高于其他处理组,在处理第30 d和第120 d时,各处理间差异不具有统计学意义(P>0.05)。在整个处理过程中,与CK相比,其他3个施镁水平均显著提高了l-龙脑单株产量(P<0.05)。【结论】在处理第30 d,不同施镁水平显著促进了艾纳香内源激素、产量和l-龙脑百分含量和单株产量的积累。在处理第60 d、90 d和第120 d时,1.5、15.0 mg·mL^(-1)镁素的作用效果较明显,对提高艾纳香药材产量和品质有显著的促进作用。

不同因素对艾纳香扦插生根的影响

为艾纳香的扦插繁殖提供参考,采用4年生艾纳香插条为扦插材料,探讨不同基质、插条部位及生长调节剂对艾纳香扦插生根的影响。结果表明:混合基质(泥炭土∶河沙=1∶1)扦插效果最好,生根率最高,为40.28%;下部枝条扦插效果最好,生根率最高,为47.62%,与其他部位差异显著,根系性状优于其他扦插部位;NAA、K-IBA、ABT、IAA在浓度均为500 mg/L时,NAA的效果最好,生根率显著高于其他处理,为43.81%,且根系效果指数较高,为2.68,显著高于对照。艾纳香扦插时应采用木质化程度最高的下部枝条,以泥炭土∶河沙为1∶1作基质;在生长调节剂浓度均为500 mg/L时,采用NAA处理的插条生根效果较好。

艾纳香MYB转录因子家族生物信息学分析

MYB转录因子是植物中庞大的转录因子家族之一,在植物体内有着广泛的生物学功能。基于艾纳香全长转录组数据库,利用DNAMAN 6.0、MEGA 5.05软件以及ProtParam、WebLogo和SOPMA在线网站分析艾纳香MYB转录因子家族蛋白的分类、理化性质、氨基酸序列高级结构、保守结构域、系统进化等。结果表明,挖掘到127个BbMYB基因,预测47条具有MYB转录因子保守结构域的蛋白序列;根据结构域可分为1R-BbMYB和R2R3-MYB 2个亚类,其中R2-BbMYB与R3-BbMYB基序中都含有3个保守的色氨酸,而R1-BbMYB基序只有2个保守的色氨酸;艾纳香MYB家族蛋白均为亲水性蛋白,热稳定性较高且富含碱性氨基酸,大部分蛋白以无规则卷曲为主,其中R2R3-BbMYB3、R2R3-BbMYB4与1R-BbMYB15蛋白是以α-螺旋为主;与拟南芥MYB转录因子家族共同构建的进化树发现,艾纳香MYB家族在进化上包括2个大类,6个亚类,通过艾纳香与拟南芥MYB蛋白序列相邻或是进化关系近可以预测艾纳香MYB基因功能,为进一步对艾纳香MYB家族基因研究及其功能鉴定提供科学依据。

艾纳香不同提取物GC-MS分析及其抑菌活性

【目的】研究艾纳香不同提取物的化学成分以及对口腔厌氧菌的体外抑菌活性,为艾纳香提取物的开发利用提供科学依据。【方法】采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析了3种艾纳香提取物艾纳香油、艾粉和艾片的化学成分,并采用管碟法、微量肉汤稀释法和琼脂培养基平板法测定3种提取物对4株常见口腔厌氧菌株变形链球菌(Streptococcus mutans)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)和中间普氏菌(Prevotella intermedia)的敏感度、最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC)。【结果】从艾纳香油、艾粉和艾片中分别鉴别出56、19和8种化合物,艾纳香油中化学组分相对艾粉和艾片更为复杂。3种提取物仅含有左旋龙脑1个共有成分,左旋龙脑相对含量分别为13.36%、81.40%和76.07%。体外抑菌试验中艾纳香油、艾粉、艾片对变形链球菌、具核梭杆菌、中间普氏菌均有一定的药敏活性,表现出了中度敏感,3种提取物对牙龈卟啉单胞菌无明显的药敏作用。3种提取物对4种口腔厌氧菌表现出不同程度的抑制作用,MIC为8.34-100 mg·mL^(-1),其中艾纳香油的抑菌效果最强(MIC、MBC分别为8.34-16.68、33.35-133.4 mg·mL^(-1)),艾粉和艾片的抑菌效果并无明显差异。艾粉和艾片对牙龈卟啉单胞菌、艾粉对变形链球菌、艾片对中间普氏菌的MBC值均>200 mg·mL^(-1),杀菌效果均不理想。【结论】艾纳香中不同提取物艾纳香油、艾粉和艾片对多种口腔厌氧菌均具有体外抑菌活性,尤其是对具核梭杆菌抑制作用最强,其中艾纳香油对口腔厌氧菌的抑制作用最强。

基于专利分析探讨我国艾纳香产业发展现状

目的:了解我国艾纳香产业发展的现状及存在的问题,为其可持续发展提供参考。方法:以“艾纳香”“艾片”“艾粉”等为关键词,通过SooPat、Baiten专利平台,收集1989年1月-2020年12月已经公开的艾纳香相关专利数据,采用国际专利分类表(IPC)对其专利信息进行整理、统计,了解艾纳香产业的技术、研究领域等发展状况,分析现存问题,探讨我国艾纳香行业的发展趋势,进而提出相应建议。结果与结论:共收集到艾纳香相关专利690件,以发明专利为主;其中,授权率为27.39%,有效率为17.97%,失效率为55.22%。申请量最多的前10位申请人的申请量共计165件,占总申请量的23.91%;这10位申请人包含4家企业、3位自然人和3所高校院所。艾纳香相关专利主要分布在贵州、山东、安徽、广东、广西、海南等省区,其申请量占艾纳香相关专利总申请量的81.01%。艾纳香相关专利的技术领域已从传统的中医药扩展到日化品、保健理疗等日用消费品领域。从专利强度来看,专利的申请量与质量不协调,无意义专利申请多且转化率低。我国应加强艾纳香及其配伍药物的研究,推动艾纳香产业的创新发展和转型升级;加强对艾纳香的系统深入研究,提升专利技术的质量与转化率,振兴艾纳香产业的发展;扩大多方合作,加强专利核心技术研究,构建艾纳香产业知识产权战略联盟,实现艾纳香产业的高质量发展。

艾纳香插条不定根发生与发育的解剖学观察

以四年生艾纳香当年生枝条为研究对象,采用硬组织切片法对艾纳香插穗进行解剖学观察,研究艾纳香茎的次生结构及不定根的发生及发育过程,探讨影响不定根发生的因素。结果表明,从外部形态观察,艾纳香属于皮部生根型;从解剖学角度观察,艾纳香插穗内未发现潜伏根原基,属于诱导生根型。艾纳香茎的次生构造从外至内由表皮、皮层和维管柱3部分组成。不定根发育过程分为4个阶段:①维管形成层与木射线交叉处的细胞活动,产生薄壁细胞团;②薄壁细胞不断分裂,形成不定根原基原始细胞;③不定根原始细胞继续分裂分化,形成不定根原基;④不定根原基分裂,形成不定根,并突破皮层。

黎药复方牙膏的制备及其抑菌作用评价

以黎药艾纳香和裸花紫珠为功能性添加剂,采用正交设计法,以膏体成形情况、膏体形态、稳定性与泡沫量的综合评价方法进行空白膏基基质筛选,在最佳空白膏基配方基础上,优选功效物质与矫味剂质量比。结果表明优选配方制备的牙膏膏体符合国家标准(GB/T 8372—2017《牙膏》),且对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌均表现中度敏感,放置18个月后其抑菌率仍达到国家轻工业标准(QB/T 2738—2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》)的抑菌率标准。

基于指纹图谱和多成分含量测定的艾纳香药材质量评价

目的基于HPLC指纹图谱、化学模式识别以及多成分含量测定相结合的方法,评价不同产区艾纳香药材的质量。方法建立4个不同产区34批艾纳香HPLC指纹图谱,确定共有峰,根据前期提取分离出的艾纳香单体成分指认了其中5个色谱峰并测定样品中含量,结合相似度分析、聚类分析(hierarchicalcluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(partial least squares discrimination analysis,OPLS-DA)等化学模式识别方法以及药材综合质量评分寻找不同产区艾纳香药材中的差异。结果化学指纹图谱共标定15个共有峰,各批艾纳香样品相似度在0.433~0.977,4个产区艾纳香样品在化学组分和含量上存在差异。4个产区的艾纳香药材基本上可以分为4类,每个产区大部分样品各自分布于不同的象限,不同产区之间有交叉样品,样品之间的离散程度较大,每个产区的样品本身质量就存在较大差异,尤其是海南和广西样品。通过变量权重重要性排序(variable importance in projection,VIP)值图确定了5个产区差异性指标成分,综合质量评分中3份海南琼中产样品评分排在前3位。测定5个黄酮类成分含量中3,3′,5,7-四羟基-4′-甲氧基二氢黄酮、圣草酚、3,3′,5-三羟基-4′,7-二甲氧基二氢黄酮和sakuranrtin均以贵州产整体含量较高,艾纳香素以海南产整体含量较高。结论结合HPLC指纹图谱、HCA、PCA及多指标定性定量等分析方法可以更全面地评价艾纳香药材质量,为艾纳香药材质量控制和优良种质资源选育提供参考依据。