甘蔗赤腐病菌生物学特性研究

对采集的甘蔗赤腐病典型病叶进行了病原菌的分离与鉴定,进而对该病菌进行了致病性及基础生物学特性测试。结果表明:甘蔗赤腐病由Colletotrichum falcatum引起;生物学特性结果表明,该菌在燕麦片和Richards培养基生长最好;菌丝体生长最适温度为25～30℃;适宜pH 6～8;而光照条件对病原菌的生长影响并不明显;该菌分生孢子的致死温度为60℃,10 min。本研究为甘蔗赤腐病的合理预测和科学防治提供了理论依据。

海南异歧蔗蝗生物学习性及4种农药对其毒力测定

异歧蔗蝗Hieroglyphus tonkinensis I.Bol是竹子、甘蔗、水稻及其他禾本科作物的重要害虫,其自2006年首次在海南爆发成灾以来,危害逐年加重。为深入了解异歧蔗蝗在海南的发生与危害,寻找适宜且经济有效的测报及防控措施,近年来对其生物学习性进行了系统观察和研究,并对其有效的防治措施做了探究。结果表明:异歧蔗蝗在海南一年发生1代,为害期约150 d。以卵在土中越冬,若虫4月中旬孵化,根据气温高低可能提前或推后10 d左右,成虫羽化高峰期在6月上中旬,9月上旬陆续死亡。温度与异岐蔗蝗若虫和成虫生长发育关系的研究表明,28℃是异岐蔗蝗生长发育的最适温度,成虫产卵量最大,寿命最长。4种药剂对其毒力测定表明,锐劲特和阿维菌素具有较好的毒杀效果。防治异歧蔗蝗要以3龄前若虫为主,以阿维菌素烟雾剂防治竹林及蔗田异歧蔗蝗具有较好的效果。

假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱的生物活性及代谢酶活性的影响

为研究假蒟对螺旋粉虱的作用效果及对体内酶活力的影响,在实验室采用叶片浸渍法测定了不同浓度的假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱成虫、若虫和蛹的生物活性,并用生化方法测定了成虫体内几种代谢酶的活性变化。结果显示,假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱具有良好的生物活性,且随着处理时间的延长,活性增强,其活性大小为成虫若虫蛹。处理168 h时,假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱若虫的LC50值(0.932 mg.mL 1)仅为处理24 h时LC50值(2.207 mg.mL 1)的42.23%。处理72 h时,假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱成虫和若虫的LC50值(0.430 mg.mL 1和1.303 mg.mL 1)分别为蛹(1.894 mg.mL 1)的22.70%和68.79%。经假蒟石油醚萃取物处理24 h后,螺旋粉虱成虫体内的乙酰胆碱酯酶(AchE)、羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)等代谢酶均受到一定程度的抑制。10 mg.mL 1的假蒟石油醚萃取物对3种酶的抑制率分别为82.53%、82.79%、52.26%,但低浓度的假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱成虫CarE、GSTs两种酶的活性反而有诱导现象,其中对GSTs诱导效应较为明显。由此表明,假蒟石油醚萃取物对螺旋粉虱有明显的毒杀作用。

温度对橡副珠蜡蚧实验种群的影响

在不同温度条件下(15、18、20、23、25、27、30、32、35℃),观察温度对橡副珠蜡蚧发育、存活及繁殖的影响。结果表明:橡副珠蜡蚧世代发育历期开始随温度升高而缩短,25℃最短,为84.3d,之后随温度升高其略有延长,到32、35℃不能完成世代发育;存活率以25℃最高,为57.24%,高温和低温均不利于存活;世代的发育起点温度为10.0℃,有效积温为1483.5日.度;净生殖率、内禀增长率及周限增长率均以25℃最大,分别为358.41、0.0533、1.0548。综合可知,橡副珠蜡蚧的最适生长温度为23～27℃,此温度下,该种群数量增值速度最快。

9种热区植物白粉病菌的rDNA-ITS序列及系统发育分析

为弄清橡胶树、野艾蒿、大尾摇、胡萝卜、车前草、马占相思、红木、苦瓜和九里香等热区植物上白粉病菌的种类和彼此之间的系统发育关系,对这些白粉病菌的rDNA-ITS序列进行扩增和测序,与GenBank上公布的序列进行同源性比对,并进行分类。结果表明:橡胶树、马占相思、红木和九里香上的白粉病菌相似性非常高,均在99%以上;野艾蒿、大尾摇和苦瓜白粉病菌与叉丝单囊壳白粉菌的亲缘关系较近,分别达到100%和99%;胡萝卜白粉病菌与白粉菌属的独活白粉菌相似性在99%以上;而车前草白粉病菌与污色白粉菌的相似性达100%。利用供试菌和GenBank上公布的rDNA-ITS序列构建了系统发育树,将供试白粉菌分为4个类群,确定供试白粉菌之间的亲缘关系。

橡胶树褐根病菌的分子检测

利用褐根病菌的一对特异性引物G1F/G1R,对不同来源橡胶树褐根病菌菌株的r DNA-ITS区进行PCR扩增,对发病组织进行分子检测,并构建橡胶树褐根病菌系统发育树。结果表明:10株不同来源橡胶树褐根病菌菌株DNA均能扩增出一条653 bp的特异性片段,而橡胶树红根病菌、紫根病菌、臭根病菌、白根病菌和清水对照均无扩增条带。发病组织检测结果表明,该引物能特异性检测到橡胶树褐根病菌的存在。引物对基因组DNA检测灵敏度为100 ag/μL。基于r DNA-ITS系统发育分析结果表明,供试菌株与Gen Bank中的菌株KF233592、KM079591聚在同一分支上,其亲缘关系最近,均属于Phellinus noxius。

木薯根腐病棕榈疫霉病菌的分子检测

由棕榈疫霉引起的根腐病是木薯生产中的重要病害之一。通过比对分析棕榈疫霉与其它疫霉菌ITS序列差异,设计1对特异引物PF1/PR1。结果表明:在优化的反应体系和扩增条件下,利用该引物可从棕榈疫霉菌基因组DNA中特异扩增到1条约540 bp片段,序列测定验证了其准确性,检测灵敏度达到pg级。该对引物可有效用于植物组织和土壤中木薯根腐病棕榈疫霉病菌的特异性检测。此结果将对木薯根腐病的早期快速准确诊断和检测具有重要意义。

香蕉黑星病菌侵入前发育的Ca^(2+)/CaM依赖信号研究

测定Phyllosticta musarum在不同疏水性的人工表面上的孢子萌发率和附着胞形成率,以及Ca2+/CaM依赖信号系统是否参与了P.musarum侵入前阶段的发育调控。结果表明,P.musarum在侵染寄主时形成一种专门的附着胞作为侵染结构,刚性的疏水表面有利于诱导P.musarum分生孢子的萌发。刚性表面则有利于附着胞的形成,而对这种与侵染相关的特化结构即附着胞的发育影响不显著。加入外源Ca2+,不论浓度如何都能促进分生孢子萌发,而附着胞形成率在高浓度外源Ca2+存在时则明显下降。Ca2+敖合剂EGTA有抑制孢子萌发和附着胞形成的作用,但在EGTA中加入Ca2+载体A23187和CaCl2可部分缓解EGTA的这种抑制作用。磷酸酯酶C(PLC)抑制剂Neomycin可以抑制附着胞形成。Ca2+通道阻断剂TMB-8和Nicardipine,CaM拮抗剂Chloropromazine在微摩尔剂量水平上均可抑制附着胞形成。证明由Ca2+/CaM信号系统控制的生化过程参与了P.musarum在寄主香蕉表面侵入前的形态建成。

海南岛蝗虫的遗传多样性分析

蝗虫遗传多样性的变化可用以监测其种群的动态变化,进而有利于研究其发生规律和成灾机理,有效预防蝗灾发生和治理蝗害。对海南岛10种易成灾蝗虫10种酶13个位点的遗传多样性比较分析表明:①10种蝗虫的遗传多样性水平均不高(A=1.5～2.0,P=38.5%～61.5%,Ho=0.005～0.070),且表现出一定程度的杂合体缺乏现象。②生存于热带岛屿海南的蝗虫种类,可能因其与岛外蝗虫种群存在很少或几乎不存在基因交流,也可能因其地处热带,丰富的食料、无滞育、无越冬、田间频繁杀虫剂的选择压力等导致其发生了不同程度的遗传分化,致使其进化关系与以往研究结果不相符。③Est、Mdh-1、Me、Pgi和Pgm在10种蝗虫中均具多态性,等位基因数目变化较大,说明其进化速率快,可通过检测其基因型或等位基因频率的变化来监测种群的动态变化,研究其发生规律和成灾机理,亦可监测其抗药性状况,进而为蝗灾防治提供参考,以降低用药量,提高防治效率。

海南东亚飞蝗的发生与防治

根据多年对海南东亚飞蝗的防治经验,总结了其在海南的发生特点,提出了可行的综合防治方法。

木薯害虫普查及其安全性评估

为适应中国木薯产业的可持续发展需要,于2008～2009年间对木薯害虫、害螨在中国华南地区的分布、危害进行普查,并对2种国家检疫性毁灭性害虫、害螨进行了风险评估和5种主要害虫、害螨对木薯产业及本地生态经济的影响进行了分析。结果表明,海南、广西、广东共查获木薯害虫、害螨36种,其中害虫33种,害螨3种,并在国内首次发现木薯单爪螨和螺旋粉虱危害木薯,朱砂叶螨、蔗根锯天牛、白蛴螬在国内木薯种植区大面积严重发生与危害;木薯单爪螨、螺旋粉虱对木薯均属于高度危险有害生物;目前,木薯害虫、害螨已成为中国热区木薯产业能否可持续发展的重要限制因子之一,对木薯产业及本地生态经济的潜在影响与威胁十分严重。

常用杀虫剂对橡副珠蜡蚧及副珠蜡蚧阔柄跳小蜂的选择毒杀作用

研究6种常用杀虫剂[三氯氟氰菊酯、乐果、高净蚧、敌介灵、毒死蜱及自行混剂(乐果+毒死蜱)]对橡副珠蜡蚧(Parasaissetia nigra Nietner)及其寄生性天敌副珠蜡蚧阔柄跳小蜂(Metaphycus parasaissetiae Zhang and Huang)的毒性。结果表明:乐果、毒死蜱、混剂对橡副珠蜡蚧成虫有明显的毒杀作用,其余药剂对橡副珠蜡蚧成虫的毒性较小;所有供试药剂对橡副珠蜡蚧3龄若虫和跳小蜂成虫毒性大,对副珠蜡蚧跳小蜂幼虫期和蛹期存活影响小,但药剂处理蛹期和幼虫期的跳小蜂都能缩短其羽化后成虫寿命。综合考虑:在橡副珠蜡蚧大发生而跳小蜂较多的胶园可优先选用乐果和毒死蜱进行防治。

荔枝蝽成虫对其臭腺分泌物组分的触角电生理和行为反应

培养皿生物测定结果表明,荔枝蝽Tessaratoma papillosa(Drury)臭腺分泌物的乙醚提取物对成虫有显著的驱避作用。气质联用仪(GC-MS)分析结果表明,荔枝蝽雌雄成虫臭腺乙醚提取物中具有5种挥发性物质,即(E)-2-辛烯醛、十一烷、十二烷、十三烷及一个未知组分。荔枝蝽对(E)-2-辛烯醛、十一烷、十二烷与十三烷这4种组分的触角电生理(EAG)反应结果表明,这些化合物均能引起荔枝蝽成虫的EAG反应,其中(E)-2-辛烯醛引起雌雄成虫触角的反应最强,分别为0.50mV与0.4mV;"Y"型嗅觉仪生测结果表明,(E)-2-辛烯醛对荔枝蝽成虫能产生极显著的驱避作用(P<0.01)。可见,荔枝蝽成虫臭腺分泌物对荔枝蝽具有显著的生物活性,可望通过进一步研究应用于荔枝蝽的防控体系。

国内橡胶树多主棒孢Cassiicolin毒素多样性及致病性分析

由多主棒孢引起的棒孢霉落叶病是橡胶树的主要叶部病害,cassiicolin毒素是病菌的主要致病因子。本研究通过ITS序列分析对供试多主棒孢菌株进行了准确鉴定,利用cassiicolin毒素不同亚型编码基因特异引物对不同地理来源和寄主来源的49个多主棒孢菌株毒素类型进行了分析,并利用生物萎蔫法对不同亚型毒素进行了致病性分析。结果显示,78%供试菌株含有cassiicolin基因,其中Cas2亚型有10个菌株,Cas5亚型有28个菌株,其它为Cas0型(未检测到cassiicolin毒素基因)。含有Cas5亚型的菌株均来源于橡胶树,并且为橡胶树上的优势群体;Cas2亚型菌株则来源于橡胶树、黄瓜、番木瓜和木薯等不同作物;Cas2和Cas5毒素对不同橡胶树品种的致病性存在明显差异。

绿鳞象甲对11种挥发物的EAG反应及对4种寄主的选择性

采用触角电位技术(EAG)测定热带作物主要害虫绿鳞象甲对11种绿叶挥发物组分的触角电生理反应,并以茶树、芒果、柑橘、荔枝等4种绿鳞象甲常见寄主植物为供试对象,对其进行绿鳞象甲的室内选择行为试验。EAG试验结果表明:绿鳞象甲雌雄虫均对反-2-己烯-1-醇表现出最强的EAG反应,对吲哚表现出最弱的EAG反应,两者之间差异显著;从EAG反应值上看,绿鳞象甲雌雄虫对所测定各种化合物的EAG反应强度大小顺序基本一致。室内选择行为试验结果表明:绿鳞象甲对芒果的选择性最强,其次是荔枝和柑橘,选择性最弱的是茶树,说明芒果为其更适宜寄主。

不同光照率对飞机草生长的影响

[目的]研究不同光照率对飞机草生长的影响。[方法]以飞机草为研究对象,在田间测定了不同光照率对其主茎生长高度、主茎叶片数和鲜干重的影响。[结果]适宜的遮阴处理在一定的时间内有助于飞机草株高的增长,但不利于其生物量的积累。光照率越高越有利于飞机草茎叶和根干重的增加。不同光照率处理飞机草的最终高度、叶片数和干重的大小顺序依次是:光照率100%>光照率38%>光照率16%>光照率3%。飞机草在光照率38%以下不能正常开花结果。[结论]对飞机草的防治与利用有重要的意义。

剑麻斑马纹病菌5个多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆与序列分析

以寄生疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶pppg1～pppg5等5个基因c DNA序列为参考,设计基因编码区特异性引物。利用5对引物分别对剑麻斑马纹病菌进行分子检测以及基因同源克隆。通过此方法首次从剑麻斑马纹病菌中获得了5个多聚半乳糖醛酸酶基因,并分别命名为Szpg1～Szpg5。检测结果表明,Szpg1～Szpg5基因普遍存在于被检测剑麻斑马纹病菌中。序列分析结果表明,Szpg1～Szpg5基因与pppg1～pppg5对应基因之间存在核苷酸序列差异,由此导致个别氨基酸的差异,甚至提前终止。由此推测,Szpg1～Szpg5基因与pppg1～pppg5在功能上可能存在着一定的差异。

橡胶树胶孢炭疽菌P型ATP酶基因CgATPase 01的敲除及表型分析

为了了解橡胶树胶孢炭疽菌的一个钙转运P型ATP酶基因Cg ATPase01的功能,本研究利用Splitmarker技术构建敲除载体,通过PEG介导原生质体转化对橡胶树胶孢炭疽菌菌株HBCg01的Cg ATPase 01基因进行敲除,根据表型变化及致病性检测对其功能进行分析。结果表明:通过Split-marker方法获得了敲除突变体△Cg ATPase01,表型分析发现该突变体与野生菌株间存在明显差异,病菌气生菌丝的颜色发生了改变,生长速率降低,产孢量下降,对橡胶树叶片的致病性减弱,推测该基因可能在橡胶树胶孢炭疽菌的产孢、生长发育和致病性等方面具有重要作用。本研究结果为进一步研究胶孢炭疽菌P型ATP酶基因功能和病原菌的致病机理奠定了基础。

剑麻茎腐病菌基因组SSR标记开发

下载 Aspergillus niger ATCC 1015菌株全基因组序列，利用GRAMENE网站提供的SSR鉴定工具SSRIT（Simple Sequence Repeat Identification Tool），并按含有2～10个碱基重复、碱基数在18bp以上的SSR基元为标准进行SSR鉴定。结果从A．niger ATCC1015全基因组中．共发现4000个2～10碱基SSR．其中含9个碱基重复基元类型最多．共有1433个．占所鉴定SSR总数的35．8％。其次为6个碱基重复基元类型，共有753个，占SSR总数的18．8％；接着为3个碱基重复类型，共有547个，占13．6％。从鉴定出来的SSR中，选择含有SSR的合适区段．从中设计了36对引物．对剑麻茎腐病菌17个菌株的基因组DNA进行了PCR检测，发现这些引物都能从剑麻茎腐病菌基因组DNA中有效扩增。由此表明．黑曲霉ATCC1015菌株基因组SSR在剑麻茎腐病菌基因组中具有通用性。这为研究剑麻茎腐病菌群体遗传变异、多样性和进化，定位和克隆功能基因等提供了分子标记．

2%假蒟微乳剂对几种病、虫的毒力测定

利用2%假蒟微乳剂对几种供试菌和试虫进行室内毒力测定。生长速率法进行杀菌剂毒力测定的试验结果表明:假蒟微乳剂对弯孢霉属的抑制效果最好,其EC50仅为3.26mg/L,远低于对照药剂多菌灵的50.71mg/L;胶孢炭疽菌对多菌灵表现极强的耐药性,而假蒟微乳剂则对胶孢炭疽菌抑制效果较好,其EC50仅为14.40mg/L。浸渍法进行杀虫剂毒力测定的试验结果表明,假蒟对蚜虫的活性最高,其LC50为7.110mg/L,对斜纹夜蛾、小菜蛾、菜青虫、橡副珠蜡蚧和椰心叶甲,均表现较好的杀虫活性。