苦丁茶冬青的RAPD影响因素及实验条件的优化

以苦丁茶冬青为材料研究随机扩增多态DNA (RAPD)的影响因素及各种实验条件优化。研究结果表明 :模板DNA的浓度适宜范围为 2 0ng 反应～ 80ng 反应RAPD均可得到一致的结果 ;dNTPs的适宜浓度范围为 2 0 0 μmol L～ 4 0 0 μmol L ;Mg2 + 适宜浓度范围为 1 5mmol L～2 0mmol L ;其合适的复性温度为 35～ 37℃ ;2min的延伸时间 ,4 5次热循环。按照此优化的RAPD条件进行重复实验 ,实验结果重现性良好 ,因而确定了苦丁茶冬青RAPD反应体系之最佳的实验条件。

抗真菌蛋白分子生物学研究进展

对几种抗真菌蛋白的分类、功能进行了综述 。

萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达

根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。

基因及其表达调控中遗传密码选择的偏爱性

遗传密码在基因及其表达调控中具有明显的选择性 .在低等生物及细胞器基因组中 ,同义密码优先选择A、T ;在高等生物的核基因组中 ,同义密码首先考虑C、G ;编码基因的邻近序列对基因转录调控影响很大 .

四川省隆昌县农业产业经营情况及其发展对策

在介绍四川省隆昌县农业产业体系现状的基础上 ,对经营中存在的问题进行了分析 ,进而提出了解决农业产业弊端 。