幽门螺杆菌唾液酸结合黏附素(SabA)的克隆表达

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,简称H.pylori或Hp)唾液酸结合黏附素(sialic acid-binding adhe-sion,SabA)的重组质粒,并在大肠杆菌BL21中表达,为探讨SabA的功能及相关疫苗的发展提供帮助。方法以Hp26695株基因组为模板,设计sabA基因特异性引物扩增目的基因,将PCR产物插入到pGEX-4T-1载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达。表达蛋白经飞行质谱鉴定,并用免疫印迹法评价其抗原性。结果经SDS-PAGE和飞行质谱鉴定,该表达蛋白为Hp外膜蛋白SabA,经免疫印法迹检测具有良好的抗原性。结论成功克隆了Hp的SabA,并能在大肠杆菌BL21中表达,该蛋白具有良好的抗原性。

幽门螺杆菌中国分离株vacA基因多态性分析

目的分析幽门螺杆菌（HP）中国菌株vacA基因多态性。方法对分离自中国7个不同地区、不同胃十二指肠相关疾病患者的119株HP，采用特异引物聚合酶链反应（PCR）方法，对其vacA基因进行PCR扩增。根据核酸电泳中产物片段大小确定vacA等位基因类型并统计分析各型分布。对vacA基因核心片段进行PCR扩增和DNA测序，利用软件MEGA4．0对DNA测序结果进行聚类分析。结果119株HP的vacA基因以sla、m2和il型为主，分别为97．5％（116／119）、68．9％（82／119）和91．6％（109／119）。26．1％（31／119）为mlb；slb，mla未检出。vacA组合基因型以sla／m2／il为主（62．2％，74／119），sla／mlb／il次之（25．2％，30／119）。不同地区、不同疾病来源菌株sla分布的差异无统计学意义（P〉0．05）。而m区基因多态性在疾病类型及分离地区间差异有统计学意义（P〈0．01）。不同疾病来源菌株间i区基因分型分布的差异无统计学意义，但不同分离地区菌株间差异有统计学意义（P〈0．01）。119株的vacA基因序列聚类为三个不同组群。结论HP中国分离株vacA基因型以sla／m2／il组合型为主，sla分型结果与菌株分离地区及疾病类型无关。不同地区、不同疾病来源菌株m区基因分型不同。不同地区菌株vacA基因i区分型不同，但i区基因分型与菌株的疾病来源无显著相关性。