马传染性贫血病毒囊膜蛋白GP90的表达及其免疫效果研究

目的 探索马传染性贫血病毒 (EIAV)野毒株 (强毒 ,LN)和疫苗毒株 (弱毒 ,DLV)的囊膜蛋白GP90作为鉴别诊断试剂的效果及基因工程疫苗的可能性。方法 将中国EIAV疫苗株 (DLV)及其亲本毒株辽毒株 (LN)接种于驴外周血白细胞培养物 ,提取前病毒DNA ,并以其为模板 ,经聚合酶链法 (PCR)扩增出LN和DLV的GP90片段 ,在Bac to Bac杆状病毒表达系统表达。表达的GP90蛋白经金属离子亲和层析 (IMAC)纯化后免疫小鼠 ,ELISA法检测抗EIAV抗体 ,中和试验检测中和抗体活性。同时对DLV和LNGP90的核苷酸与氨基酸进行比较。结果 DLV和LNGP90核苷酸序列的同源性为95 3 % ,氨基酸序列的同源性为 87.7%。未加佐剂组抗体滴度为 80 0 ,佐剂组抗体滴度达 160 0 ;不加佐剂组的中和抗体滴度在 40～ 80之间 ,加佐剂组中和抗体滴度在 80～ 160之间。结论 成功构建了分别表达EIAV野毒株LN和疫苗毒株DLV囊膜蛋白GP90的重组杆状病毒 ,大量表达的蛋白纯化后纯度较好 。