采用流式细胞仪检测艾滋病病毒1型膜蛋白小鼠免疫后IFN-γ的表达

目的通过流式细胞技术检测艾滋病病毒1型(HIV-1)Gp120膜蛋白免疫小鼠后的IFN-γ的表达。方法 构建表达HIV-1gp120基因的复制型重组痘苗病毒。与DNA疫苗联合免疫小鼠,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达。结果 获得表达中国HIV-1流行株gp120基因的重组痘苗病毒rVVgp120、rVVM304,能正确表达Gp120蛋白。与DNA疫苗p120-VRC、pM304-VRC联合免疫小鼠后,用流式细胞仪检测到小鼠脾淋巴细胞能特异性的表达IFN-γ。结论 用流式细胞检测技术成功检测到免疫小鼠的脾淋巴细胞特异性的表达IFN-γ,用此方法可方便快捷地检测小鼠的细胞免疫效果。

马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1∶13,000。

马传染性贫血病毒囊膜蛋白GP90的表达及其免疫效果研究

目的 探索马传染性贫血病毒 (EIAV)野毒株 (强毒 ,LN)和疫苗毒株 (弱毒 ,DLV)的囊膜蛋白GP90作为鉴别诊断试剂的效果及基因工程疫苗的可能性。方法 将中国EIAV疫苗株 (DLV)及其亲本毒株辽毒株 (LN)接种于驴外周血白细胞培养物 ,提取前病毒DNA ,并以其为模板 ,经聚合酶链法 (PCR)扩增出LN和DLV的GP90片段 ,在Bac to Bac杆状病毒表达系统表达。表达的GP90蛋白经金属离子亲和层析 (IMAC)纯化后免疫小鼠 ,ELISA法检测抗EIAV抗体 ,中和试验检测中和抗体活性。同时对DLV和LNGP90的核苷酸与氨基酸进行比较。结果 DLV和LNGP90核苷酸序列的同源性为95 3 % ,氨基酸序列的同源性为 87.7%。未加佐剂组抗体滴度为 80 0 ,佐剂组抗体滴度达 160 0 ;不加佐剂组的中和抗体滴度在 40～ 80之间 ,加佐剂组中和抗体滴度在 80～ 160之间。结论 成功构建了分别表达EIAV野毒株LN和疫苗毒株DLV囊膜蛋白GP90的重组杆状病毒 ,大量表达的蛋白纯化后纯度较好 。