EIAV减毒疫苗诱导的特异性细胞免疫应答

目的研究马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗株接种动物体内诱导的细胞免疫学反应。方法选用健康没有EIAV感染的马,接种EIAV减毒疫苗株DLV,运用流式细胞术检测疫苗株诱导的马外周血单核细胞(PBMC)中CD4和CD8阳性淋巴细胞数量的变化,以及3H测定特异性淋巴细胞增殖反应和51Cr释放实验测定淋巴细胞杀伤反应。结果EIAV减毒疫苗株DLV免疫动物后,能够引起CD8+细胞明显增加,免疫马PBMC在EIAV刺激下,引起EIAV特异性淋巴细胞增殖反应(SI≥3),并能检测出EIAV特异性CTL活性,靶细胞杀伤百分率高于30%。结论EIAV减毒疫苗株DLV免疫动物能够引起特异性EIAV细胞免疫反应,极有可能参与宿主的保护免疫作用。

粘膜免疫相关载体和佐剂研究进展

粘膜免疫系统是机体抵抗艾滋病病毒入侵的第1道免疫屏障,诱导粘膜免疫应答对艾滋病的预防和治疗及疫苗的研制具有重要的意义。对粘膜免疫系统的有效刺激需要合适的粘膜免疫相关载体和佐剂。许多学者在不耐热肠毒素、霍乱毒素、脂质体、细菌载体、聚乙烯亚胺等相关载体和佐剂方面做了众多有益的研究。

携带绿色荧光蛋白基因的单轮感染活性HIV假病毒的建立及其活性检测

目的构建携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒载体,并研究该载体包装的HIV假病毒的感染活性,为进一步进行HIV生物学研究与中和抗体实验室评价搭建安全的技术平台。方法将增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因插入到骨架质粒pNL43LucR-E-的nef基因读码框,获得携带EGFP基因的质粒pNL43EGFPR-E-;通过将pNL43EGFPR-E-与编码HIV膜蛋白的质粒共转染293T细胞,收集上清,获得携带EGFP基因的HIV假病毒。该假病毒感染CD4+CCR5+的HOS细胞后可表达绿色荧光,这样通过流式细胞仪可测定表达绿色荧光的细胞数与细胞感染率。结果携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒感染CD4+CCR5+的HOS细胞后,被感染的细胞可以表达绿色荧光蛋白,细胞的感染率与病毒加入量呈线性关系。结论获得了携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒载体,并建立了具有单轮感染活性的HIV假病毒感染的检测方法。

HIV-1 B'亚型gag-env融合基因的DNA疫苗构建和免疫原性分析

目的构建HIV-1 B’亚型中国流行株gag和env融合基因的DNA疫苗,对其免疫原性进行研究。方法根据已报道的HIV-1 B’亚型RL42分离株gag和env基因的氨基酸序列按哺乳动物密码子使用频率进行优化并人工合成基因,插入真核表达载体pDRVISV1．0中,构建表达RL42 gag- env融合蛋白的DNA疫苗,pSVRL／GE。用Western blot和抗gag p55抗体细胞内染色的方法体外检测pSVRL/GE的表达效率。DNA疫苗pSVRL／GE免疫BALB／c小鼠后,用ELISPOT检测小鼠的细胞免疫反应。结果限制性内切酶鉴定表明融合基因已成功插入pDRVISV1．0载体中,Western blot证实融合基因可有效表达融合蛋白;细胞内染色结果表明,pSVRL/GE转染的293T细胞中49．8％表达gag p55,荧光强度均值为924;而空载体pDRVISV1．0转染的293T细胞中非特异背景染色只有0．5％。经免疫的小鼠脾细胞体外用H-2d限制性表位肽AMQMLKET刺激后,ELISPOT检测显示,pSVRL/GE免疫小鼠每106脾细胞形成226个斑点(SD=140),而空载对照组每106脾细胞形成29个斑点(SD=16)(P< 0．05)。结论所构建的DNA疫苗pSVRL/GE可高效表达相应抗原蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应。

山西省太原市MSM人群HIV-1毒株传播与耐药特征研究

目的了解山西省太原市男男同性性行为(man who sex with man,MSM)人群新报告I型艾滋病病毒(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者毒株传播与耐药特征。方法对山西省太原市2016—2021年MSM人群中部分新报告HIV-1感染者进行调查和采样,提取病毒RNA并扩增获得pol区序列,对序列进行亚型判定、耐药位点和分子网络分析,通过SAS 9.4对数据进行分析。结果共获得505条序列,发现流行的主要亚型为CRF01_AE(44.0%,222/505)和CRF07_BC(37.6%,190/505);2019—2021年较2016—2017年CRF01_AE亚型占比下降13.9%(P=0.007)。该人群的治疗前耐药率为4.6%(23/505),针对非核苷类反转录酶抑制剂和核苷类反转录酶抑制剂的耐药位点,2019—2021年种类有所增加。在1.5%基因距离下构建分子网络,入网率为45.9%(232/505),发现一个含耐药位点G190A的传播簇。logistic回归分析显示,CRF07_BC与CRF79_0107亚型、未婚感染者的入网率较高(P<0.05)。结论2016—2021年太原市MSM人群中HIV-1新报告感染者有9种亚型,CRF01_AE、CRF07_BC和CRF79_0107三种亚型占比超过90%;亚型和耐药位点种类均有增加趋势,并且出现本地传播簇,需加强当地MSM人群的监测与干预。

实时定量PCR检测马传染性贫血病毒载量方法的建立和应用

目的建立实时定量PCR检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标准,在gag保守区设计1对引物和Taqman探针,用于实时定量PCR扩增,用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品,获得标准曲线,对扩增样品进行准确定量.强毒株LN40直接攻毒,或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒,跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况.结果反应在101～109copies/ml之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/ml.强毒攻毒马出现发热并最终死亡,发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关,载量最高达107 copies/ml.免疫攻毒马未出现发热,其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马,攻毒后3个月低至10 copies/ml以下.结论成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法,并证实了用实时荧光定量PCR检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性,为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台.

HIV-1新型重组毒株的不断出现对基因型耐药检测结果解释的挑战

艾滋病的流行仍然是重大的全球性问题。由于HIV的变异与进化,各种新型流行重组型毒株不断被发现。随着高效抗逆转录病毒疗法的推广使用,HIV耐药性的出现和流行传播增加了抗病毒治疗的难度,新型流行重组毒株的耐药情况研究也成为抗病毒治疗的一个不能回避的问题,本文从国内外HIV-1流行重组毒株的流行特点、全球HIV耐药总体水平及重组毒株耐药位点新发现以及表型耐药检测的研究进展几个方面进行综述。

“强仿”拉下高药价

为确保医改顺利实施，国家可通过“强仿”策略实现重要药品和医用器材的国产化，以大幅减轻群众的看病就医负担。