阳离子脂质体联合转铁蛋白对人肿瘤细胞的靶向基因转染

目的研究阳离子脂质体联合转铁蛋白(transferrin ,Tf)介导报告基因虫荧光素酶基因对人肿瘤细胞的靶向转染。方法比较阳离子脂质体Lipofectin、Lipofectin联合含双铁的人转铁蛋白[HTf(Fe) 2 ]介导质粒pDR2 luc转染人肝癌细胞株HepG2 、SMMC772 1、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7的转染效率,转染效率通过以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性估计。结果除COS7外,其余3株细胞以Lipofectin联合HTf(Fe) 2 介导pDR2 luc的转染效率均比单用Lipofectin的转染效率高(P <0 0 1) ,其中HepG2 与SMMC772 1中的转染效率增高8倍多,GRC中的转染效率增高4倍多。结论Lipofectin联合HTf(Fe) 2 介导质粒pDR2 luc转染细胞时对人肿瘤细胸株有一定的靶向作用。

阳离子脂质体Lipofectin介导的β-半乳糖苷酶基因在_及GRC细胞株中的表达

目的 :研究阳离子脂质体Lipofectin介导的 β 半乳糖苷酶基因在不同肿瘤细胞株中的表达。 方法 :质粒pDCβ在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2 、人肾癌细胞株GRC ,然后用X gal细胞化学染色法检测 β 半乳糖苷酶活性。 结果 :β 半乳糖苷酶活性在HepG2 、GRC中均有表达。结论

阳离子脂质体介导的虫荧光素酶基因表达

目的 研究阳离子脂质体Lipofectin介导虫荧光素酶基因在不同细胞株中的表达。方法 质粒pDR2luc在大肠杆菌DH5a中扩增后用碱裂解法提取,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析,通过凝胶电泳及紫外分光光度计分析纯度、定量,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7,然后以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性。结果 荧光素酶活性在4种细胞株中均有表达,且均有显著性差异(均P<0.05)。结论 阳离子脂质体Lipofectin可用于多种真核细胞基因转染。

阳离子脂质体介导的虫荧光素酶基因表达

目的 研究阳离子脂质体Lipofectin介导虫荧光素酶基因在不同细胞株中的表达。方法 质粒pDR2 luc在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,通过凝胶电泳及紫外分光光度计分析纯度、定量 ,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2 、SMMC772 1、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7,然后以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性。结果 荧光素酶活性在 4种细胞株中均有表达 ,且均有显著性差异 (均P <0 0 5 )。

HBV外膜蛋白2型重组腺相关病毒免疫原性

目的观察乙型肝炎病毒(HBV)外膜大蛋白(LP)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-LP)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的rAAV-2-LP单次肌肉注射接种Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBV外膜大蛋白基因cDNA;RIA法检测血清中表面抗体(抗-HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果HBV外膜大蛋白基因已整合到肝细胞染色体DNA,rAAV-LP接种小鼠后第20 d,小鼠体内可出现针对HBV外膜大蛋白特异性CTL,第30 d,血清中可检测到表面抗体。结论rAAV可以介导HBV外膜大蛋白基因转移到小鼠肝细胞;rAAV-2-LP免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。基于rAAV-2载体的HBV疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值。

分泌AFP的人肝癌细胞株中阳离子脂质体介导肝癌组织特异性载体的表达

目的 :研究阳离子脂质体 (cationicliposome)介导甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)启动子 /增强子载体在分泌AFP的人肝癌细胞株中的靶向表达。方法 :测定比较阳离子脂质体Lipofectin介导质粒pDR2 luc、pEBAFluc转染分泌AFP的人肝癌细胞株 (HepG2 )、不分泌AFP的人肝癌细胞株 (SMMC772 1 )、人肾癌细胞株 (GRC)及非洲绿猴肾细胞(COS7)的转染效率 ,通过液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性 ,估计转染效率。结果 :①以Lipofectin介导pDR2 luc转染 4株细胞 ,荧光素酶活性在 4株细胞中均能表达 ,且表达活性差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;②以Lipofectin介导pEBAFluc转染 4株细胞 ,荧光素酶活性仅在能分泌AFP的HepG2 中表达。结论 :含人AFP启动子