云南腾冲县新分离乙型脑炎和盖塔病毒的分子生物学特征

目的分析云南省腾冲县新分离流行性乙型脑炎病毒(JEV)和盖塔病毒(GETV)的分子生物学特征。方法2007年7月在中缅边境地区腾冲县采集蚊虫标本,用BHK-21和C6/36细胞分离病毒,阳性分离物用RT-PCR方法进行鉴定,用相关生物学软件进行分子生物学特征分析。结果从腾冲县采集的4属25种26 702只蚊虫中分离到20株JEV,1株GETV。系统进化分析表明,新分离20株JEV均属于基因Ⅰ型,与邻近省份和东南亚流行株亲缘关系较近;PreM和E基因核苷酸同源性和氨基酸位点分析表明,这20株JEV之间及其与国内外流行株间均存在一定差异,但它们的抗原和毒力位点未发生明显改变。本次分离的GETV的Capsid基因和E2基因与其他国内外分离株的同源性较高。结论首次证实云南省西部地区存在基因Ⅰ型JEV和GETV流行,这些流行株具有较为稳定的遗传特征和地域特征。

盖塔病毒分子进化及其迁徙

目的了解世界各地分离盖塔病毒分子进化特征及其时空迁徙。方法用Clustal X1.83、MegaAlign和Gene DOC软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,用MEGA 6.0软件绘制系统发生树,采用BEAST v 1.8.1软件包里的Bayesian Stochastic Search Variable Selection(BSSVS)程序进行盖塔病毒的空间动力学分析。结果盖塔病毒E2基因全长均为1 266nt,编码422aa,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.5%~100%和96.4%~100%。病毒分子进化分析发现,盖塔病毒不存在蚊虫,马匹和猪等宿主动物和媒介的种属和地域分布差异。生物信息学分析结果显示,盖塔病毒起源于马来西亚,此后依次传播至日本、中国、韩国以及蒙古国和俄罗斯等地。结论自1955年首次分离盖塔病毒至2014年间分离的盖塔病毒E2基因序列较为稳定,未发现病毒基因组之间存在种属及地域分布差异,并且该病毒已经从热带地区传播到欧亚大陆多个国家和地区,因此加强盖塔病毒及人畜动物感染的检测和监测至关重要。

一种超薄切片枸橼酸铅染液的长期保存方法

超薄切片技术是将样本切成50~100 nm的切片[1],通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察其细胞器、病理变化及病原体等超微结构,是生物学、医学研究和临床诊断的重要手段[2-3],由于生物样本对电子的散射能力弱,难以在TEM下清晰成像,故需要原子序数高、散射电子能力强的重金属染液提高样本超微结构的反差从而获得清晰的图像,枸橼酸铅(lead citrate,LC)是最常用的超薄切片染液[4],其优点在于对细胞各种成分都有亲和力,更易与核蛋白、糖原结合。LC染液的不足之处在于其易与空气中的CO 2反应生成碳酸铅沉淀导致超薄切片上出现大量碳酸铅颗粒而使染色失败,故通常LC染液不能长期保存,而是现用、现配。

2011年中国克雅氏病监测病例特征分析

目的了解中国(未包括香港、澳门和台湾地区,以下同)克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)的发病情况、流行病学及临床特征。方法对2011年我国CJD监测网络获得的可疑CJD病例的临床及流行病学资料进行分析,收集患者脑脊液及血液样品,利用Western blot方法检测脑组织中PrPSc蛋白及脑脊液中14-3-3蛋白,提取全血基因组DNA并利用PCR及测序方法对PRNP基因进行129位多态性及基因突变的分析。结果没有发现散发型CJD确定诊断病例,发现临床诊断病例57例,疑似诊断病例15例,致死性家族型失眠症病例2例,GSS综合征病例(P102L)1例及遗传型CJD病例5例,包括V203I、E196A、E200K各1例及2例T188K突变。病例报告无季节聚集性,长久居住地呈散在分布,职业分布广泛。临床诊断病例年龄中值为61岁(43,82),男女性别比例为0.46∶1;疑似诊断病例年龄中值为62岁(39,77),男女性别比例为0.88∶1。快速进行性痴呆为最常见的首发症状,占全部诊断病例的54.93%。临床诊断病例比疑似诊断病例出现更多的典型临床表现。结论 2011年我国监测到的CJD病例主要以散发型为主,病例的报告时间、长久居住地分布、职业分布、性别比例以及年龄分布均符合散发型CJD的发病特点。

中国2010年克-雅病监测病例特征分析

目的了解中国(未包括香港、澳门和台湾地区,下同)克-雅病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)的发病情况、流行病学及临床特征。方法对2010年中国CJD监测网络获得的可疑CJD病例的临床及流行病学资料进行分析,收集患者脑脊液及血液样品,利用Western blot方法检测脑组织中PrPSc蛋白及脑脊液中14-3-3蛋白,提取全血基因组DNA并利用PCR及测序方法对PRNP基因进行129位多态性及基因突变的分析。结果共发现散发型CJD确定诊断病例1例,临床诊断病例46例,疑似诊断病例25例,致死性家族型失眠症病例3例及家族型CJD病例5例(包括R208H、P102L各1例及3例T188K突变)。病例报告无季节聚集性,长久居住地呈散在分布,职业分布广泛。临床诊断病例平均年龄为62岁,男女性别比为1.30∶1;疑似诊断病例平均年龄为57岁,男女性别比为2.14∶1。快速进行性痴呆为最常见的首发症状,占全部诊断病例的54.93%。临床诊断病例比疑似诊断病例出现更多的典型临床表现。结论 2010年中国监测到的CJD病例主要以散发型为主,病例的报告时间、长久居住地分布、职业分布、性别比例以及年龄分布均符合散发型CJD的特点。

四川省东南部地区蚊、蠓及相关虫媒病毒调查研究

目的了解四川省的蚊、蠓以及相关虫媒病毒种类及分布。方法在自然界使用灯诱法采集吸血昆虫标本，形态学分类后分装，液氮保存备用。蚊虫、蠓虫研磨上清液接种BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离和病毒基因检测。使用BioEdit 7.0.5.3、MEGA 6.0等软件对病毒序列进行分子生物学特征分析。结果2016－2017年在四川省东南部3个县的7个自然村共采集到3属4种蚊虫17 019只，蠓虫12 700只。三带喙库蚊占蚊虫采集总数的79.4%（13 519/17 019），其次为骚扰阿蚊（11.1%，1 897/17 019），致倦库蚊占采集蚊虫标本总数的5.5%（930/17 019）；中华按蚊最少（4.0%，673/17 019）。蚊虫标本接种组织细胞后，在合江县采集的三带喙库蚊标本获得3株可以稳定传代的病毒分离株，经分子生物学实验鉴定为基因Ⅰ型流行性乙型脑炎（乙脑）病毒，在合江县采集的7批蚊虫中检测到乙脑病毒基因阳性。蠓虫标本接种细胞后未获得病毒分离物，在合江县采集的4批蠓虫标本经分子生物学检测，显示阿卡斑病毒基因阳性。结论三带喙库蚊是四川省东南部3县的优势蚊种，四川省东南部存在经蚊虫传播的乙脑病毒及以蠓虫为媒介的阿卡斑病毒。