乙肝病毒感染者HBV基因突变与疾病进展的关系研究

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者在不同疾病进展阶段的HBV全基因序列以及关键位点突变情况, 了解HBV基因特征与疾病进展的关系。方法收集无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者以及原发性肝细胞癌患者四种乙肝感染者的血清样本和基本信息, 采用巢式PCR法扩增样本获得HBV全基因序列, 构建系统发育树确定样本基因型别, 结合各型别参考序列分析样本的基因突变情况。结果成功扩增256份样本, 包括无症状HBV携带组68例、CHB组118例、LC组15例和HCC组55例, 检出B、C、D、I和C/D重组型5种基因型。结果发现有56个核苷酸位点突变率在四组之间有统计学差异(P<0.05);除发现C105T、A1762T/G1764A、G1899A等一些既往报导的关键位点突变以外, 还发现HCC组的T791A、C1485T、C1023T等位点突变率显著高于其他组;无症状HBV携带组的T2150G、T2151C显著高于其他组;发生缺失突变的序列共计24条, 分布在前S区和前C区, HCC组的缺失突变率显著高于其他组。结论本研究发现T791A、C1485T、C1023T等核苷酸位点置换突变可能与HBV疾病进展密切相关, HCC患者较非HCC患者更容易发生HBV基因缺失, 研究结果为了解病毒变异与HBV感染相关疾病进展的关系提供参考。

人冠状病毒NL63超速离心富集方法的建立及优化

目的建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63,以离心力135000×g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒,并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测,评价病毒富集效果;通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。结果经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理,两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高(P<0.001)。超速离心方法富集前后,电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态;4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍,PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍,经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法(P<0.05);8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h(P<0.05),但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒;离心力为135000×g时,选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。