新型冠状病毒614D和614G假病毒生物学特性研究

目的利用HIV慢病毒包装系统构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)原始株614D和突变株614G假病毒,并初步研究其生物学特性。方法将重组表达质粒pCDNA3.1-614D和pCDNA3.1-614G分别与慢病毒质粒psPAX2和pLenti CMV Puro LUC瞬时共转染293T细胞,72 h后收集上清,进行20%蔗糖垫层超速离心,检测假病毒的滴度、形态、S蛋白表达和中和活性。结果间接免疫荧光检测可见S蛋白特异性荧光,Western blot分析可见2019-nCoV 614D和614G假病毒S蛋白表达,透射电镜下可见假病毒颗粒具有明显刺突。614D和614G假病毒的滴度分别为1.12×10^(4)和2.52×10^(4) TCID_(50)/ml,均能够中和S蛋白兔多克隆抗体,表明假病毒具有特异性。结论本研究成功构建了2019-nCoV 614D和614G假病毒,为建立基于假病毒的体外中和抗体检测平台奠定基础。

复制缺陷型痘苗病毒天坛株的细胞生物学特性及复制缺陷机制探究

痘苗病毒减毒株作为基因表达载体,广泛应用于多种疾病的预防和治疗。复制缺陷型痘苗病毒天坛株(Non-replicating Tiantan vaccinia virus,NTV)作为一株高度减毒的痘苗病毒株,其生物学特性和复制缺陷机制还有待研究。探究NTV细胞生物学特性和复制缺陷机制。在不同种属和组织来源的细胞中测定NTV复制能力、细胞嗜性和毒力;Western Blot检测HeLa细胞中的NTV的A17/A27蛋白表达水平,Real-time PCR检测晚期蛋白A17/A27转录水平。NTV在BHK-21、CEF细胞中可有效复制和扩散,而在Vero细胞及人源细胞HeLa、2BS、Hep-2和143TK-中均不能有效复制;在HeLa细胞中,晚期蛋白A17和A27蛋白表达受阻,而转录水平基本不变。NTV是一株复制缺陷型痘苗病毒,在多种细胞中复制和扩散受限;NTV晚期蛋白A17和A27的表达受阻且与蛋白表达转录水平无关,初步判定蛋白表达受阻发生在蛋白翻译阶段。

非复制型痘苗病毒天坛株NTV诱发早期细胞凋亡

目的对非复制型痘苗病毒NTV感染人源细胞后的细胞形态变化及相关分子机制进行研究,为NTV载体的进一步优化改造和应用提供科学依据。方法用复制型痘苗病毒天坛株VTT和非复制型痘苗病毒NTV感染HeLa细胞,观察细胞的形态学变化。然后收获细胞,电泳检测rRNA断裂水平和Western blot检测凋亡相关分子信号,初步确定NTV诱导的早期细胞凋亡的通路与机制。结果在细胞形态学方面观察到被NTV感染的细胞,与VTT相比,能够在较早时间出现细胞变圆、皱缩等病变现象。DAPI染色观察到被NTV感染的细胞核在早期会出现染色质高度凝聚、边缘化的现象并随着时间的增加而崩解。rRNA断裂水平检测结果说明被NTV感染16 h后的rRNA已发生断裂和降解。Western blot检测结果说明在NTV感染HeLa细胞中能够检测到比正常细胞中更强的PARP、caspase-3及caspasee-9的分子信号,但caspasee-8并没有明显增加,而VTT的结果则与NTV相反。结论NTV在早期能够诱导细胞凋亡,为痘苗病毒载体改造提供理论依据。

吐根碱抗病毒作用及机制研究进展

吐根碱(emetine)是从茜草科植物吐根中提取的一种生物碱成分,是吐根的主要成分之一,分子式C29H40N2O4。抗病毒研究表明,吐根碱对多种DNA和RNA病毒均具有抑制活性且抗病毒机制不同。本文主要对其抗病毒作用及其机制进行综述。

肠道病毒D68感染致急性弛缓性脊髓炎的研究进展

自2014年肠道病毒D68感染在北美地区暴发流行以来,其已成为全球范围内导致急性弛缓性脊髓炎(acute flaccid myelitis,AFM)的主要病原体之一。肠道病毒D68在人群中持续流行并累积变异,可进化出嗜神经系统的高毒力致病株。目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物,故对病毒致病机制的研究尤显重要。本研究主要从肠道病毒D68不同基因型和亚基因型、基因组变异及病毒使用不同细胞受体对嗜神经毒性的影响,病毒侵袭中枢神经系统的可能途径,以及感染病毒后机体免疫反应等方面,介绍肠道病毒D68感染致AFM的病毒学机制。