2013～2014年流感流行季节中国大陆B型流感病毒对NAI的敏感性

为了解近期我国大陆流行的B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性,本文对2013年10月至2014年3月流感流行季节期间中国大陆分离的884株B型流感病毒进行了生物学耐药监测。884株B型流感毒株中所有毒株均对oseltamivir敏感,检测到2株(0.23%)对zanamivir敏感性降低的毒株,其他毒株均对zanamivir敏感。其中38株B/Victoria系毒株中B/Shandong-Kuiwen/1195/2014对zanamivir的IC50值为1.78nM,较药物敏感参考株的IC50平均值(0.34nM)高5.12倍,表明对zanamivir的敏感性降低,在NA基因上没有发现存在已知耐药位点变异,但有D35G,N59D和S402T(N2编码分别为39、64和399位)氨基酸位点的变异;846株B/Yamagata系毒株中B/Hunan-Lingling/350/2013对zanamivir的IC50值为2.72nM,较药物敏感参考株的IC50平均值(0.34nM)高7.99倍,表明对zanamivir的敏感性降低,NA基因发生了D197N(N2编码为198位)氨基酸位点的变异。根据结果可以推断目前我国流行的B型流感毒株对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感。

2012-2013流感监测年度中国大陆B型流感病毒抗原性及基因特性分析

目的了解2012-2013流感监测年度中国大陆地区B型流感的流行状况,分析B型流感病毒的抗原性和基因变异情况。方法选择2012-2013年我国分离的B型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析。利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用Neighbor-Joining方法进行种系进化分析,通过基因进化树比较国内流行株与疫苗株的差异。结果 2012-2013监测年度内,B型流感病毒占所有流感病毒的9.93%,其中以B型Victoria系流感病毒为主。B型Victoria系流感病毒的抗原性与上一年度WHO推荐的疫苗株B/Brisbane/60/2008(83.5%)以及我国代表株B/Chongqing-Yuzhong/1384/2010(94.7%)的抗原性类似;而B型Yamagata系流感病毒绝大多数为WHO疫苗株B/Wisconsin/01/2010(99.3%)、WHO疫苗种子株B/Hubei-Wujiagang/158/2009(98.0%)的类似株;基因特性分析显示有1株B-Victoria系病毒发生了HA与NA基因分支间的重配,有1株B-Yamagata系病毒B/Sichuan-Gaoxin/1110/2012的NA基因位于Victoria系病毒的NA进化分支,也表明发生了种系间的基因重配。结论 2012-2013流感监测年度我国B型流感病毒活动水平较低,主要以Victoria系为主,而WHO推荐的疫苗组分是B-Yamagata系病毒,可见部分B型流感流行株与疫苗株并不匹配。

2013-2014年中国B型流感病毒抗原性及基因特性分析

目的 了解2013-2014年监测年度我国B型流感病毒的流行特点,明确当前流行株与国际疫苗株和国内代表株的匹配情况及流感病毒的抗原性和基因特性变异情况.方法 选择2013年4月至2014年3月流感监测年度中国大陆分离的B型流感病毒,利用红细胞凝集抑制试验（HI）进行抗原分析.利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用MEGA 5.0软件进行我国B型流感病毒的种系进化变异分析.结果 2013年至2014年监测年度流行的B型流感病毒以B-Yamagata系流感病毒为主.B-Yamagata系流感病毒与本年度疫苗株B/Massachusetts/2/2012和我国代表株B/Chongqing-Yuzhong/1361/2013的抗原性类似.B-Victoria系流感病毒的抗原性与WHO推荐的疫苗株B/Brisbane/60/2008和我国代表株B/Beijing-Haidian/1386/2013的抗原性类似.基因特性分析显示102株B型流感病毒中,有60株（58.8％）病毒发生了B-Victoria系HA和B-Yamagata系NA间的重配.结论 本监测年度我国使用的疫苗株与我国流行的流感病毒匹配,我们所筛选的国内代表株能够代表我国各地流行株的病原学特征.

奥司他韦对我国A(H3N2)亚型流感病毒红细胞凝集和抑制试验的影响

比较加入神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(Oseltamivir)对我国A(H3N2)亚型流感病毒红细胞凝集(Hemagglutination,HA)和凝集抑制(Hemagglutinin inhibition,HI)试验结果的影响,以期获得病毒更真实的HA和抗原性变异分析结果。选择2014年10月-2015年5月在中国大陆分离的395株A(H3N2)亚型流感病毒,在HA及HI试验中加入神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir,对实验结果进行比较分析,根据HA试验,挑选其中部分毒株进行基因组测序,比较NA氨基酸位点变异情况。在HA试验中加入神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir后,44.8%的毒株HA滴度未改变;43.8%的毒株HA滴度下降,仅有11.4%的毒株HA滴度升高。加入Oseltamivir后,与A/TX/50/2012鸡胚株抗原性类似的毒株的比例高于未加入Oseltamivir时,与A/SZ/9715293/13细胞株抗原性类似的毒株的比例低于未加入Oseltamivir时类似株的比例,统计学分析有显著性差异。以A/TX/50/2012细胞分离株和A/SZ/9715293/133鸡胚分离株作为参考病毒,Oseltamivir对实验结果的影响无显著性差异。挑选19株A(H3N2)亚型流感毒株进行基因组测序,进行NA蛋白氨基酸位点分析,与A/TX/50/2012鸡胚分离株相比加入20nM Oseltamivir后,滴度降低超过4倍的5株毒株,没有共同氨基酸位点变异,但A/山东莱城/119/2015流感毒株有D151G氨基酸位点突变;A/吉林铁西/1194/2015流感毒株有V412I和T434A氨基酸位点变异。加入20nM Oseltamivir后,滴度降低为2~4倍的毒株,具有I26T、G93S、V149I、N234D、T267K、S416G等位点突变。在对我国近年流行的A(H3N2)亚型流感病毒进行血凝滴度和抗原性分析中,加入Oseltamivir可获得更为真实的HA和HI结果,分析病毒的变异情况,评价疫苗的匹配性。

Sanger法测定季节性H3N2亚型流感病毒全基因组序列

目的对流行的季节性甲型H3N2亚型流感病毒进行全基因组测序。方法本文对甲型H3N2亚型流感病毒测序过程中的PCR扩增引物进行优化及精简，同时对PCR产物纯化方法进行了改进。使用优化后的34对PCR引物和优化后的纯化方法，对194株甲型H3N2亚型病毒进行了测序。结果利用优化后的测序方法，可保证获得甲型H3N2亚型流感病毒的8个片段全基因组序列，而且大大缩短了实验时间，节约了实验成本和人力。结论我们应大力开展A（H3N2）亚型流感病毒的序列测定工作，及时发现病毒变异情况，以推选出与人群中的流行株更为匹配的疫苗株。

青海湖周边家禽相关环境标本中H5N1亚型禽流感病毒特征分析

目的了解我国青海湖周边家禽中分离到的高致病性H5N1亚型禽流感病毒的抗原性和基因特性。方法将青海湖周边野鸟和家禽的环境标本采集处理后。接种SPF鸡胚分离病毒．将红细胞凝集阳性的标本通过real-time RT-PCR进行型别鉴定和亚型分析。将H5N1检测阳性的标本选取部分进行二代序列分析和抗原性分析。结果2013年1-9月问采集的家禽相关环境标本中共分离到19株高致病性H5N1亚型禽流感病毒，集中在1-3月。对7株病毒进行了全基因组序列分析和抗原性分析显示，血凝素基因进化树显示其中除A／Environment／Qinghai／XN02032／2013属于clade7．2分支病毒以外，其余6株属于clade2．3．2．1C分支。神经氨酸酶基因也显示该毒株与其他6株分属于两个不同的分支；抗原分析显示该毒株与所有参考血清低反应，另外6株病毒是A／Barnswallow／HongKong／D10—1161／2010的类似株。结论青海湖周边地区在2013年1-3月环境相关标本中检测到高致病性H5N1亚型禽流感病毒，属于clade2．3．2．1和clade7．2分支病毒。这种高致病性H5N1亚型禽流感病毒多个分支共同流行的趋势提示加强这一地区野鸟和家禽相关环境病原体监测的重要性。

2009年后我国北方地区流感样病例的动态预警分析

目的探索2009年流感大流行后我国北方地区流感样病例(influenza like illness,ILI)预测预警模式,并评价预测预警效果。方法根据2010 2014年我国北方地区ILI哨点监测数据,利用Eviews 6.0软件建立乘积季节ARIMA模型,选择最适宜的时间间隔对2015年1 32周ILI占门急诊病例百分比(ILI%)进行预测。采用流行控制图法探索北方地区ILI预警模型,通过比较灵敏度、特异度和绘制ROC曲线,选择合适的预警界值,结合乘积季节ARIMA模型的预测值,进行预警并评价预警效果。结果建立了乘积季节ARIMA模型(1,0,0)×(1,1,0)52,模型拟合度R2=0.65,不同时间间隔预测结果中,2周时间间隔预测效果较好,且能兼顾预测时效性,模型均方根误差为0.37,平均绝对误差为0.24,平均相对误差百分比为8.26%。ILI%预警界值选用P95预警功效较好,灵敏度为100%,特异度为96%。结合ARIMA模型2周时间间隔预测结果对2015年1 32周北方地区ILI进行预测预警,结果与实报预警一致率为100%。结论利用ARIMA模型和流行控制图结合构建的动态预警模型,能够较好反映我国北方地区ILI流行趋势,为早期发现和控制流感暴发和流行提供依据。

中国流行性感冒防控面临的问题与挑战

流行性感冒（简称流感）因其病毒变异的复杂性和不可确定性，至今仍然是人类所无法完全控制的传染病，对人类健康造成巨大危害。每年的季节性流感流行会造成5％～15％的人群感染，25万～50万例死亡。周期性流感大流行更严重危害人类健康和社会稳定。1918年发生的“西班牙流感”造成全球5000万死亡病例，至今仍让人心有余悸。

2013—2014年季节性流行性感冒疫苗免疫血清针对我国流行株的抗体水平分析

目的分析季节性流行性感冒（流感）疫苗免疫血清针对我国流行株的抗体水平及我国流行株与疫苗株的匹配性。方法采集不同年龄组人群疫苗接种前后的血清,利用流感流行株和疫苗株作为病毒抗原,应用血凝抑制试验（HI）方法对血清进行检测。结果三价流感疫苗对我国A（H1N1）Pdm09亚型流行株产生的抗体平均几何滴度（GMT）低于针对疫苗株病毒的GMT,血清抗体滴度〉40的比例为57.0%--63.3%;对我国A（H3N2）亚型流行株产生的GMT与针对疫苗株病毒的GMT类似,血清抗体滴度超过40的比例为57.6%--63.0%;对B型流行株产生的血清抗体GMT低于针对疫苗株的GMT,不过超过了疫苗株抗体GMT的50%。不同年龄组的血清抗体反应不同,成年组相对较高。结论 2013—2014年季节性流感疫苗与同期流行的A（H1N1）Pdm09亚型流感病毒和B型流行株Yamagata系流感病毒较为匹配;H3N2亚型疫苗与流行株的匹配性较低,有可能会导致疫苗的保护效果降低。