过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响

目的探讨过氧化氢酶(catalase,CAT)过表达对α粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35T1内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响。方法构建p EGFP-CAT真核表达质粒,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组表达质粒及空载体转染至BERP35T1细胞中,经G418筛选出具有抗性的细胞株。Real-time PCR和Western blot法检测BERP35T1细胞中CAT基因m RNA转录和CAT蛋白表达水平;免疫细胞化学法、MTT法、细胞划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测CAT过表达对BERP35T1细胞DNA氧化损伤水平(8-OHd G水平)、增殖(细胞存活率)、迁移能力(细胞迁移距离)和锚着独立性(软琼脂克隆形成率)的影响。结果重组表达质粒p EGFP-CAT经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,获得了CAT稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35T1-CAT-7。空白对照BERP35T1、BERP35T1-p EGFP和BERP35T1-CAT-7细胞中CAT基因m RNA转录水平分别为0.90±0.23、1.00±0.12和2.91±0.41,CAT蛋白相对表达水平分别为0.97±0.11、1.00±0.00和5.72±1.28,8-OHd G表达水平分别为1.65×10-2、1.60×10-2和8.95×10-3,细胞存活率分别为(95.33±4.26)%、(100.00±8.29)%和(61.63±3.08)%,细胞迁移距离分别为(150.68±9.98)μm、(115.02±30.73)μm和(44.25±10.53)μm,细胞软琼脂克隆形成率分别为(2.50±0.02)‰、(2.10±0.02)‰和(0.70±0.02)‰。结论 CAT过表达可能通过降低DNA氧化损伤水平,抑制BERP35T1细胞的增殖、转移和锚着独立生长能力等恶性表型。

乙酰化白藜芦醇对长波紫外线照射后HaCaT细胞内NRF2活化及活性氧水平的影响

目的探讨乙酰化白藜芦醇对长波紫外线(UVA)照射后人永生化角质形成细胞HaCaT内核转录相关因子NRF2(NF-E2-related factors 2)活化和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法用CCK-8试剂盒检测不同剂量(0、5、10、20、30、40、60、80 J/cm^2)UVA照射后24 h,及不同浓度(0、0.5、1、2μmol/L)乙酰化白藜芦醇干预24 h后再经20 J/cm^2 UVA照射后24 h HaCaT细胞的存活率;Western blot检测20 J/cm^2 UVA照射HaCaT细胞后不同时间点(0、3、6、12、24、48 h)及2μmol/L乙酰化白藜芦醇干预24 h后再经20 J/cm^2 UVA照射后6 h细胞核内NRF2蛋白表达的变化;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测2μmol/L乙酰化白藜芦醇干预HaCaT细胞24 h后再经20 J/cm^2 UVA照射后24 h细胞的凋亡率和死亡率;二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记细胞检测HaCaT细胞中ROS水平的变化。结果 10~80 J/cm^2 UVA照射后24 h,HaCaT细胞存活率随照射剂量的增加逐渐降低(P<0.05);20 J/cm^2 UVA照射HaCaT细胞后0 h,细胞核内NRF2的表达急剧增强(P<0.01),照射后3~48 h又逐渐减弱(P<0.05)。乙酰化白藜芦醇预处理能显著提高UVA照射后细胞的存活率(P<0.05),降低其凋亡率和死亡率(P<0.05),促进细胞核内NRF2蛋白的表达(P<0.01),并降低细胞内ROS水平(P<0.01)。结论乙酰化白藜芦醇能减轻UVA照射引起的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡,其机制可能与其促进NRF2蛋白活化,降低细胞内ROS水平,从而减轻UVA照射对细胞的氧化损伤有关。