Bim的异常调控在黑色素瘤细胞耐受内质网应激状态中的作用

目的探讨Bim在黑色素瘤细胞内质网应激状态下可能存在的异常调控，及其在黑色素瘤细胞对内质网应激耐受中的作用。方法用衣霉素诱导黑色素瘤细胞Mel—RM和MM200，产生内质网应激模型。采用流式细胞仪AnnexinV／PI双染法及Hoechst染色法检测细胞凋亡；Westem blot检测caspase-3和caspase-9的活化，以及Bim、GRP78、CHOP及Foxol等的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链反应检测Bim、CHOP及Foxol的mRNA水平。以小干扰RNA（siRNA）特异性沉默人胚肾上皮细胞系HEK293的Bim基因，观察Bim的蛋白表达和细胞凋亡情况。结果衣霉素作用后，黑色素瘤细胞对内质网应激诱导的凋亡表现为耐受，HEK293细胞中caspase-3和caspase一9明显活化，但在黑色素瘤细胞中却不明显。3μmol／L衣霉素作用黑色素瘤Mel—RM和MM200细胞12、24、36h后，Bim蛋白的水平均未上调，mRNA表达的变化倍率分别为0．37±0．05、0．13±0．02、0．02±0．01和0．41±0．06、0．16±0．04、0．21±0．03，与HEK293细胞相比，均发生下调（P〈0．01）。在HEK293细胞中，特异性沉默Bim基因后，caspase-3的活化程度下降，BimsiRNA干扰组细胞凋亡率为（5．69±0．38）％，明显低于siRNA阴性对照组[（40．32±1．64）％，P〈0．01]和空白对照组[（35．46±2．01）％，P〈0．01）]。3μmol／L衣霉素作用黑色素瘤细胞6、12、24、36h后，转录因子CHOPmRNA和蛋白表达水平均发生上调，Foxol mRNA和蛋白表达水平均发生下调。结论Bim的异常调控在黑色素瘤细胞对内质网应激诱导的凋亡耐受中发挥重要作用，这可能是导致黑色素瘤对治疗不敏感的重要原因之一。转录因子CHOP和Foxol可能与Bim在内质网应激诱导的黑色素瘤细胞中的异常表达有关。