成年斑马鱼OKR行为学分析

作为视功能检测和与视觉有关突变体筛选的方法,眼动(Optokinetic response,OKR)和视动(Optomoterresponse,OMR)行为学是简单有效的视功能检测手段,广泛用于幼年斑马鱼研究中,而成年斑马鱼OKR的分析方法却很少有报道。文章介绍了成年斑马鱼眼动反应诱导方式,以及使用模板匹配(Pattern match)的方法程序跟踪眼部运动,实现了成年斑马鱼OKR的定量分析。使用该方法,检测到斑马鱼双眼视觉区对OKR行为的产生具有一定的贡献作用,并且成年斑马鱼单眼对运动光栅表现出一定的方向敏感性。同样的方法也可适用于幼年斑马鱼的OKR行为学分析。利用此方法初步检测到了钟基因period1b突变体幼鱼的OKR异常。

小鼠腹外侧视前区神经元的鉴定及其昼夜发放频率

目的鉴定腹外侧视前区（VLPO）的神经元,记录神经元在昼夜的动作电位（AP）的发放频率,揭示不同VLPO神经元昼夜发放的规律。方法 4~6周龄野生型小鼠新鲜脑片,根据形态、对药物去甲肾上腺素的响应及电特性对VLPO的神经元进行鉴定;膜片钳方式记录VLPO区域的神经元在白天的11：00~16：00以及夜间的22：00~02：00动作电位的发放;采用t检验对神经元动作电位的发放频率进行统计学分析。结果成功在VLPO鉴定出两类神经元,一类为多极三角形、去甲肾上腺素抑制性神经元,其阈值有低阈值发放（LTS）特性;一类呈两极梭形、去甲肾上腺素兴奋性神经元,其阈值无LTS特性。在记录的59个VLPO区域的神经元中,LTS特性的神经元有44个,非LTS特性的有15个;t检验分析显示去甲肾上腺素抑制的、有LTS特性的神经元在白天动作电位的发放频率明显高于夜间神经元动作电位的发放频率（P〈0.01）;去甲肾上腺素兴奋的、非LTS特性的神经元白天动作电位的发放频率也明显高于夜晚动作电位的发放频率（P〈0.05）。结论 VLPO存在两类神经元,这两类神经元的白天动作电位发放频率皆高于夜间动作电位发放频率,提示两类神经元都参与了昼夜节律的调控。

光通过自主感光视网膜神经节细胞调节睡眠活动

目的 利用不同基因型小鼠,探讨有无自主感光视网膜神经节细胞（ipRGCs）的小鼠在光的调节下对睡眠-觉醒活动的影响。方法 四种不同基因型小鼠,分别为野生型（C57BL/6,WT）,ipRGCs不感光型（MKO）,仅保留ipRGCs型（MO）和视杆、视锥细胞缺失且ipRGCs不感光型（TKO）。记录小鼠在12h∶12h明暗交替下24h睡眠量和觉醒量以及在关灯后1h（即21：00）给予3h光照,观察其在光照期间（21：00～24：00）睡眠量和觉醒量的变化。结果在12h∶12h明暗交替下,WT、MKO和MO小鼠的觉醒、快动眼睡眠（REM）、非快动眼睡眠（NREM）有明显的昼夜节律,并且这3种时相的分布时间差异无统计学意义;而TKO小鼠的3种时相无稳定相位,表现为自由运转。与12h∶12h明暗交替的相应时段比较,在3h光照期间,WT小鼠觉醒总量减少（P〈0.01）,REM总量增加（P〈0.01）,NREM总量增加（P〈0.01）以及总睡眠时间（TST）增加（P〈0.01）;MO小鼠觉醒总量减少（P〈0.01）,REM总量增加（P〈0.05）,NREM总量增加（P〈0.05）以及TST总量增加（P〈0.01）;MKO和TKO小鼠的3种时相均无显著变化。结论表达视黑素的ipRGCs在小鼠光诱导睡眠的过程中起重要作用。

神经干细胞对老化小胶质细胞存活及Ⅲ贿号通路的调控作用

目的研究神经干细胞对老化小胶质细胞存活及c-Jun氨基末端激酶（JNIO磷酸化蛋白（p-JNK）表达的调控作用。方法原代培养的小胶质细胞和神经干细胞分别取自12～18个月龄的ICR小鼠及孕12．5d的ICR小鼠，特异性标记物IB4染色、免疫荧光检测nestin的表达进行鉴定。利用插入式共培养系统将传代后稳定的小胶质细胞与神经干细胞（1：4）共培养，噻唑蓝（MTT）法检测共培养前后细胞增殖能力的变化；用20ng／mL JNK抑制剂Sp600125预处理小胶质细胞4h，再加入神经干细胞共培养3d，Western blotting检测共培养前后小胶质细胞P．JNK的相对表达量的变化。结果原代培养的小胶质细胞呈贴壁生长，折光性强，特异性标记物IB4染色显示细胞纯度在80％以上。神经干细胞nestin染色呈阳性；共培养组细胞的增殖能力显著高于单纯小胶质细胞和神经干细胞，差异有统计学意义（P〈0．051；共培养的小胶质细胞＋神经干细胞组小胶质细胞的P．JNK的相对表达量高于小胶质细胞组，Sp600125共培养组p-JNK的相对表达量高于单纯Sp600125刺激组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论神经干细胞可以通过激活ⅢK信号通路促进老化小胶质细胞的存活。