槲皮素对人肾癌细胞株细胞增殖、侵袭及其VEGF表达的影响

目的研究槲皮素对人肾癌细胞株(ACHN)细胞增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养ACHN细胞,加入不同浓度的槲皮素进行处理后,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率,采用涂有Matrigel胶的Tr-answell小室模型对传代培养的ACHN细胞进行体外侵袭检测,以Western blot法检测ACHN细胞内血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果不同浓度的槲皮素均能抑制ACHN细胞的增殖,并有明显的浓度和时间依赖性(P<0.05);Tr-answell试验结果显示,与空白对照组比较,槲皮素处理组肾癌细胞侵袭能力明显下降;槲皮素处理组VEGF蛋白表达水平均明显低于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论槲皮素可明显抑制ACHN细胞的增殖、侵袭力,其机制可能与下调VEGF表达有关。

单细胞双重巢式PCR扩增X、Y染色体STS、AMEL同源序列行性连锁遗传病诊断

目的在单细胞水平建立一种简便、快速、高准确性的胎儿性连锁遗传疾病诊断方法，为无创性产前诊断性连锁遗传病和植入前遗传学诊断提供一定的理论与方法学依据。方法提取男女单个淋巴细胞各150例，共300个细胞。随机分成3组，每组男女细胞各50个，双重巢式PCR技术在单细胞水平同时扩增X-类固醇硫酸脂酶基因（steroid sulfatase gene，STS）／Y-假基因和牙釉质基因（amelogenin gene，AMEL），对照组用单重巢式PCR技术在单细胞水平分别扩增两基因，比较单、双重巢式PCR技术在单细胞水平的扩增率及性别诊断正确率。结果单重巢式PCR扩增男性细胞STS和AMEL的扩增率和性别诊断正确率分别是84％、76％和84％、84％；而双重巢式PCR技术同时扩增上述基因的扩增率和性别诊断正确率分别为98％、96％。后者与前两者相比扩增率和性别诊断正确率均明显提高，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论在单细胞水平性连锁遗传疾病诊断中，双重巢式PCR技术较单重巢式PCR技术具有较高的扩增率及正确率，并有助于发现等位基因脱扣。该法在无创性单基因伴性遗传病的产前诊断和植入前遗传学诊断中具有较高的实际应用价值。

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的观察小干扰RNA（siRNA）沉默血管内皮生长因子（VEGF）对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响。方法化学合成针对VEGF的小干扰RNA，实验分4组，转染后收集细胞，通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达，噻唑蓝（MTY）比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力。结果siRNA1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组；在24、48、72h，siRNA1—2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0．05），其中以siRNA2组最为显著；与空白对照组比较，siRNA1—2组的细胞黏附数量明显下降[（81．5±3．1）％比（40．54-2．6）％、P〈0．05，（81．5±3．1）％比（22．5±2．4）％、P〈0．05]，其中以siRNA2组最为明显；siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降（162±9比81±5，P〈0．05；162-1-9比38±4，P〈0．05）；siRNA1—2组细胞侵袭能力明显下降（P〈0．05），且siRNA2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA1组（P〈0．05）。结论VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用；以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞，可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力。