抑制肝癌细胞内质网应激可增强槐耳清膏的抗肿瘤作用

目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)抑制肝癌细胞内质网应激(ERS)对槐耳清膏抗肿瘤作用影响。方法首先将肝癌细胞分为对照组与实验组,对照组(0mg/ml)不作处理,实验组细胞用不同浓度的槐耳清膏(2、4、6、8mg/ml)进行处理,24h后用MTT法检测肝癌细胞活力,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,Westernblot法测定肝癌细胞内凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达情况以及ERS相关蛋白GRP78、PERK和IRE1的水平;再将肝癌细胞分为4组,分别为con组、4-PBA组、Huaier组和联合用药(4-PBA+Huaier)组,24 h后检测肝癌细胞ERS相关蛋白PERK和IRE1的表达水平、肝癌细胞活力、凋亡率以及细胞内Bcl-2和Bax的表达情况。结果与Huaier组相比,4-PBA+Huaier组中肝癌细胞活力下降;4-PBA+Huaier组肝癌细胞株HepG2和Hep3B凋亡率为(1.12±16.98)%和(2.32±15.68)%,而Huaier组细胞凋亡率为(1.15±12.89)%和(2.58±10.67)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槐耳清膏与4-PBA联合使用可抑制肝癌细胞发生ERS,抑制肝癌细胞活力并使肝癌细胞凋亡增加,增强槐耳清膏的抗肿瘤作用。

miR-146a-5p靶向IRAK1、TRAF6抑制小细胞肺癌耐药

目的初步探讨miR-146a-5p在小细胞肺癌(SCLC)耐药机制中的作用。方法通过qRT-PCR检验SCLC耐药细胞株(H69-AR)和敏感细胞株(H69)中miR-146a-5p表达水平,探究miR-146a-5p与SCLC耐药的相关性;分别通过慢病毒载体以稳定转染miR-146a-5p mimic或miR-146a-5p inhibitor使其细胞中的miR-146a-5p上调或抑制,再利用CCK-8法和划痕实验验证miR-146a-5p对SCLC细胞株的生物学影响;查阅相关文献以及应用目前生物学最权威软件预测miR-146a-5p的靶基因,应用Western blot、qRT-PCR检测miR-146a-5p与预测靶基因两者之间的关系。结果H69-AR相对H69细胞株的miR-146a-5p表达水平为(1∶22.70),差异有统计学意义(P<0.05);生物学信息数据库预测miR-146a-5p可能靶基因为白介1受体相关激酶1(IRAK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6);H69-AR相对H69细胞株中mIRAK1、mTRAF6的表达水平差异分别为(4.92∶1.00)、(2.76∶1.00),差异有统计学意义(P<0.05);H69-AR细胞株转染miR-146a-5p mimic后,与对照组比较,细胞抑制率上升,迁移速度减缓,同时mIRAK1、mTRAF6表达水平分别减少为(1.00∶14.55)、(1∶3.20),并且IRAK1、TRAF6蛋白表达也分别减少为(0.24∶1.00)、(0.31∶1.00),差异有统计学意义(P<0.05);H69细胞株转染miR-146a-5p inhibitor后,与对照组相比,细胞抑制率下降,迁移速度增快,同时mIRAK1、mTRAF6表达水平分别增加为(10.86∶1.00)、(4.64∶1.00),IRAK1、TRAF6蛋白表达也分别增加为(4.76∶1.00)、(3.96∶1.00),差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-146a-5p通过靶向IRAK1和TRAF6基因抑制SCLC耐药。

HucMSC-Ex通过调控TRPC6介导Ca^(2+)内流并促进糖尿病创面愈合

该文旨在探讨糖尿病创面中瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6(transient potential canonical 6,TRPC6)的变化和功能以及人脐带间充质干细胞源外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell derived exosome,huc MSC-Ex)对TRPC6的调控作用。组织免疫荧光检测临床糖尿病足部溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)患者创面与创缘组织中TRPC6的表达情况,q RT-PCR和Western blot分别检测晚期糖基化终末产物修饰的牛血清白蛋白(bovine serum albumin modified with advanced glycosylation end products,AGE-BSA)刺激后大鼠真皮成纤维细胞(dermal fibroblasts,DFs)中TRPC6的m RNA和蛋白表达情况;通过用小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)和过表达质粒转染DFs考察TRPC6对DFs Ca^(2+)内流、增殖和胶原蛋白分泌等生物学功能的影响。采用细胞免疫荧光检测huc MSC-Ex对DFs分泌胶原蛋白能力的影响,构建SD大鼠DFU模型,加入huc MSC-Ex干预,HE染色观察皮肤结构,评价huc MSC-Ex对DFU的治疗作用。进一步通过q RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光、免疫组化等验证huc MSC-Ex对TRPC6的调控作用。结果显示,糖尿病创面中TRPC6通道蛋白水平显著降低,敲减TRPC6减少了DFs Ca^(2+)内流,抑制了其生物学功能;过表达TRPC6增加了DFs Ca^(2+)内流,促进了其生物学功能。总之,huc MSC-Ex可以通过上调TRPC6表达介导Ca^(2+)内流并促进糖尿病创面愈合。