用酵母双杂交系统筛选CENP-E相互作用蛋白

纺锤体检验点(spindle checkpoint)是一个重要的细胞分裂生化调节通路,可监督染色体正确分离和传代.着丝粒相关蛋白E(centromere-associated protein E,CENP-E)是一个分子量为312kD的微管马达驱动蛋白,可以衔接纺锤体微管与动点并参与纺锤体检验点调控.为研究CENP-E的作用机理,以其动点结合区域为诱饵蛋白,用酵母双杂交技术从人HeLa细胞cDNA文库中筛选出了Nuf2蛋白.体外的pull-down实验和体内的免疫共沉淀实验表明,Nuf2蛋白通过其卷曲螺旋(coiled-coil)功能域特异结合CENP-E的C末端区域,间接免疫荧光显示Nuf2与CENP-E共定位于细胞有丝分裂期染色体的动点.由此推论,CENP-E通过Nuf2的直接作用参与构筑动点-微管界面,进而参与细胞有丝分裂纺锤体检验点信号转导通路,为染色体正确分离发挥调控作用.

NPC蛋白研究进展

C型尼曼氏病 (Niem ann-Pick type C,N PC)是一种致命的神经退行性失调疾病 ,常见于儿童早期发作。其特征是患者细胞中胆固醇和鞘糖脂等脂类沉积在晚期胞内体 /溶酶体中。 NPC症状是由 N PC1或 NPC2的功能缺陷引起的。NPC1是一个跨膜蛋白 ,目前认为它参与内吞后的底物向高尔基复合体或胞内其它位点运输 ,在脂类物质循环和平衡控制机制中起重要作用。NPC2是一个可溶性溶酶体蛋白 ,可结合胆固醇。目前尚不清楚 NPC1和 N PC2如何调控溶酶体等细胞器的确切功能。

哺乳动物驱动蛋白的计算基因组学分析与鉴定

提供了一种新颖的、基于比较基因组学方法的全长驱动蛋白预测方法(full-lengthkinesinpredictionprogram,FKPP),用于哺乳动物中驱动蛋白质组的鉴定与研究.之前的预测认为,哺乳动物共含94个驱动蛋白,而用FKPP从哺乳动物的基因组中总共鉴定出134个可能的驱动蛋白基因.基于数据库中存在的片段序列,用FKPP鉴定出25个可能的全长驱动蛋白.此外,用FKPP方法发现人的动点马达蛋白CENP-E应包含2701个氨基酸,而不是当初根据克隆预测的2663个氨基酸.通过对CENP-E的cDNA进行重测序,并同时采用特异性识别FKPP预测的CENP-E多肽抗体予以实验评估,结果表明,FKPP预测的CENP-E氨基酸序列是正确的.为此,本研究利用FKPP对哺乳动物的驱动蛋白进行了重新分类.鉴于目前公共数据库含有较多非全长序列的蛋白片段,FKPP可提供一个具有显著效率且准确新颖的全长序列预测手段,用于驱动蛋白以及其他蛋白家族的分子鉴定.