皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅳ的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素（简称ＡａＨⅣ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ，等电点为ｐＨ５．０．从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇＡａＨⅣ纯品．ＡａＨⅣ有较强的出血活性，最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ．

核磁共振波谱方法在顺磁金属蛋白-紫色震颤菌血红蛋白中的应用

金属蛋白由于其所带金属离子具有未配对电子而具有顺磁性，致使弛豫时间缩短、谱线加宽（～５０Ｈｚ）以及谱范围变大（～１００ｐｐｍ），因而具有与抗磁蛋白不同的谱特征。这时一些常用的２ＤＮＭＲ实验方法将失效。本文探索顺磁金属蛋白的几种ＮＭＲ实验方法，如溶剂峰抑制、２ＤＭＣＯＳＹ、ＮＯＥＳＹ、１ＤＮＯＥ差谱及ＳＵＰＥＲＷＥＦＴ等，并精心设计实验条件使之适用于顺磁金属蛋白的结构研究。这些实验方法成功地应用于紫色震颤菌血红蛋白（ｍｅｔ－ＶｔＨｂ－ＣＮ）。通过这些实验找到了与血红素Ｆｅ３＋配位的组氨酸，并完成了该金属蛋白的顺磁位移的共振峰的识别、活性中心质子间距离的测量、抗磁性化学位移及电离常数ｐＫａ值的确定。

同源重组菌株M53的构建及其作为链霉菌通用克隆受体的可行性

为了发展优良的链霉菌宿主系统 ,以带有硫链丝菌素抗性的同源重组葡萄糖异构酶 (GI)缺陷型菌株M10 33XW78,M10 33XW194为出发菌株 ,利用摇瓶、影印和负筛的方法 ,获得一株既无GI活性又对硫链丝菌素敏感的回复菌株 ,命名为淀粉酶链霉菌M5 3.通过染色体PCR检测、酶切图谱鉴定、序列分析等方法 ,确认M5 3含有和M10 33一致的 1 2kb葡萄糖异构酶基因 ,但在结构基因345～ 10 95bp片段内有 17个碱基发生突变 .这说明在染色体内自发同源重组过程中 ,有低频率的突变位点引入 .酶活力测定和SDS PAGE分析表明 ,该突变的GI基因不表达 4 2 5KD葡萄糖异构酶 ,这为M5 3菌株发展成为优良的链霉菌宿主提供了足够的表达空间 .一系列的转化实验也证明了M5

中国皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅲ初步晶体学研究

1 引言 出血毒素是广泛存在于很多蛇毒中的一种蛋白质,它能引起动物的局部组织出血和坏死,严重的可导致死亡。迄今发现的几乎所有出血毒素均为含锌金属蛋白酶,其氨基酸序列具有较高保守性。目前发现的许多蛇毒出血毒素能水解结缔组织基底膜上的蛋白,因此它们可作为关节炎和肿瘤治疗的靶蛋白。根据其分子量,出血毒素可分为3种类型:低分子量(20～30ku)、中分子量(30～60ku)和高分子量(60～90ku)。最近,两种蛇毒金属蛋白酶:来源于东部响尾蛇无出血活性的AdamalysinⅡ和来源于西部响尾蛇的出血毒素Atrolysin C的晶体结构已得到解析。虽然它们在出血活性表现上有较大差异,但它们的空间结构非常相似。目前的研究结果尚未对出血作用的机理作出空间结构上的解释。

7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究

7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60～0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异.

低自旋氰配位紫色震颤菌血红蛋白血红素及其周围质子的核磁共振研究

报道了低自旋氰配位紫色震颤菌血红蛋白 (VtHb CN)血红素及其周围质子的核磁共振谱 .通过MCOSY ,NOESY ,1DNOE和TOE ,以及SUPERWEFT实验对VtHb CN的1H核磁共振谱进行识别 .已识别了血红素和配位组氨酸的几乎所有共振峰 ,获得了这些共振峰的自旋 晶格弛豫时间和它们的化学位移随温度的变化关系 ,由此可分别获得这些质子到血红素Fe3+ 的距离和抗磁化学位移 .通过化学位移的pH滴定 ,得到了配位组氨酸 (His 85 )的咪唑环的电离平衡常数pKa( =4.95 ) .这一较低的pKa 值 ,归因于带正电的Fe3+ 以及His 85与血红素Fe3+ 的配位 .

制备三量子位和四量子位核磁共振等效纯态

基于时间平均法 ,给出了在同核系统中制备三量子位和四量子位核磁共振等效纯态的方案 .利用Λn(not)门 ,本文的方案大大减少了制备等效纯态所需的操作次数 :在三同核系统中制备三量子位核磁共振等效纯态只需三次操作 ,在四同核系统中制备四量子位核磁共振等效纯态只需五次操作 .然后在一个链状耦合的同核系统中实验制备三量子位核磁共振等效纯态 ,验证了本文的方案 ;