体外扩增的自然杀伤细胞特点及其杀伤活性研究

目的评价体外扩增的自然杀伤细胞(NK)表型、扩增倍数、杀伤活性以及安全性。方法利用NK细胞体外扩增试剂盒对外周血单个核细胞进行刺激,特异性扩增NK细胞,利用流式细胞术、杀伤实验等检测扩增后NK细胞的特点及抗肿瘤活性;并检测NK细胞外源性因子污染情况等。结果体外培养16~21 d后,细胞扩增500倍以上,总数可达1×1010以上,其中CD3-CD56+NK细胞占90%以上,扩增后的NK细胞对Ho8910、A549、K562、Hep G2及SK-MES-1细胞均有较高的杀伤活性。同时,扩增后NK细胞未检测到细菌、病毒、支原体等外源性病原体污染。结论 NK细胞具有较高的体外杀瘤活性且无外源性因子污染。

共生菌对小鼠外周血及黏膜相关组织中趋化因子配体24和胰岛素样生长因子1表达的调控

目的探讨共生菌群对小鼠外周血及黏膜相关组织(肺脏、肝脏)中趋化因子配体24(CCL24)及胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达的调控作用。方法利用ELISA方法检测共生菌缺失小鼠(Abx鼠)及正常小鼠(WT鼠)血清中、肺脏及肝脏组织匀浆中CCL24及IGF-1的浓度,并对其表达量进行分析比较。结果小鼠缺失共生菌后,其血清中CCL24浓度上调[WT与Abx,(1. 018±0. 043)μg/L与(1. 509±0. 119)μg/L],而IGF-1浓度无显著变化[WT与Abx,(1. 240±0. 019)μg/L与(1. 250±0. 066)μg/L];其肺脏中CCL24[WT与Abx,(11. 984±0. 683) ng/g与(14. 626±0. 769) ng/g]和IGF-1[WT与Abx,(0. 998±0. 024) ng/g与(1. 290±0. 031) ng/g]表达量均显著上调;其肝脏中CCL24(WT与Abx,(11. 575±0. 609) ng/g与(8. 704±0. 458) ng/g]和IGF-1[WT与Abx,(2. 989±0. 073) ng/g与(1. 112±0. 027) ng/g]表达量均显著下调。结论共生菌对小鼠外周血、肺脏、肝脏中CCL24和IGF-1表达调控具有组织特异性。

共生菌对荷瘤小鼠肺泡巨噬细胞基因表达的调控作用

目的探讨共生菌群对荷瘤小鼠肺泡巨噬细胞(AM)基因表达的调控作用。方法分离纯化共生菌缺失的荷瘤小鼠及共生菌正常的荷瘤小鼠AM,利用基因芯片技术筛选差异表达的基因并进行生物信息学分析。结果分选后的AM细胞纯度可达98%,共生菌缺失荷瘤小鼠与正常荷瘤小鼠相比较,AM细胞中差异性表达基因共有353个(变化倍数≥2),上调基因171个,下调基因182个;差异表达基因的基因分类(GO)主要为细胞凋亡、细胞增殖、细胞分化、信号传导、血管生成等;KEGG通路主要为氮素代谢、趋化因子信号、TGF-β信号及肿瘤通路等;M2型巨噬细胞特异性基因CCL24、Arg1、Retnla及IL-13等在共生菌缺失荷瘤小鼠AM细胞中表达上调。结论共生菌可以调控荷瘤小鼠AM细胞的基因表达,包括CCL24、Arg1、Retnla及IL-13等基因,差异表达基因与多个GO分类和KEGG通路密切相关。

转录因子7类似物2在胃癌中的表达及其与铂类药物耐药性的关系

目的研究转录因子7类似物2(TCF7L2)基因在胃癌中的表达情况及其与胃癌化疗耐药的关系。方法采用qRT-PCR方法检测15例胃癌及其癌旁组织中TCF7L2的mRNA量,western blot实验检测胃癌细胞株SGC-7901、HSC44、44AS3、N87、MKN45、MGC803与永生化正常胃黏膜上皮细胞GES-1中TCF7L2蛋白表达量。通过基因稳定转染技术构建高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株和SGC-7901/CON(对照组)细胞株,用细胞计数法分别检测两者对顺铂和卡铂的耐药情况。结果 TCF7L2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,在胃癌细胞株中的表达水平也明显高于对照细胞GES-1。高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株对顺铂与卡铂的耐受性明显强于对照细胞株。结论 TCF7L2基因表达与胃癌的发生发展有正相关关系;TCF7L2高表达可能是胃癌对铂类药物化疗耐受的原因之一。