顺铂通过调节FTO的表达诱导卵巢颗粒细胞凋亡

目的:观察顺铂处理人卵巢颗粒细胞KGN后,细胞中脂肪和肥胖相关基因(FTO)的表达水平和细胞凋亡的变化,探讨FTO基因对化疗后KGN细胞凋亡的调控。方法:分别使用0、5、10、15、20μmol/L顺铂处理KGN细胞24、48、72 h, CCK-8法分析细胞增殖能力变化,流式细胞术检测处理48 h后细胞的凋亡水平,Western blot(WB)法检测细胞中FTO、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。KGN细胞转染针对FTO基因的小干扰RNA(siRNA)(siFTO组),并设立细胞对照组(Control组,只含有脂质体)和siRNA对照组(siNC组,转染阴性对照序列);KGN细胞转染FTO真核表达质粒(FTO组),并设立细胞对照组(Control组,只含有脂质体)和空载体对照组(Vector组,转染空载体)。转染后,同时使用5μmol/L顺铂处理细胞48 h;分别采用qRT-PCR和WB法检测各组FTO、Bcl-2和Bax的表达水平。结果:随着顺铂浓度的增加,各处理时间组KGN细胞的增殖能力均逐渐下降(P<0.05)。细胞凋亡水平随着顺铂浓度的增加逐渐升高(P<0.05),FTO的表达水平逐渐下降(P<0.05)。使用siRNA下调FTO后,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降(P<0.001),促凋亡蛋白Bax的表达水平升高(P<0.001);使用真核表达质粒上调FTO后,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达升高(P<0.01),促凋亡蛋白Bax的表达下降(P<0.001)。结论:顺铂能够下调KGN细胞中FTO的表达水平,并通过抑制抑凋亡蛋白Bcl-2表达和上调促凋亡蛋白Bax表达,促进KGN细胞的凋亡,提示化疗可能通过FTO表达促进卵巢颗粒细胞凋亡,引起卵巢早衰。

透射电子显微镜观察肝细胞性肝癌中溶酶体相关细胞器变化的特征

目的:采用透射电镜方法,从超微形态学角度探讨肝细胞性肝癌中溶酶体相关细胞器变化的特征,为肝癌的发病机制研究寻找潜在的新靶点。方法:收集肝癌手术患者标本,按照癌灶、癌旁、毗邻癌旁的肝组织进行电镜标本制备,采用透射电镜从超微结构水平观察溶酶体相关细胞器的变化情况,辅以非肝癌患者肝脏组织为对照。结果:光镜下癌细胞呈多角形或圆形,排列成条索状或巢状,核大且核仁深染。AFP免疫染色阳性提示符合肝细胞癌诊断。P53和Ki67免疫染色显示,肝癌患者标本P53表达普遍较低,而Ki67表达普遍较高,表现为镜下胞核棕色颗粒着色细胞较多见。通过透射电镜观察发现,癌灶中心的肝癌细胞表现出胞质内密集排列的大小不一的线粒体,癌旁及毗邻癌旁的肝组织切片中可见内质网肿胀。在癌灶中心样本及癌旁样本中滑面内质网多见,且多伴有内质网肿胀。癌灶中心、癌旁肝组织总溶酶体计数均高于正常肝组织(P<0.05),而毗邻癌旁肝组织与正常肝组织差异无统计学意义(P>0.05);癌灶中心、癌旁、毗邻癌旁的肝组织自噬溶酶体计数均高于正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:溶酶体和自噬溶酶体在肝癌及癌旁组织中明显增高,与肝癌的发生密切相关。