BLyS改组噬菌体文库的构建及初步筛选

从质粒pT7474-BLyS及人胎脑cDNA文库中分别扩增出BLyS和APRIL基因,用DNase I消化后,回收小于50 bp的片断,用于DNA改组。PCR产物与噬菌体载体pfUSE5连接后,电转E.coliER2738获得改组文库。构建的改组文库库容量为8.9×105。对文库进行初步的筛选,获得了一个受体结合活性降低的突变克隆。成功构建了BLyS改组噬菌体文库,为蛋白结构与功能之间关系的深入研究打下了基础。

融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文)

干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45mg/L,纯度在90%以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。