前体药物甲氨喋呤-α-肽对前列腺癌动物模型治疗的研究

目的 :研究前列腺癌的导向酶 前体药物疗法 (ADEPT) ,在体内观察前体药物甲氨喋呤 α 肽对前列腺癌的作用。方法 :用前体药物甲氨喋呤 α 苯丙氨酸 (MTX α Phe )和甲氨喋呤 α 精氨酸 (MTX α Arg)对前列腺癌荷瘤裸鼠模型行肿瘤生长抑制及药物动力学的观察。结果 :经抗人精浆蛋白单克隆抗体导向的羧肽酶 A MTX α Phe动物模型体内试验 ,ADEPT治疗组肿瘤生长明显抑制 ,裸鼠生存时间延长 ,生活质量优于单用MTX组。药物动力学显示 ,抗人精浆蛋白单克隆抗体 羧肽酶A注入72h后 ,给于MTX α Phe治疗效果最佳。结论 :MTX α Phe +CP

帕金森病患者血小板线粒体呼吸功能的研究

目的 观察帕金森病 (PD)患者的血小板线粒体呼吸功能 ,探讨其与PD发病之间的关系。方法对 35例PD患者提取血小板线粒体后 ,测定其血小板线粒体的呼吸率和呼吸控制率以及复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性变化。结果 PD患者的血小板计数无明显变化 ,但在以谷氨酸 ,苹果酸 +丙酮酸以及琥珀酸为底物时 ,线粒体呼吸状态 3的呼吸率明显下降 ,同时复合物Ⅰ的活性也明显降低 ,而其他复合物活性无明显变化。结论 PD患者的血小板线粒体呼吸功能明显异常 ,可能是PD发病的一个重要机制。

帕金森病患者血小板线粒体谷氨酸载体和复合物活性研究

目的探讨线粒体复合物活性和谷氨酸载体功能在帕金森病(PD)发病机制中的作用。方法首先提取帕金森病患者的血小板线粒体,测定复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性,然后先后用谷氨酸和草酰乙酸进一步装载线粒体,加入14C-谷氨酸后启动谷氨酸载体的转运,同时测定该载体的活性。结果与健康对照组相比,PD患者的血小板计数无明显变化(P>0.05),但线粒体复合物I的活性和谷氨酸载体的活性明显降低(P<0.05)。结论线粒体复合物和谷氨酸载体活性的改变参与了PD的发病机制。

甘露聚糖结合凝集素与儿童常见病原菌的结合活性研究

目的从人血清中分离纯化甘露聚糖凝集素(MBL),并鉴定其与儿童感染性疾病中常见细菌的结合活性。方法用甘露聚糖-Sepharose4B亲和柱进行亲和层析,从人血清中分离纯化出MBL分子,用酶联凝集试验(ELLA)鉴定其与8个菌种97株不同细菌的结合活性。结果MBL对不同的细菌有不同的结合力,对解鸟氨酸克雷伯菌、大肠埃希菌有很强的结合力;对溶血性葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌的结合力相对较弱;对肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌的不同菌株结合力差异较大。结论MBL对不同的细菌有不同的结合力,对革兰阴性菌的结合力相对较阳性菌强,对某些细菌的不同菌株结合力差异较大。

基因治疗中目的基因靶向表达的研究

基因治疗中目的基因靶向表达的研究王立群，陈诗书（上海第二医科大学，上海２０００２５）郑仲承（中国科学院上海生化研究所，上海２０００３１）关键词基因治疗，靶向表达基因治疗在近几年取得了许多进展。基因治疗并不单是治疗措施问题，其中有许多基础研究工作还有待...

不同处理对卤虫卵的孵化特征影响的初步研究

本文对四个品系的卤虫卵在自来水浸泡2h和脱壳处理下的孵化特征进行了初步研究；并对干卵、自来水浸泡2h的湿卵、不脱壳孵化12h的湿卵以及脱壳孵化12h的湿印进行了常规组织学制片。结果表明，不同处理下卤虫卵的孵化特征不同，其结构也有一定的差异。

温州蜜柑萎缩病毒的提纯法研究

本文提出的温州蜜柑萎缩病毒(SDV)提纯法,仅用100～200克病洋酸浆叶,且无需通过蔗糖密度梯度离心,在电镜下亦能看到中量直径约25nm 的球状病毒颗粒,粗提纯制剂OD_(860)/OD_(280)平均值为1.28,OD_(260)/OD_(240)平均值为1.15,初步显示出SDV 特征性紫外吸收曲线,提纯病毒产量约为4.5～11mg/kg病叶。比较证明,0.01M、PH7.0和0.1M、PH6.6的柠檬酸缓冲液以及0.5M、PH7.0的磷酸缓冲液是适宜的抽提缓冲液,洋酸浆是最好的繁殖寄主。

妊娠高血压综合征中过氧化脂质和心钠素水平变化的研究

本文对妊娠高血压综合征(简称妊高征)患者母体血、脐血及胎盘组织中过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和心钠素(ANP)进行了分析,并对高活性心钠素(haANP)用药前后的LPO变化进行了观察,旨在探讨妊高征期间LPO、SOD和haANP变化特点。

PAI-1的分子生物学研究进展

内皮细胞型纤溶酶原激活物抑制物(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)属于丝氨酸蛋白酶抑制物。自Loskutoff等(1977年)发现人内皮细胞培养液中存在PAI-1以来,人们相继在血浆、平滑肌、胎盘、纤维肉瘤细胞和黑色素瘤细胞等出现并提纯PAI-1。在正常人血浆中。

帕金森病发病机制、功能显像诊断及基因治疗的实验研究

目的研究帕金森病(PD)的发病机制,提高临床的正确诊断及其探索基因治疗。方法和结果MTT法、末端标记法(TUNEL)、流式细胞仪(FCM)、电镜、DNA电泳、RT-PCR和Western blot方法检测显示MPP^+致使MES23.5细胞活力显著减低,线粒体膜电势(△m)下降和氧自由基增加,MPTP、MPP^+和(或)6-OHDA使黑质细胞和(或)PC12细胞发生凋亡,Caspase-3mRNA表达增加。微透析与HPLC、免疫组化等显示PD患者血IgG、脂多糖(LPS)、Fe^(2+)致使大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞减少,纹状体多巴胺(DA)降低,MPTP致使猴纹状体谷氨酸、天门冬氨酸、一氧化氮增高。^(125)I-β-CIT、^(99m)Tc-TRODAT-1及^(125)I-IBZM、^(131)I-AIBZM单光子发射断层扫描和(或)放射自显影显示PD猴、大鼠或小鼠模型的纹状体DA转运载体(DAT)功能降低和D_2DA受体活性增强。转TH基因成肌细胞或转TH与GTP环水解酶-1(GCH)成纤维细胞,以及腺病毒介导的胶质源性神经营养因子(GDNF)移植治疗显示PD大鼠模型的旋转行为改善,TH和GDNF基因表达,以及DA浓度增加。结论氧化应激、兴奋性毒性、免疫异常等与PD发病有关。DAT和D_2DA受体显像有助于提高疾病的诊断和病情监测。TH和(或)GDNF基因可能是PD治疗的有效措施。

波尔山羊的超数排卵研究

在不同季节、应用不同FSH剂量对不同年龄、是否经产、不同体重以及不同利用次数的55头次波尔山羊进行超数排卵处理(其中10头波尔山羊为重复使用)。结果表明:在繁殖季节,应用FSH总剂量为200～300IU,年龄为2～5岁,经产的波尔山羊超排效果好。每头平均获卵20.75枚。重复超数排卵的波尔山羊也具有较好的超排效果:第一次平均获卵21.9枚,第二次平均获卵17.8枚。

柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白血病细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响

目的：观察柴胡皂甙d（SSd）对人急性早幼粒白血症细胞（HL60）糖皮质激素受体（GR）mRNA表达的调节作用及对细胞生长的影响。方法：用从柴胡中提取的单体成分SSd，以3H-胸腺嘧啶（3H－TdR）掺入法和流式细胞仪观察细胞生长，用Northernblot分析SSd对GRmRNA的改变。结果：经SSd作用后，HL60细胞2H－TdR掺入率明显降低，呈时间和剂量依赖关系，SSd10μg／ml处理48h作用最明显；流式细胞仅分析细胞呈现G0／G1期阻滞现象，GRmRNA表达增加。结论：SSd可上调HL60细胞GRmRNA表达并抑制细胞生长。

足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量动态比较

目的了解足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量的动态变化。方法采用氨基酸自动分析仪对不同泌乳期的足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量进行测定。结果牛磺酸、谷氨酸／谷氨酰胺是母初乳中最丰富的游离氨基酸，而谷氨酸／谷氨酰胺、亮氨酸和天门冬氨酸是蛋白质中含量最丰富的氨基酸，提示了其对新生儿的最佳供应。早产儿母乳中氨基酸谱变化与足月儿母乳有所不同，但更符合于早产儿的需求。结论从氨基酸变化看，母乳为婴儿最佳匹配的食品，对于早产儿更应强调和鼓励母乳喂养。

氨甲喋呤-α-肽的固相合成

用固相肽合成法合成了氨甲喋呤（ＭＴＸ）与ＭＴＸα苯丙氨酸及精氨酸衍生物，产物不经进一步分离纯化即可达到ＨＰＬＣ单峰，质谱分析其分子量符合理论值。ＭＴＸα苯丙氨酸经羧肽酶Ａ处理后，可完全降解为ＭＴＸ。体外细胞毒性试验，两者活性差异在１００倍以上，提示ＭＴＸα苯丙氨酸是一理想的前体药物。

生长抑素基因初级克隆质粒(pUC12-SS)的改造与鉴定

生长抑素(somatostatin,ss)基因初级克隆质粒(pUC12-SS)含有限制性内切酶BamHI和HindⅢ的重复位点,用HindⅢ酶切处理和T_4DNA连接酶连接后。获得了它们的单一位点。并对经过修饰后的质粒进行了多个酶位点、SS基因片段回切和DNA序列等全面分析和证实。

前体药物甲氨喋呤-α-肽对前列腺癌的作用

目的：研究前列腺癌的导向酶-前体药物疗法（ADEPT），在体内外观察前体药物甲氨喋呤-α-肽对前列腺癌的作用．方法：用前体药物甲氨喋呤-α-苯丙氨酸（MTX-α-Phe）和甲氨喋呤-α-精氨酸（MTX-α-Arg）对前列腺癌细胞PC－3，PC－3m进行了细胞毒性及细胞动力学分析，并对前列腺癌荷瘤裸鼠模型行肿瘤生长抑制的观察．结果：体外细胞毒性试验，前体药物对任何细胞均无毒，但MTX-α-Phe经羧肽酶-A（CP－A）水解后，其细胞毒性大于前体药物约1000倍，对前列腺癌细胞有显著抑制作用，细胞动力学分析肿瘤细胞生长明显受阻于S期．动物模型体内试验，经抗人精浆蛋白单克隆抗体导向的羧肽酶-A-MTX-α-PheADEPT治疗组，肿瘤生长明显抑制，动物生活质量优于单用MTX组．结论：MTX-α-Phe＋CP-A是一理想的前列腺癌的ADEPT对．

携蜂毒素基因腺病毒感染对HepG2细胞CD54表达的影响

目的研究蜂毒素基因转染对肝癌细胞生物学性状的影响。方法将蜂毒素基因置于甲胎蛋白(AFP)转录调控序列驱动下,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组于腺病毒质粒中;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,脂质体介导转染293细胞进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,RT-PCR实验观察蜂毒素基因是否可以被转录,流式细胞术检测CD54表达情况。结果携蜂毒素基因的重组腺病毒载体构建成功;RT-PCR实验表明蜂毒素基因可以得到转录;流式细胞术结果表明,蜂毒素基因转染可以抑制CD54分子的表达。结论蜂毒素基因转染肝癌细胞后,可改变肿瘤细胞的生物学行为,使其恶性度降低。

抗乙型肝炎病毒特异联合型核酶的体外切割作用

目的：探讨单一及多位点核酶对乙型肝炎病毒靶RNA的切割作用．方法：利用计算机辅助设计针对乙型肝炎病毒C基因的三个单一核酶及特异联合型核酶，构建三个核酶各自及三个核酶串联的自剪切转录载体（pGEMRz123），观察单一及串联核酶（Rz123）对靶RNA的切割作用．结果：构建的串联核酶自剪切转录载体体外转录后，在顺式核酶发生自剪切后可将目的核酶正确地释放出来，计算机设计的单一核酶体外可剪切靶RNA；串联核酶中的单一核酶不仅可单独作用，而且可联合切割，提高了单一核酶的剪切效率．结论：抗乙型肝炎病毒特异联合型核酶体外可联合切割靶RNA.

缺氧缺血性脑病大鼠脑内谷氨酸和天门冬氨酸含量变化

目前认为缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）的病理生理改变是多因素共同作用的结果，兴奋性氨基酸（ＥｘｃｉｔａｔｏｒｙＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ，ＥＡＡｓ）在ＨＩＥ中的作用越来越受到重视，我们通过建立新生大鼠ＨＩＥ模型观察脑组织中谷氨酸（Ｇｌｕ）和天门冬氨酸（Ａｓｐ）的...

下丘脑-垂体-肾上腺轴大鼠下丘脑 CRH mRNA 表达

目的探讨下丘脑垂体肾上腺轴（ＨＰＡ轴）受抑状态下下丘脑ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。方法本研究采用较新颖的逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）化学发光定量法，检测了ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。结果ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达量明显比正常对照组减少，且ＲＴＰＣＲ化学发光定量法能较灵敏地检测出ＣＲＨｍＲＮＡ低水平表达含量。结论这种新的ＰＣＲ定量分析技术为在分子水平研究神经内分泌功能紊乱提供了灵敏、准确、可靠的方法。