STAT3在神经系统发育和神经细胞存活与再生中的功能

信号转导是当前分子生物学研究的热点领域。信号转导和转录激活蛋白STAT3被许多细胞因子和生长因子激活而介导多种生理过程。STAT3蛋白含有DNA结合域 ,SH2区和转录激活区等保守区域 ,通过 70 5位酪氨酸的磷酸化而激活 ,形成二聚体 ,入核与特异DNA元件结合 ,启动靶基因的转录。STAT3在神经系统的发育过程中有表达 ,并与其他信号途径协同调节体内神经前体细胞的分化命运 ,STAT3结合元件的甲基化状态还决定了细胞的分化潜能。此外 ,STAT3蛋白还参与维持神经细胞的存活和促进神经损伤后的再生。

Fah基因剔除小鼠在肝细胞移植中的应用及其病理学变化

目的:观察外源成体肝细胞在Fah-/-小鼠肝脏中增殖的微观特性并对该小鼠模型肝脏损伤后的病理学变化进行研究。方法:野生型小鼠成体肝细胞经脾脏移植到Fah-/-小鼠后,观察移植Fah-/-小鼠的体重变化,生存状态及肝组织的Fah免疫组化和电镜观察以评价再殖效率和病理学变化。结果:Fah-/-小鼠的肝HE染色显示为亚急性损伤的病理特点。电镜观察显示,初期肝细胞坏死,凋亡现象随时间增多,随后有凋亡和坏死并存。而Fah-/-小鼠在NTBC[2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-环己烷-1,3-二酮]药物的治疗后,无明显病理学变化。肝细胞移植后的Fah-/-小鼠均健康存活,体重稳步上升。8周时可以达到90%以上再殖。肝脏生化指标恢复正常。结论:Fah-/-小鼠的肝脏损伤可以使移植的肝细胞90%以上的再殖,维持肝脏正常的组织结构,并发挥正常的肝细胞功能。Fah-/-小鼠作为肝脏再殖模型可用于干细胞肝向分化研究。

细胞接种密度对小鼠iPS细胞诱导效率的影响

为研究小鼠胚胎成纤维细胞的接种密度对iPS(induced pluripotent stem,iPS)细胞诱导效率的影响,采用逆转录病毒载体法将Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc4个基因或者Oct4,Sox2,Klf43个基因转入到携带有Oct4-EGFP转基因的小鼠胚胎成纤维细胞(Oct4-EGFP mouse embryonic fibroblasts,Oct4-EGFPMEF)中。感染病毒后的第4天将Oct4-EGFPMEF以500～128000个/孔(每孔面积9.6cm2)进行梯度铺盘,并分别于病毒感染后的第12天和第16天对4因子组和3因子组进行碱性磷酸酶染色和Oct4-EGFP阳性细胞比例检测。结果表明,Oct4-EGFPMEF感染病毒后的接种密度对于iPS细胞诱导效率存在较大的影响。4因子和3因子诱导产生iPS细胞的最佳接种密度分别为8000个/孔和32000个/孔。此外,通过逆转录病毒法,在最佳的接种密度下,可顺利地建立起iPS细胞系。

大鼠睾丸GABA_A受体b3t拼接变异体在CHO细胞中的异源表达

目的:研究大鼠睾丸GABAA受体b 3t拼接变异体特有5端的特性以及可能的细胞内定位作用。方法:将b 3t拼接变异体的全长cDNA克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pEGFP-C1中,用磷酸钙共沉淀方法转染CHO细胞,表达后用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察分析,并用ConA-Texas-Red标记转染后的细胞,进一步研究其在胞内的定位分布情况。结果:大鼠睾丸GABAA受体b 3t拼接变异体在CHO细胞中表达时呈现两种表达类型,但均不能定位到细胞膜上,而大鼠脑b 3亚基能定位分布到细胞膜上。ConA标记的结果显示b 3t拼接变异体滞留在内质网上。结论:大鼠睾丸GABAA受体b 3t拼接变异体N端的25 aa序列中可能存在内质网滞留信号。

EMT与肿瘤

上皮细胞向间质细胞的转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是哺乳动物胚胎发育过程中的生理现象,也是维系生命体组织平衡的基本生物事件。目前的研究表明成熟组织中不适当的EMT对多种肿瘤的发展进程具有重要的影响。EMT可促进肿瘤细胞的浸润以及肿瘤的转移,还可能使肿瘤细胞逃逸某些因素诱导的凋亡。本文综合目前的研究进展,旨在阐述EMT与肿瘤的关系以及EMT发生的分子机制。

转录因子NF-кB的核内活性调控

NF-κB家族蛋白是一类在免疫、炎症、发育和肿瘤的发生发展中具有至关重要作用的转录因子。因此,它在细胞核内的活性受到了复杂而严密的调控。本文综合近年来的研究成果,描述了NF-κB转录因子与DNA之间动态结合的过程,以及相互选择的关系;总结了组蛋白修饰以及NF-κB转录因子自身翻译后修饰对于NF-κB转录活性的影响;列举了对于NF-κB活性起到正调控作用的共激活因子和负调控作用的共抑制因子;最后还描述了NF-κB在核内被降解的过程。

BMP信号通路与结肠癌

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是一大类分泌型生长因子的统称,参与胚胎发育、细胞分化和器官形成等多个重要的生物学过程。然而,有关BMP信号通路与肿瘤发生的研究较少。本文以结肠癌为例,结合最新研究进展,分析结肠细胞中的BMP信号,强调BMP信号通路在结肠癌发生、发展和转移中的重要作用。同时,讨论BMP信号通路在维持肠隐窝干细胞增殖-分化平衡过程中的重要作用,为癌症的发生提供可能的分子机制。

重组活性小鼠组织因子及其阻断性单抗的制备与应用

组织因子是一种位于细胞膜上的糖蛋白,是外源性凝血过程的关键启动因子,近年来其在肿瘤细胞迁移等其他过程中的重要作用也已逐渐被揭示.构建了融合有His标签的小鼠组织因子胞外区段重组蛋白基因,利用昆虫杆状病毒蛋白表达系统成功表达并得到大量可溶性重组小鼠组织因子.利用血浆凝集实验和鼠尾流血时间实验对此重组小鼠组织因子进行的活性检测表明,此重组蛋白具有良好的生物活性,可以引起血浆凝血或缩短鼠尾流血时间.同时,利用此重组蛋白为抗原,制备了小鼠组织因子的小鼠源功能阻断性单克隆抗体,在血浆凝集实验中证明其对小鼠组织因子的活性有明显抑制作用.利用此阻断性单抗,成功地在小鼠深静脉血栓模型中减轻了血栓形成,证明组织因子在深静脉血栓的病程发展中起重要作用,这也是组织因子阻断性单抗在此类动物模型中的首次成功应用.通过此项工作,成功地建立了大量制备具有良好生物活性的重组小鼠组织因子蛋白的方法,并进而得到了小鼠组织因子功能阻断性单抗,为利用各种小鼠动物模型对组织因子在各项生命活动中的作用进行深入研究奠定了良好的基础.

microRNAs和体细胞重编程

体细胞重编程与microRNAs(miRNAs)均为近年来研究的热点问题。到目前为止,能成功诱导体细胞形成多能性干细胞的体细胞重编程方法有核移植(nuclear transfer,NT)和外源因子诱导形成多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSc)两种,这两种方法让人们看到了体细胞重编程在细胞治疗方面具有诱人的应用前景。miRNAs是真核生物中存在的一类长度为22nt左右起调控作用的内源性非编码RNA,它在转录后水平调节靶基因的表达,是细胞内基因表达的基本调控机制之一。近年的研究结果表明,miRNAs在干细胞干性维持和分化过程中具有重要的调节作用,从miRNAs角度研究体细胞重编程机理将对体细胞重编程的应用具有重要意义。

大鼠电子传递黄素蛋白-泛醌氧化还原酶cDNA的克隆、功能表达和细胞定位

从大鼠肝线粒体纯化得到一个内膜结合蛋白,经蛋白酶水解发现丰度最高的两个肽段含有相同的一个14肽序列.BLAST同源搜索找到了与这个14肽对应的大鼠基因组DNA.利用RACE的方法得到一个完整开放阅读框的cDNA,编码含616个氨基酸残基的蛋白质序列.克隆得到的大鼠cDNA与人的ETF-QO具有很高的同源性.通过序列比较发现克隆得到的cDNA对应大鼠ETF-QO的蛋白前体ETF-QOp,而从大鼠肝线粒体纯化得到的内膜结合蛋白则是ETF—QO. 构建的pYES/ETF—QO在酵母中的表达产物富集于线粒体组分,并具有ETF—QO的氧化-还原活性, 因此获得了ETF-QO在酵母中的功能表达,表明ETF—QOpN端32肽是线粒体的引导肽,且FAD 及[4Fe-4S]被正确地组装.ETF—QO在大鼠的心、肝、肾表达较高,而在脾与肺却很低.在动物细胞中表达了ETF—QOp的GFP融合蛋白,它在细胞内与线粒体的特异染料呈共定位.

ISG15类泛素化修饰:宿主细胞固有的抗病毒的新机制

干扰素刺激基因15(The interferon-stimulatedgene 15,ISG15)是最早被发现的类泛素蛋白。它能够通过与泛素类似的方式对底物蛋白进行翻译后修饰。对于ISG15共价修饰的生物学功能目前还知之甚少。干扰素(interferon,IFN)刺激和病毒感染均可以强烈诱导ISG15及其修饰系统的表达,暗示ISG15共价修饰在机体抗病毒固有免疫反应中发挥重要作用。本文综合近年来的研究成果,总结ISG15共价修饰对底物蛋白功能的影响,并重点讨论ISG15及其修饰在抗病毒固有免疫相关过程中的作用。

重组人P-选凝素及P-选凝素糖蛋白配基-1的表达与鉴定

P-选凝素表达于血管内皮细胞及血小板膜上,它可以与白细胞膜表面的P-选凝素糖蛋白配基-1(P-selectin glyco-protein ligand-1,PSGL-1)相互作用,在炎症过程中介导白细胞的滚动并启动随后的白细胞迁移级联过程。我们构建了重组人野生型可溶性P-选凝素及其钙离子结合位点突变体,同时构建了重组PSGL-1免疫球蛋白融合分子(PSGL-1-Rg),并应用昆虫杆状病毒表达系统在Sf9细胞中表达这些重组蛋白,最后用镍金属螯和柱或Protein A亲和柱予以纯化。结果显示,用该系统表达的P-选凝素或PSGL-1是有活性的,但是P-选凝素的4个钙离子结合位点突变体却没有活性。该研究证明了P-选凝素钙离子结合位点在其与配基相互作用中的重要性。