周期性张应变作用下成骨细胞凋亡的体外研究

目的研究周期性张应变对体外培养的成骨细胞凋亡作用及其与细胞增殖和细胞分化之间的关系。方法酶消化法分离培养新生SD大鼠颅顶骨成骨细胞,P2-P4代成骨细胞培养2d和4d后,用无血清培养法诱导成骨细胞凋亡,同时使用Flexcell4000TM细胞应变加载系统分别对细胞施加72h变形率为6%和13.6%的等轴周期性张应变。根据总培养时间分为5d和7d两组。运用流式细胞技术对成骨细胞凋亡水平进行检测,同时进行细胞记数及碱性磷酸酶(ALP)蛋白含量检测。结果与不加力的对照组相比,6%周期性张应变使成骨细胞凋亡率有不同程度的降低并伴随细胞数量增加;而在13.6%的周期性张应变下,成骨细胞凋亡率增加的同时,细胞数量有不同程度地降低;而相同培养时间下,5d组细胞对6%的周期性张应变更加敏感,而7d组细胞对13.6%的周期性张应变更加敏感。ALP活性在两种张应变刺激作用下均有所下降。结论周期性张应变对成骨细胞的凋亡具有影响,不同力值的周期性张应变可通过促进或抑制细胞凋亡的方式调控成骨细胞的活性。

乳腺癌干细胞的研究进展

乳腺癌干细胞是一群未分化、具有自我更新、多系分化潜能的细胞。人们采用多种策略成功地分离出乳腺癌干细胞。随着乳腺癌干细胞的成功分离以及体外的成功培养,对其生物学行为的认识也逐渐深入。化疗抵抗性、放疗抵抗性、缺氧抵抗性、高致瘤性、高侵袭转移性是这群细胞的特征,成为肿瘤难以根除、日后复发的一个重要原因。而乳腺癌干细胞相关的"侵袭性"基因信号("invasiveness"gene signature,IGS)与预后的关系令人瞩目,具有重要的临床指导意义。乳腺癌干细胞的自我更新、分化以及转移等特性受到许多信号转导通路和微环境的调控。如何靶向治疗乳腺癌干细胞,最终根治乳腺癌,正逐渐成为肿瘤靶向治疗研究的一个热点。

Indian Hedgehog在牵张力促进成骨细胞增殖中的作用研究

目的观察Hedgehog(Hh)信号在牵张力调控成骨细胞增殖中的作用。方法体外分离和培养新生大鼠颅顶骨成骨细胞,应用Flexcell 4000TM加力系统施加3%和6%的2种牵张应变。用N端Hedgehog重组蛋白(N-Shh)、Hed-gehog通道抑制剂环巴胺(cy)和机械通道抑制剂三氯化钆(GdCl3)对成骨细胞进行干预。分别采用细胞计数、甲基噻唑基四唑(MTT)比色法和流式细胞仪检测成骨细胞的增殖。采用SAS 8.0软件包对结果进行统计分析。结果在成骨细胞体外培养过程中,牵张力促进了成骨细胞的增殖,以6%牵张应变更显著;牵张力仍能促进经cy处理后的成骨细胞的增殖,但这种促进作用能被GdCl3抑制。结论牵张力促进成骨细胞增殖的作用有一部分是通过上调Ihh的表达实现的。

骨髓间质干细胞向心肌细胞分化的可塑性及应用研究进展

减少心肌缺血后损伤,促进心肌细胞和血管再生是治疗心肌缺血损伤、心力衰竭的重要思路,而干细胞移植为该思路带来了新的曙光。骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),也称为骨髓基质细胞,能分化为骨、软骨和脂肪细胞表型。研究表明,MSCs还能分化为内皮细胞、神经细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞和心肌细胞表型。MSCs具有多向分化的潜能,且自体移植可以避免免疫排斥反应,同时也易于在体外大量扩增。研究显示,MSCs移植能抑制损伤心肌的重塑和改善心肌功能。因此,骨髓间质干细胞移植给人们展示了一个诱人的前景。本文综述了近年来有关MSCs特性的新认识,尤其是MSCs向心肌细胞方向分化的可塑性、影响因素和信号转导机制,以及MSCs治疗心肌梗死的动物实验和临床研究进展。

牵张应力对Hedgehog通路相关基因和细胞增殖的影响研究

目的:观察牵张力下Hh通路相关基因的表达以及牵张力对成骨细胞增殖的影响,探索机械应力对成骨细胞的调控机制。方法:应用Flexcell 4000TM加力系统对大鼠成骨细胞施加0.5Hz,3%、6%和9%的张应变,作用时间4h、12h和24h。用机械通道抑制剂三氯化钆(GdCl3)对成骨细胞进行干预。采用流式细胞技术测定细胞周期分布与细胞增殖变化,定量PCR检测Hedgehog通路相关基因Ihh、Shh、Ptch和Smo的表达。采用SAS8.0软件包对结果进行统计分析。结果:不同强度、不同作用时间的张应变对Ihh表达量的上调作用亦不相同,6%张应变作用24h的对Ihh表达量上调最为明显,其下游基因Ptch和Smo的表达变化与Ihh类似;上述上调Ihh表达的作用均可被GdCl3抑制。;6%同3%牵张力相比,更能促进成骨细胞的增殖。结论:Ihh基因对力学刺激敏感;Ihh基因表达量的变化与成骨细胞的增殖相关。

胚胎干细胞或诱导性全能干细胞自我更新和分化机制研究进展

"211工程"三期建设遗传发育与生殖医学重点学科建设的子项目——胚胎干细胞或诱导性全能干细胞定向分化机制的研究,在2008—2011年建立了着床后人胚胎早期发育的全基因组表达谱式;揭示了calcineurin/NFAT信号通路对细胞谱系决定的调控机制;揭示以Oct4为核心的胚胎干细胞命运决定的分子调控机制,其中包括发现并系统研究了对胚胎干细胞自我更新起重要作用的转录因子Oct4的蛋白质翻译后修饰;揭示Oct4的重要合作蛋白Sox2的蛋白质翻译后修饰及在胚胎干细胞中的作用;发现共激活因子p300直接调控胚胎干细胞中Nanog的表达及调控机制;发现Oct4新的下游基因Stk40并揭示Stk40在胚胎干细胞中的功能及作用机制;首次提出核仁蛋白在胚胎干细胞自我更新维持中的重要作用。2011年"胚胎干细胞及早期胚胎发育的分子调控机制研究"项目获得教育部高等学校科学研究优秀成果奖——自然科学奖二等奖。

多能干细胞研究进展

多能性干细胞是具有长期自我更新并产生机体内任何种类细胞潜能的特殊细胞群体。一般来讲,多能性干细胞包括胚胎干细胞、胚胎生殖干细胞和胚胎肿瘤干细胞。2006年,分化的体细胞被直接重编程而产生了一种新的多能干细胞,称为诱导性多能干细胞。多能干细胞对于再生医学、药物筛选、疾病模型及其发育生物学的研究都有重要意义。多能干细胞研究,尤其是对诱导性多能干细胞的研究发展迅猛,本文对该领域的进展进行简要的综述。

GDNF在精原干细胞中对H19和A-myb表达的调控研究

目的通过研究胶质细胞神经源性营养因子(GDNF)对H19和A-myb表达的调控,探讨GDNF调节精原干细胞自我更新的分子机制。方法采用混合酶消化和差速贴壁法从出生后6 d的小鼠睾丸中分离、鉴定并培养精原干细胞。用GDNF分别刺激精原干细胞和经磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路抑制剂LY294002预处理的精原干细胞后,采用RT-PCR技术检测细胞H19和A-myb的表达。结果相关鉴定分析证实分离培养的细胞为精原干细胞。RT-PCR检测结果显示:GDNF刺激下的精原干细胞的H19和A-myb表达均显著上调,而经LY294002预处理的精原干细胞在GDNF刺激下其H19和A-myb的表达无明显变化。结论在体外培养的小鼠精原干细胞中,GDNF通过PI3K/Akt信号通路上调H19和A-myb的表达。

纪念我的导师刘廷析研究员

2005年9月，我加入中科院上海生命科学院／上海交通大学医学院健康科学研究所刘廷析老师的实验室，成为这个年轻实验室第一批研究生的一员。在当时还是一片空旷的瑞金医院地下室鱼房，刘老师为我们勾画了关于未来的宏大蓝图：利用斑马鱼这一新兴模式生物，研究和解决重大人类疾病问题。那时的他刚刚从哈佛大学医学院Dana．Farber癌症研究所完成博士后训练，年轻有为，意气奋发，怀着对科研工作的无比热爱和攻克重大疾病服务人民的远大理想。毅然回国。

纳米组织工程支架构建及细胞学研究进展

当材料颗粒或纤维等的尺度在1～100nm范围内时会表现出与同质大尺度材料所不具有的特殊物理、化学性能，该尺度材料被称为纳米材料。纳米材料或普通材料经纳米修饰后，如：添加纳米级（1～100nm）颗粒、纤维、凹槽、纹理等，所产生的明显有异于亚微米级以上尺度材料的理化性质我们称其为材料的纳米特性。体外实验研究表明生物材料的纳米特性对细胞的形态、行为、功能有着广泛的影响。

基于天然产物的白血病细胞分化机制的化学生物学研究

天然产物由于具有结构多样性和新颖性,具有独特的生理活性和新的作用机制,因此是开展化学生物学研究的重要工具,同时也是创新药物和先导化合物的重要来源.最近,我们研究发现天然活性化合物腺花素能够在体内和体外诱导维甲酸敏感和耐药的急性粒细胞性白血病细胞发生分化,有效延长白血病小鼠生存时间.在此基础上,以腺花素为分子探针,"垂钓"其潜在的靶分子,结果发现腺花素特异性靶向过氧化还原酶(Peroxiredoxin)Ⅰ//Ⅱ蛋白,导致H2O2的积聚,H2O2作为第二信使可诱导白血病细胞分化的信号通路.本文对这些工作做了论述和展望.

骨髓间充质干细胞的免疫学研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是骨髓中除造血干细胞以外的另一种成体干细胞,广泛分布于动物体内骨髓、肝脏、脂肪等多种组织中。MSCs具有强大的自我更新能力和多向分化潜能,是移植领域应用前景广阔的再生来源细胞;同时,MSCs是一种重要的免疫调节细胞,MSCs在炎症细胞因子刺激后对免疫系统表现出很强的抑制作用,所以MSCs有望应用于减少免疫排斥,延长移植物存活时间,治疗相关免疫失调症,如自身免疫疾病等方面。本文主要对间充质干细胞与免疫系统相互作用的研究做相关介绍。

间歇性低氧适应的心脏保护

间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)是指一定时间间断地暴露于低氧环境,而其余时间处于常氧环境。IH是机体某种生理和病理状态下的低氧形式。研究表明:间歇性低氧适应(IH adaptation),类似缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)和长期高原低氧适应(long-term high-altitude hypoxic adaptation,LHA),具有明显的心脏保护作用,表现为增强心肌对缺血/再灌注损伤的耐受性、限制心肌梗死面积和形态学改变、抗细胞凋亡、促进缺血/再灌注心脏舒缩功能的恢复,以及抗心律失常。尽管IH对心脏的保护作用不容质疑,但其作用机制远未阐明。IH心脏保护作用可能涉及氧的运输、能量代谢、神经体液调节、抗氧化酶、应激蛋白、腺苷系统、ATP敏感钾通道、线粒体及其钙调控、一氧化氮和蛋白激酶等多方面机制,并受低氧处理方式、动物年龄和性别等因素影响。IH心脏保护持续时间明显长于IPC,而对机体的不良影响远小于LHA,具有潜在的应用价值。

广西县级综合性医院医务人员工作满意度及影响因素分析

目的调查广西县级综合性医院医务人员的工作满意度,并分析其影响因素。方法采用随机抽样方法对广西壮族自治区武鸣县人民医院的250名医务人员进行工作满意度调查。问卷内容包括被调查者的性别、年龄、职别、职称、工作年限、文化程度、年收入和培训情况等,工作满意度评价涉及从事专业、工作环境、医疗仪器设备、收入报酬、绩效考核制度、职务晋升机会、培训/进修机会、机构制度实施效果、医患关系以及社会地位等维度。采用描述性分析、t检验和方差分析、非条件Logistic回归分析医务人员的工作满意度及其影响因素。结果该县级医院医务人员对工作的总体满意度为2.80分,满意率为65.0%,属于比较不满意。医师、护士、医技人员是满意度总体评价的负面影响因素,医师和医技人员与其他人员比较差异有统计学意义,接受过培训人员与未接受过培训人员比较差异有统计学意义。结论该县级医院的医务人员对收入报酬、医患关系和社会地位并不满意,建议建立公平、透明、合理的分配制度,推行有效措施改善医患关系,提高医务人员的社会地位。

广西县级综合性医院门诊患者满意度及其影响因素分析

目的调查广西县级综合性医院门诊患者的满意度并分析其影响因素。方法采用随机抽样方法对在广西壮族自治区武鸣县人民医院就诊的450名门诊患者进行满意度调查;问卷内容包括患者的基本信息如性别、年龄、户籍、工作状况、文化程度、经济收入和参加医疗保险等情况,满意度评价涉及就医方便程度、候诊时间、就医环境、医疗设备、医疗技术水平、医务人员服务态度、解释交流情况、费用水平和治疗效果等9个维度;采用描述性分析、t检验和方差分析、非条件logistic回归分析患者的满意度及其影响因素。结果该县级医院门诊患者对所接受医疗服务的总体满意度为3.74分,满意率为96.3%,属于比较满意。年龄<60岁、就业、失业、高中及中专学历、参加城镇基本医疗保险是门诊患者满意度总体评价的负面影响因素。非农业户籍和失业人群与其他群体比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论该县级医院门诊患者对医疗服务的总体评价是满意的,对候诊时间和治疗费用的满意度偏低。建议根据不同科室的特点,采用适宜有效的措施来减少患者的候诊时间;引入成本核算理念,借助信息化技术,从根本上降低医院的运营成本,建立透明的价格管理体系。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白和白细胞介素-10联合基因转染人骨关节炎软骨细胞的研究

目的探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白(hIL- 1Ra)和白细胞介素-10(hIL-10)联合基因转染在人骨关节炎(OA)关节软骨细胞中稳定表达的可行性。方法构建含目的基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10,经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内目的基因的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-IRa和ML-10蛋白表达量的水平。结果酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10真核表达载体。稳定转染软骨细胞后,RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10 mRNA片段。ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的ML-1Ra和ML-10表达,单个基因转染组中分别为(60.47±15.13)和(19.73±4.10)ng/L;联合基因转染组为(67.15±11.47)和(16.76±9.96)ng/L。未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL-1Ra和hIL-10表达,基因转染组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论逆转录病毒载体PLXRN介导的hIL-1Ra和hIL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达,为将表达hIL-1Ra和hIL-10目的基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据。

E2F6在物理性低氧及化学性低氧诱导的凋亡中的表达特征(英文)

心肌细胞凋亡性死亡是低氧发生时的重要病理学特征,但低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控机制尚未完全阐明。E2F6是E2F转录因子家族成员之一, 我们新近的研究证实其具有抑制DNA损伤诱导的细胞凋亡作用。但是,E2F6 是否参与了低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控尚不清楚。在本研究中,我们初步探讨了E2F6 在物理性低氧及化学性低氧模拟物诱导大鼠心肌细胞系H9c2 细胞凋亡中的表达特征。结果表明:物理性低氧、化学性低氧模拟物去铁胺(desferrioxamine, DFO)和氯化钴(cobaltchloride, CoCl2)均能有效诱导 H9c2 细胞发生凋亡。在物理性低氧及 CoCl2 诱导的 H9c2 细胞凋亡中,内源性 E2F6 mRNA 表达明显下调,但蛋白表达没有明显变化。而在DFO 诱导的凋亡中,内源性E2F6 mRNA及蛋白表达均发生明显下调。这些结果提示,E2F6 可能参与调控DFO 模拟低氧诱导的H9c2 细胞凋亡,而对物理性低氧及CoCl2 模拟低氧诱导的细胞凋亡敏感性较低。此外,DFO 模拟低氧诱导的细胞凋亡机制可能与物理性低氧及 CoCl2 模拟低氧诱导的细胞凋亡机制不同。

Hedgehog通路对成骨细胞增殖和分化的作用

目的:研究Hedgehog通路因子Shh和Ihh对成骨细胞增殖和分化的影响。方法:体外分离和培养新生大鼠颅顶骨成骨细胞,RT-PCR检测Shh和Ihh信号的表达;用HedgehogN端重组蛋白(N-Shh)及Hedgehog通道抑制剂Cyclopamine(cy)对成骨细胞进行干预,分别采用MTT比色法、流式细胞仪、碱性磷酸酶(ALP)定性定量、茜素红染色检测成骨细胞的增殖、分化及基质钙化情况;实时定量PCR检测Hedgehog通路相关基因Ptch和Smo的表达。采用SAS8.0软件包对数据进行t检验。结果:在成骨细胞体外生长过程中,Shh的表达逐渐减弱,而Ihh的表达逐渐增强;N-Shh促进成骨细胞的增殖(P<0.05)和S期细胞比例增加(P<0.05),促进ALP的活性并促进Ptch和Smo表达(P<0.05);cy则抑制成骨细胞的增殖和分化(P<0.05)。结论:Hedgehog通路参与对成骨细胞增殖和分化的调节。

不同强度张应力刺激影响关节软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达的研究

目的观察不同强度张应力刺激对人体体外培养的关节软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达的影响。方法获取因股骨颈骨折行髋关节置换术患者的股骨头关节软骨细胞。对第一代关节软骨细胞分别施加强度为3%、6%、15%延伸率的张应力刺激,张应力刺激后提取细胞的总RNA,进一步逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR检测Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的mRNA表达。结果虽然3%和6%的张应力刺激均可增加Ⅱ型胶原mRNA的表达,但没有统计学意义;15%的张应力刺激能明显抑制Ⅱ型胶原mRNA的表达,且有统计学意义。尽管张应力刺激均可增加聚集蛋白聚糖mRNA的表达,但均没有统计学意义(P>0.05)。结论不同强度的张应力刺激对关节软骨细胞表达Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的影响不同。15%延伸率的张应力刺激可明显抑制关节软骨细胞Ⅱ型胶原基因的表达,但不能明显改变聚集蛋白聚糖基因的表达,这可能与关节软骨细胞的功能适应性有关。

支原体污染对重组逆转录病毒的产生和感染靶细胞的影响

目的探讨细胞支原体污染对重组逆转录病毒的产生和靶细胞感染效率的影响。方法利用倒置荧光显微镜或流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)表达,确定细胞转染效率及病毒感染效率。PCR方法扩增支原体特异性核酸片段以检测培养细胞293T、NIH3T3及32D有无支原体污染。结果支原体抗生素Plasmocin有效清除了培养细胞内及上清中所污染的支原体;通过对细胞支原体的清除明显提高了逆转录病毒重组表达质粒在包装细胞中的转染效率及病毒感染靶细胞的效率。结论细胞受支原体污染后不仅影响了逆转录病毒重组表达质粒在包装细胞中的转染,而且严重影响了重组逆转录病毒对靶细胞的感染效率;Plasmocin是清除细胞支原体污染的理想抗生素。