大豆GmSOT1基因克隆、载体构建及初步表达研究

磺酸基转移酶(sulphotransferase,简称SOT)是硫代葡萄糖苷(glucosinolate,简称硫苷)核心结构合成途径中的关键酶之一。本研究采用反向遗传学方法从大豆基因组中克隆Gm SOT1基因并对其功能进行初步研究。首先采用PCR方法扩增大豆Gm SOT1基因,并将其连接到pRNAi载体上的35S(Ca MV35S)启动子后面;将35S:Gm SOT1基因片段从pRNAi载体上双酶切下来,连接到植物双元表达载体p CAMBIA2301的多克隆位点上,且命名为p CAMBIA2301-35S:Gm SOT1;采用根癌农杆菌介导的遗传转化方法转化大豆成熟胚,并考察其初步表达结果。结果表明:大豆GmSOT1基因的编码区(coding sequences,简称CDS)由1 014 bp的核苷酸组成,编码一个长度为337个氨基酸残基的蛋白质;35S:Gm SOT1被成功导入大豆胚细胞,初步观察发现Gm SOT1过量表达导致大豆胚根明显膨大弯曲。