S-腺苷甲硫氨酸研究进展

综述一种重要代谢中间物质 S-腺苷甲硫氨酸的体内代谢功能、制备、稳定化研究和临床应用进展。

重组Pichia pastoris的发酵条件初步研究

在摇瓶中进行重组Pichiapastoris菌株SIBAS5071发酵条件的研究,考察了碳源、底物、pH、磷酸盐浓度、溶氧量等对该菌细胞生长和产生S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的影响,初步确定的优化条件下发酵3d后,SAM产量可达2.3g/L(118mg/g干细胞)。

端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL-7404人肝癌细胞端粒酶活性的抑制和细胞凋亡的诱导

端粒酶在四株人肝癌细胞中均有表达,而在正常人肝组织标本中却为阴性。在终浓度为1μmol/L时,针对端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL-7404人肝癌细胞端粒酶活性具明显抑制作用,而正义和错义寡聚物则对该细胞端粒酶活性几乎没有影响。随着反义物浓度的降低,抑制作用亦随之减弱。用终浓度为5μmol/L的反义物处理培养的BEL-7404人肝癌细胞96h后,细胞形态发生变化。原位末端标记法(TUNEL)显示阳性标记细胞,流式细胞仪分析表明反义物作用后细胞凋亡率达到42.58%。

人生长激素基因组DNA在家蚕BmN细胞中的瞬时表达

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。 方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印迹分析鉴定表达产物 ;将全长基因序列、缺失第 1内含子基因序列和 c DNA序列的表达载体 ,分别转染细胞后检测各片段表达产物之间的差异。结果 :测序结果表明人生长激素基因组 DNA在细胞内正确转录、剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌蛋白质。 EL ISA检测发现 3种基因片段中 ,全长的基因序列在表达效果上要高于后两者 (P<0 .0 5 ) ,其中缺失第 1内含子的序列表达效率较 c DNA序列明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :在家蚕细胞中能够正确表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因 ;

细胞因子mRNA转录后调控的研究进展

细胞因子(cytokine)是分子量较小的分泌型蛋白质,是宿主免疫应答过程中一类重要的细胞间信号传递分子。它的转录后调控(post-transcriptional regulation)机制在协调机体促炎与抗炎细胞因子的水平,从而在调节免疫应答的起始和终止中起到非常重要的作用。细胞因子转录后调控机制主要包括:mRNA在胞浆中的定位、翻译起始及mRNA的降解等多个方面。近年来,许多研究已致力于阐明这些转录后调控机制如何共同调节免疫应答过程中细胞因子的表达水平。该文详细阐述了目前细胞因子转录后调控的研究进展,使人们对细胞因子的转录后调控机制及其生物学功能有更深入地了解和认识,另一方面将有助于以此为靶点预防、诊断及治疗免疫性疾病。

S-腺苷甲硫氨酸的稳定性及其稳定性盐

S -腺苷甲硫氨酸是生物体内重要的中间代谢物质 ,参与多种生化反应 ,具有广泛和多样的治疗作用 ,但其内在的不稳定性在很大程度上限制了它在临床上的应用。文章主要介绍了S -腺苷甲硫氨酸的失活机理。

修饰猪血红蛋白用于兔心体外延时保存的形态学观察

采用修饰猪血红蛋白为氧载体构建心脏保存液,并用于体外低温保存家兔心脏组织.通过电镜观察心肌细胞超微结构的变化,比较了Krebs Henseleit保存液及其经3,5 二溴水杨酸双延胡索酸酯修饰猪血红蛋白(DBBF pHb)及3,5 二溴水杨酸双延胡索酸酯(DBBF)和聚乙二醇双重修饰猪血红蛋白(mPEG DBBF pHb)改良的保存液.结果显示,mPEG DBBF pHb改良保存液的保存效果最佳,保存24h后心肌细胞核形态规则,肌节清晰,肌丝排列整齐,线粒体结构略有肿胀,但与对照组最为接近.

中心组合优化重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸用发酵培养基

利用统计学实验设计方法优化了重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸（sAM）的发酵培养基。采用中心组合设计和响应面分析对诱导相培养基中硫酸铵、甲醇和L-甲硫氨酸三个关键因素的浓度进行了优化，使SAM在全合成培养基上的摇瓶产量提高了60％，达到1．9g／L，并考察了胞内SAM合成酶活性的变化与SAM积累的相关性。

重组毕赤酵母发酵生产S-腺苷甲硫氨酸培养条件优化

甲醇营养型毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是通过其表达的SAM合成酶催化L-甲硫氨酸(L-Met)和ATP反应而合成的。本文采用全合成培养基,在摇瓶上进行了培养条件的优化,确定了接种量、pH、PTM1、PO43-等初步条件。并根据SAM生物合成的特征,重点对其碳、氮源的影响作了进一步的分析优化。结果表明:当CaSO40.465g/L,K2SO49.10g/L,MgSO4.7H2O 7.45g/L,PO43-0.5mol/L情况下,生长阶段,甘油4%、硫酸铵4.00g/L为最佳;诱导表达阶段,L-Met1.0g/L,甘油与甲醇比例为0.5、硫酸铵8.00g/L为最佳。优化后,SAM产量诱导4d后达1.48g/L,诱导5d后可达1.70g/L(131mg/g干细胞),L-Met的转化率可达40.65%,既利于工艺放大又便于产品的分离纯化。

哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶复合物中三个辅助因子在分子信号网络中的重要作用

氨基酰-tRNA合成酶是一类古老而保守的蛋白质,它们催化蛋白质生物合成的第一步反应.哺乳动物细胞内存在一个由8种氨基酰-tRNA合成酶和3种辅助因子组成的氨基酰-tRNA合成酶复合物.近年来,陆续发现该复合物中的3个辅助因子p43、p38和p18在复合物外的多种生命活动中扮演着重要角色:辅助因子p43是细胞因子内皮单核细胞激活肽Ⅱ的前体,参与了血管生成和细胞凋亡等许多生命过程;辅助因子p38在肺部发育中至关重要,同时它在神经细胞中的不正确积累可能与帕金森病有关.更有趣的是,辅助因子p38和p18可以在时空上高度有序地通过不同的通路参与细胞对DNA损伤的修复.这些研究增加了对于氨基酰-tRNA合成酶和细胞内大分子信号网络之间关系的认识,并将促进对该领域的研究与发展.

WW结构域——蛋白质蛋白质相互作用的一种模式

WW结构域是由 38～ 40个氨基酸残基严密组织形成一个连贯、紧凑的结构域 ;它以包含两个色氨酸残基为主要特征 ,能专一地与含有XPPXY保守序列的蛋白质相互作用 .这种相互作用涉及许多细胞内事件 ,如非受体信号传导、转录调节、蛋白质降解等等 ,并且这种相互作用的变化会直接或间接影响到人体的正常生理代谢功能而引起疾病 .

来源于tRNA的小分子RNA——降解碎片还是新的调控分子

具有经典三叶草结构的tRNA作为细胞蛋白质合成机器的重要元件,已经拥有几十年深入细致的研究历史.但是,对于其功能的认识远没有止境,尤其在其作为潜在的基因表达调控分子前体的功能目前正逐渐被人们认识.最新的多项研究结果表明,在多种细胞系中通过高通量测序发现某种来源于tRNA的小片段RNA,这些剪切产物被认为与多种microRNA加工体系关键分子(如Dicer、Ago家族中的蛋白质)具有相互作用的能力.同时,报告基因检测系统的研究结果也暗示,这些小片段RNA具有类似microRNA的潜在调控功能,可能在细胞应对外界环境刺激时发挥重要的调节作用.如其具体的作用机制能够被更多的实验结果阐明,将极大地扩展我们对于非编码RNA调控功能的认识.

脂肪组织来源的多能干细胞培养和外源基因的表达

目的研究脂肪组织来源的多能干细胞(ADMSCs)体外长期培养和外源基因的表达。方法 常规方法培养脂肪组织来源的多能干细胞,细胞免疫化学方法对未分化的细胞进行鉴定。用不同的物质诱导脂肪组织来源的多能干细胞向脂肪细胞和成骨细胞方向分化。用Ad5βgal转染脂肪组织来源的多能干细胞。结果从成年大鼠的脂肪组织中培养出多能干细胞,在体外生长形态类似成纤维细胞,可以维持未分化状态稳定增殖,体外扩增可超过10代。细胞表达波形蛋白。在不同物质的诱导下,干细胞可分化为脂肪细胞和成骨细胞。脂肪组织来源的多能干细胞体外可稳定表达外源基因。结论 由脂肪组织来源的多能干细胞可在体外培养并稳定增殖,能够表达外源基因,有潜力作为自体移植的一种细胞来源和基因治疗的一种载体。

细菌核糖体的结构和功能

二十多年来,国际上几家实验室独立地竞争性地应用高分辨率X-射线衍射技术在原子水平上绘制出了细菌完整核糖体及其亚基精细的三维结构图,为其生物功能的研究提供了清晰的结构基础。由于这项伟大的科学成果,美国科学家文卡特拉曼·拉马克里希南(Venkatraman Ramakrishnan)、托马斯·施泰茨(Thomas A.Steitz)和以色列女科学家阿达·约纳特(Ada E.Yonath)三人荣获2009年度诺贝尔化学奖。细菌核糖体是细胞中合成蛋白质的一种细胞器,包括大小不同的两个亚基,由3种RNA和50多种不同的蛋白质组成。