地龙加桂枝茯苓丸干预脑梗死发病的临床研究

目的探讨以脑内微小病变为中风治未病的客观依据,观察中药干预脑梗死发病的效果。方法以120例头颅核磁共振成像(MRI)显示的基底节上部存在Ⅱ型(T1WI高信号,T2WI高信号,FLAIR等信号)和Ⅲ型(T1WI高信号,T2WI高信号,FLAIR低信号)的多发微小病变的病例为研究对象,随机分为中药治疗组(地龙加桂枝茯苓丸)、阿司匹林对照组和阴性对照组各40例;3个月为1个疗程,连续服药时间不少于3个月;随访各组脑梗死发病情况。结果120例研究对象平均随访(400.69±207.60)天,最长随访822d,至截点各组均无死亡病例;中药治疗组无脑梗死发病病例,其中4例复查头颅MRI,微小病变无变化;阿司匹林对照组脑梗死发病1例;阴性对照组脑梗死发病5例。中药治疗组与阴性对照组的发病率具有显著差异(P<0.05)。结论中药可以控制脑内微小病变,进而预防脑梗死发生。

HT29和HCT116结肠癌细胞无血清培养形成肿瘤干细胞球特性的差异性研究

目的比较HT29和HCT116两种结肠癌细胞系中肿瘤干细胞的差异,初步探讨结肠癌干细胞研究模型。方法以无血清培养法培养HT29和HCT116细胞,观察其在不同时间形成肿瘤干细胞球的差异,用限制性稀释法计算两者的成球率;流式细胞术分析HT29和HCT116细胞系中CD44/CD24的表达情况;裸鼠体内成瘤实验鉴定HT29细胞球与HCT116细胞球成瘤能力。结果无血清培养法发现HCT116较HT29更易形成肿瘤干细胞球且所需时间更短,即HT29在无血清培养的第7天开始形成规则的球体,而HCT116则在第5天就已形成规则的球体,HCT116成球率(11.4±1.15)%高于HT29(3.31±0.27)%,且差异有统计学意义(P<0.05);HT29和HCT116中CD44±/CD24±各细胞含量有显著差异,结果显示具有干细胞特性的CD44+/CD24-结肠癌细胞在HCT116中所占比例(60.33±5.75)%明显高于HT29(9.23±2.15)%,差异有统计学意义(t=13.939,P<0.05);体内成瘤实验发现HCT116细胞球在裸鼠体内的成瘤能力明显强于HT29细胞球,HCT116细胞球的成瘤速度及瘤体生长速度都较HT29细胞球快。结论与HT29相比,HCT116结肠癌细胞系更适合作为肿瘤干细胞研究的模型。

斑马鱼血液肿瘤学的研究进展

斑马鱼已经成为当今人类遗传学和血液学研究的重要模式生物之一。文章介绍了斑马鱼造血系统的基本生物学特征,并重点阐述了斑马鱼在血液肿瘤学领域的应用和研究概况,显示了斑马鱼在血液肿瘤学的基础和临床研究方面均有着独特的应用前景,文章对此进行了展望。

体外模拟局部肾素血管紧张素系统对心肌纤维化的影响

目的建立局部肾素血管紧张素系统(RAS)对大鼠心肌纤维化影响的体外模型。方法原代培养新生大鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞,用RT-PCR鉴定两种细胞RAS各组分在基因水平的表达。从RAS各组分蛋白代谢的角度,采用依那普利阻断心肌细胞血管紧张素转换酶(ACE),放免法观察培养基中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)量的变化,结合Western blotting验证ACE2的存在,确定心肌细胞局部RAS各组分在蛋白水平的存在。以Transwell共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞,构建局部RAS影响心肌纤维化的体外模型。结果在心肌细胞中检测到RAS各组分基因的表达,但在成纤维细胞中未发现肾素和ACE2的表达;对心肌细胞采用依那普利干预后AngⅡ呈剂量依赖性下降,10-7mol/L组[(36.24±3.27)pg/mL]与对照组[(44.08±0.76)pg/mL]有显著差异(P<0.05);Western blotting证实心肌细胞在蛋白水平有ACE2的表达。结论心肌细胞能够单独形成局部RAS;而成纤维细胞因为不能生成肾素和ACE2,则本身不能形成局部RAS。以Transwell体外共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞能够建立一个用于研究局部RAS对心肌纤维化影响的体外模型。

无血清悬浮法培养结肠癌HT29细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选

目的:研究无血清培养基悬浮培养人结肠癌细胞系HT29,筛选并鉴定HT29结肠癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群。方法:通过无血清培养基筛选结肠癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群。应用克隆形成实验、表面标志检测、双苯酰亚胺(Hoechst)33342染色检测来确定培养细胞中肿瘤干细胞比例及其培养后的肿瘤干细胞含量变化。结果:结肠癌细胞系HT29中约50%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由飘浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,分化后细胞与培养储存的HT29细胞形态无明显差异。流式细胞仪检测表面标志,HT29细胞系中CD44+细胞含量为(44.18±2.18)%,而细胞球中CD44+细胞含量为(83.41±11.21)%;双苯酰亚胺33342染色检测提示HT29中侧群(sidepopulation,SP)细胞含量为(3.82±0.08)%,而细胞球中含量明显增高。结论:结肠癌细胞系HT29可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有一定比例的具有增殖和自我更新能力的结肠癌干细胞样细胞亚群。表面标志以及双苯酰亚胺33342检测差异提示细胞球中仅部分细胞具有干细胞的功能。

小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞血管紧张素Ⅱ 1型和2型受体的表达特征

胚胎干细胞(ESC)具有无限增殖和分化为体内3个胚层来源的各种类型组织细胞的潜能,经过体外诱导能够分化为心肌细胞,亦称为胚胎干细胞分化心肌细胞(ESCM).本研究探讨了ESC诱导分化心肌细胞过程中血管紧张素Ⅱ受体(ATR)的亚型AT1R和AT2R的表达特征.10-4mol/L维生素C体外诱导小鼠R1胚胎干细胞分化为自发搏动的心肌细胞,用免疫荧光法检测分化后的细胞表达心肌细胞特异性标志物α辅肌动蛋白.小鼠胚胎干细胞在诱导分化为心肌细胞以后,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量RT-PCR(Real-timeRT-PCR)方法检测到ESCM表达AT1R,并且呈时间依赖性逐渐增加的特点,在第14d达到高峰.Western印记法检测AT1R表达特征与RT-PCR结果相符.Western印记法的结果显示,血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)可作为AT1R激动剂激活AT1R,并使其下游的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平上调,预孵育AT1R抑制剂Losartan(10-6mol/L),此作用被抑制.RT-PCR方法显示,与新生小鼠心室肌细胞相比,ESCM的AT2R表达水平较低.

人胚胎视网膜色素上皮细胞的体外培养和吞噬作用

目的探讨人胚胎视网膜色素上皮(RPE)细胞分离培养的特性及其吞噬作用。方法取发育至13～15周的新鲜人胚胎眼球,显微解剖后采用机械胰酶消化法分离培养RPE细胞,应用免疫荧光法观察人胚胎RPE细胞吞噬视网膜光感受细胞外节膜盘。结果人胚胎发育至13～15周后,RPE细胞可应用标准的培养方法进行体外培养和传代。根据测定的人胚胎RPE细胞生长曲线,取2～6代细胞用于实验培养的人胚胎RPE细胞具备吞噬功能。结论改进了人胚胎RPE细胞的培养方法,证明人胚胎RPE细胞在体外具有吞噬能力。

不同强度张应力影响成骨细胞分化的体外实验研究

目的探讨不同强度的张应力对人成骨细胞分化的影响。方法根据骨假体界面应力有限元分析数据和细胞水平应力扩增理论，分别以0．8％、1．6％、2．4％和3．2％的强度在体外对人成骨细胞连续48h施加1Hz的牵张应力，观察碱性磷酸酶活性的变化和其他成骨相关基因的表达。结果成骨细胞碱性磷酸酶活性的提高出现在0．8％和1．6％的应变水平；2．4％和3．2％的应变促进骨钙素的表达；3．2％的应变增强Cbfa1／Runx2的表达；与静力对照相比，所有应变组Ⅰ型胶原基因的表达增强；与1．6％应变组相比，Ⅰ型胶原基因的表达在0．8％时减弱，在3．2％时增强（P〈0．05）。结论较高强度的应变促进与基质成熟相关的基因的表达，而低强度的应变刺激碱性磷酸酶活性的提高。Ⅰ型胶原基因表达对张应力的应答呈强度依赖性。

大鼠终板软骨内源性转化生长因子β1与早期钙化相关基因表达的变化

目的建立大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型，探讨自然退变过程中内源性转化生长因子（TGF）-β1与钙化基因表达变化的关系。方法取大鼠腰椎终板软骨细胞，酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞，选取P2代和P4代，在体外均培养6d，观察细胞表型及利用茜素红染色，观察P2与P4代细胞的变化。用实时PCR检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX-9及代谢相关基因蛋白多糖、基质金属蛋白酶（MMP）-13、含I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS）4、5的变化，验证体外退变模型的建立，在此基础上，继续检测生长因子TGF．131及钙化相关基因（ANK）、胞外核苷酸焦磷酸酶（ENPP）、组织非特异性碱性磷酸酶（TNAP）的变化。结果相对于P2代细胞，P4代细胞形态上有梭形变趋势，茜素红染色无明显变化。P4代转录因子SOX-9表达明显低于P2代（P4／P2=0．0690，P=0．0489），Ⅱ型胶原（P4／P2=0．0535，P=0．009）及蛋白多糖（P4／P2=0．2672，P=0．0343）表达也均明显低于P2代，其他代谢相关基因无明显改变。P4代细胞TGF-131（P4／P2=0．5934，P=0．0482）、TNAP（P4／P2=0．0385，P=0．0139）和ANK（P4／P2=0．2121，P=0．0009）表达均明显低于P2代，ENPP表达无明显改变（P〉0．05）。结论终板软骨随着传代次数增多，从P2代到P4代，开始发生体外自然退变，Ⅱ型胶原、SOX-9及蛋白多糖明显下调。内源性TGF-β1与钙化相关基因表达均下调，钙化相关基因ANK下调可能由内源性TGF-β1下调引起，提示调节内源性TGF-β1在终板软骨中的表达有可能会阻止椎间盘的退变。

整合分析基因表达与拷贝数变异识别癌症的驱动基因及调控子miRNAs

目的:通过整合分析基因的表达与拷贝数变异(CNV)识别癌症的驱动基因及调控子mi RNAs。方法:通过整合基因表达与CNV数据,分别计算了乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌六种癌症中mi RNAs的调控得分,提出了一个识别驱动基因和显著调控子mi RNAs的方法。结果:本文研究发现,CNV区域上编码的基因相比于非CNV区域上编码的基因更倾向于受mi RNAs调控。但是,癌相关CNV区域上的基因相比正常CNV区域上的基因更少受mi RNAs调控。本研究识别出了EXOSC4、ZNF7、BOP1等原癌基因,以及mi R-488、mi R-27a、mi R-454等在多种癌症中都起调控作用的调控子mi RNAs。结论:本文的方法为癌症研究带来了新的启发,这些具有调控扩增基因过表达作用的mi RNAs的发现,有助于我们更进一步了解癌基因表达的复杂调控机制,进而推动癌症的诊断、治疗和预后。