肝组织特异表达人核受体nr5a2转基因小鼠的构建(英文)

人乙肝病毒增强子ⅡB1结合因子(hB1F)系FtzF1(NR5A)亚家族的新成员。经基因重组法将人hb1fcDNA置于小鼠白蛋白增强子/启动子序列下游构建成肝特异重组载体,通过原核显微注射将该载体导入小鼠受精卵原核,经注射且状态良好的卵回输至假孕母鼠输卵管。产下仔鼠经PCR和Southernblotting鉴定,同时RTPCR和Westernblotting分析转基因的表达。阳性Founder鼠与正常C57鼠交配以建立转基因纯系小鼠,F1代以PCR法鉴定。结果共获得4只PCR鉴定转基因阳性Founder鼠,其中一只同时经Southernblotting鉴定为阳性。RTPCR和Westernblotting结果显示,外源基因在转基因小鼠的肝组织成功表达。遗传学分析表明,转基因已整合入小鼠基因组并可稳定遗传。

应用DIGE测定帕金森病脑脊液中蛋白变化

目的测定帕金森病（PD）脑脊液中蛋白的变化，为进一步探索PD的生物标记物提供线索。方法采用荧光差异凝胶电泳技术分离并筛选PD和正常对照者脑脊液中差异表达蛋白质．用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）或串联质谱技术进行鉴定并分析。结果共发现20个明显的差异蛋自点，其中11个点在PD中上调，9个点下调，共鉴定出8个蛋白质，其中有3个未知蛋白，均表现为下调。蛋白MYPTl出现明显下调，载脂蛋白原、脂蛋白发生明显上调，载脂蛋白A—I的一个异构体发生上调，一个异构体发生下调。结论MYPT1与突触功能有关，载脂蛋白原、脂蛋白、载脂蛋白A—I与胆固醇代谢有关，这些蛋白与PD发生有一定关联，有可能成为PD的生物标记物。

SiRNA表达载体介导的RNA干涉对人核受体的NR5A2的表达抑制研究

目的:探讨经载体介导的RNA干涉对人核受体NR5A2表达抑制的可行性。方法:设计并构建人nr5a2特异siRNA表达载体pSilencer1.0-U6-nr5a2,经脂质体介导转入肝癌细胞BEL-7402,RT-PCR分析nr5a2表达情况。结果:瞬时转染重组载体pSilencer1.0-U6-nr5a2的BEL-7402细胞其nr5a2的表达明显受抑,抑制效率可达70%。结论:siRNA表达载体介导的RNA干涉可在细胞水平有效抑制EEL-7402细胞nr5a2的表达。