利用家蚕生物反应器生产有用蛋白的研究

就家蚕 / Bm NPV表达系统的原理及生产流程、外源基因在该系统中的表达及表达产物的药物开发作了较为详细的阐述 ,介绍了利用家蚕大量生产有用蛋白的技术开发状况 。

锌指类基因调控蛋白──生物无机化学和分子生物学发展的新领域

生命必需元素锌，除了以锌酶的形式，参与生物体的各类代谢过程外，近年来发现，锌还以各种锌蛋白的结构方式，包括锌指、锌纽、锌带和锌簇等，参与生物体的基因转录、复制及蛋白质的合成等各种基因调节和控制过程．联想到金属硫蛋白在锌的体内平衡中所扮演的角色，很有可能锌是通过金属硫蛋白和锌指类蛋白的逐级调控，成为生物体生长发育的调控中心．癌基因和人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）的许多调节蛋白也具有锌指类结构，这给癌症和爱滋病的治疗提供了新思路．

日本血吸虫(中国大陆株)基因工程疫苗的研究

本文报道应用PCR技术或RT－PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库或成虫mRNA中扩增到Sj28GST、C－Sjparamyosin、H-Sj23、Sj14、Sj22．6和Sj．TPI6个编码日本血吸虫中国大陆株抗原的基因，并把它们克隆入适合载体中，在大肠杆菌系统和蚕核型多角体病毒（BmNPV）系统中进行表达．免疫学检测证明这6种基因重组抗原都具有较好的抗原性。我们进一步应用4种比较成熟的基因重组抗原Sj26GST、Sj28GST、C－Sj．paramyosin和H－Sj23进行3批绵羊试验和1批黄、水牛田间试验，评估这几种重组抗原在绵羊和黄、水牛中的免疫保护效果，rSj26GST和rSj28GST分别获得62．1％和50.4％－68.5％的显著保护；n－paramyosin获得42.9％－55．3％、r－C－paramyosin获得44．2％－47．1％的显著保护，r－H－Sj23为51．2％－66．1％的显著保护．各组免疫后的粪便虫卵数和组织虫卵数也有不同程度的减少．用r－C－Sjparamyosin、r－Sj28GST和r－H－Sj23免疫典、水牛在血吸虫重疫区田间试验的结果表明，减虫率水牛高于黄牛，显示上述试验的3种日本血吸虫重组分子抗原有希望成为家畜日本血吸虫病的候选疫苗抗原．

中国小麦丛矮病毒与日本北方禾谷花叶病毒相关性的研究

从过去各自独立进行的研究工作中了解到,中国小麦丛矮病毒(WRSV)与日本北方禾谷花叶病毒(NCMV)有很大的相似性,但尚无直接证据证明这两种病毒之间的关系。本文从下述三个方面证明这两种病毒是相同的:(1)奥氏双扩散法证明,WRSV的核衣壳抗血清能同时与WRSV和NCMV核衣壳形成清晰的沉淀带,并且异源形成的相邻沉淀带能互相吻合;(2)WRSV和NCMV核衣壳制剂的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳证明两者的N蛋白分子量一致的,均与我们过去报道的N_2蛋白的分子量相等;(3)从WRSV和NCMV的完整病毒及核衣壳的横纹周期间距直接比较,两者也是一致的。至于WRSV和NCMV是完全相同的病毒,还是同一种病毒的不同株系,则尚需对两者的寄主范围等作进一步的研究。

恶性疟原虫疫苗研究Ⅱ．一种新的化学拼接法重组多价保护性抗原的基因

将恶性疟原虫保护性抗原环子孢子蛋白（ＣＳＰ）、环状体感染红细胞表面抗原（ＲＥＳＡ）、裂殖子表面抗原１和２（ＭＳＡ１和ＭＳＡ２）４种抗原中具有Ｔ和／或Ｂ细胞表位的６个基因片段，按照我们设计的方案排成一条线性序列，经在计算机上分析比较后，分成长短不一的８个基因片段（Ｆ１～Ｆ８），其中Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５和Ｆ７为正链片段，Ｆ２、Ｆ４、Ｆ６和Ｆ８为负链片段。每相邻两个片段间预设１５个互补碱基搭头。在ＤＮＡ合成仪上分别合成这８个片段后，把Ｆ２～Ｆ７６个片段分别磷酰化，按等摩尔浓度混合。经３０℃退火，使８个片段连接起来，然后按基因体外扩增的原理，填补互补碱基以外的缺口，重组成新的多价基因。我们把这种化学拼接法取名为“缺口填补法（Ｆｉｌｌｉｎｇ－ｑａｐＭｅｔｈｏｄ）”，经克隆和测序验证，表明这种方法具有效果好、经济、简便等优点。

反义寡聚脱氧核苷酸（ODN）衍生物抑制乙肝病毒抗原表达的研究

为比较针对中不同基因的ＯＤＮ硫代衍生物阻断乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的抗原表达，合成了与核心蛋白编码基因起始码上游序列（＃１８９３－１９０７），多聚酶蛋白编码基因起始码上游及内部序列（＃２２９７－２３１３，＃２７９７－２８１３）３．５ｋｂＲＮＡ３′端起始负链ＤＮＡ合成序列（＃ｌ８１７－１８３１）互补的寡聚脱氧核苷酸硫代衍生物［Ｃ－ＯＤＮ，Ｐ－ＯＤＮ，ＰＭ－ＯＤＮ，ＰＢＳ－ＯＤＮ］，分别在ＨＢＶ短暂表达和稳定表达细胞培养系统中观察其抑制ＨＢＶ抗原表达的作用。结果发现，当培养液中ＯＤＮ浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时，四种ＯＤＮ均能抑制ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ（乙肝表面抗原）的产生（抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，２４．５％；ＰＯＤＮ，１３．４％；ＰＭ－ＯＤＮ，３８．４％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，２８．４％）；与ＨＢＶＤＮＡ双体质粒共转染ＨｅｐＧ２细胞后部分ＯＤＮ可明显抑制ＨＢＶＤＮＡ在细胞内表达（ＨＢｅａｇ分泌抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，５２％；ＰＭ－ＯＤＮ，７０％；Ｐ－ＯＤＮ，４８％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，１８％）。用测定上清中人白蛋白的结果证明，Ｃ－ＯＤＮ的细胞毒作用最低。对Ｃ－ＯＤＮ的作用机理及进一步发展ＯＤＮ的应用也进行了?

纤维粘连蛋白的分子生物学研究

纤维粘连蛋白是一双链结构、由多个功能区构成的大分子糖蛋白．多肽链分子由三种形式的结构模型重复出现所构成，相邻的几个重复结构组成一个功能区。体内仅一条ＦＮ基因，经选择剪切产生多种形式的ＦＮ多肽，它们之间的区别在于三个可变区氨基酸残基的不同。纤维粘连蛋白参与广泛的病理及生理过程，其功能区结构及基因结构的深入研究，有利于阐明其结构与功能的关系。

天花粉中三个同工凝集素的分离纯化及其生物学性质研究

运用阴离子交换层析从亲和纯的天花粉凝集囊中分离得到三个同工形式的凝集素，它们都具有结合半乳糖的能力，都能与天花粉凝集大的抗血清形成免疫沉淀线，并且其它各方面的性质如疏水结合能力也相仿。对它们生物学性质的检测，发现它们都能杀伤黑色素瘤细胞，但缺乏抑制无细胞蛋白质生物合成的能力。另外，对植物中同工形式凝集大的存在进行了讨论。

重组ACTH(4-10)与GDNF融合蛋白及其生物活性研究

通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素 4 10 (ACTH (4 10 ) )与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的融合基因 ,并将它重组克隆到表达载体 pET 2 8a (+ )中 ,构建表达质粒pET ACTH (4 10 ) GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导可高效表达ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白 .用Ni2 + NTA树脂一步法纯化目的蛋白 ,纯度达 85 %以上 .纯化和复性的ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活 ,作用强于ACTH (4 10 )及GDNF蛋白 .

人重组PSP及其生物活性研究

为了获得人重组 persephin( PSP)并研究其生物学活性 ,从人胎脑组织中提取总 RNA,以RT- PCR方法获取编码人 PSP成熟蛋白 c DNA.将人 PSP c DNA插入含 T7启动子的质粒 p ET-2 8a( + ) ,构建表达质粒 p ET- PSP,转化大肠杆菌 BL 2 1 ( DE3)获得表达菌株 BLPSP,经 IPTG诱导表达的 PSP形成包含体 .凝胶自动扫描分析表明 ,PSP表达量约占菌体总蛋白 2 0 %以上 .用Ni2 + - NTA树脂一步法纯化目的蛋白 ,纯度达 85%以上 .纯化和复性的 PSP蛋白能显著促进脊髓神经元的存活 .

基因工程人白细胞介素-2的生物功能研究

重组白细胞介素-2(rIL-2),能维持T-淋巴细胞及CTLL-2细胞株(IL-2依赖)的增殖达一个月之久,细胞总数增加了近千倍。这种作用能被rIL-2专一的单克隆抗体破坏,显示rIL-2的专一性;rIL-2能增加天然杀伤细胞(NK)的活动达46—96%,但其剂量太高时反而起抑制作用;它能诱异淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine Activated Killer,LAK)的生成,它还能杀伤转移性人肺癌细胞及抗NK的HL-60癌细胞株,其杀伤效率达37.96—54.84%。这说明我们获得的rIL-2在上述生物功能方面与天然IL-2相似。

农作物抗病分子生物学研究中的若干问题

据有关部门统计,因病害全世界每年损失的农作物约为总产量的10％,即每年约损失600亿美元。这个巨大的损失还是在花费大量的人力、物力的防治基础上。病害不仅使农作物减产还常使农产品质量下降且妨碍农产品的贸易和检疫上的麻烦。培育新的抗病品种是植病防治的最好方法之一。常规的杂交育种是一个好办法,也取得不少良好的效果。

生物固氮研究的一些近况

生物固氮的发现和研究已有足足一百余年的历史了。由于生物固氮有其潜在的、极为重要的经济价值而一直为人们所重视。在七十年代,国际上曾有不少人抱着这样的希望:生物固氮也许在短期内会在应用上有所突破。那时,许多科学家,特别是许多优秀的分子遗传学家渗透到这个研究领域。不料,经过十多年的艰苦研究。

神经系统发育过程的分子生物学研究

神经系统发育过程的分子生物学研究景乃禾（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词 神经系统发育，分子机制动物神经系统的发育是一个极其复杂的过程，涉及生物学的许多领域。近年来，其细胞和分子基础研究主要围绕以下几方面进行：１）神经诱导的分子...

RNA研究的一些新进展——RNA生物功能的多样性

近几年发现某些RNA具有酶(Ribozyme)的催化功能。这不仅改变了酶都是蛋白质的传统观念,而且认为在远古时期RNA可能就具有自我复制的活力,因而RNA是先于DNA和蛋白质的最早出现的生物大分子。真核细胞mRNA的剪接机制比较复杂,至今还远没有搞清楚。现在知道,必须通过一个由2′地,5′磷酸二酯键形成的“套环”结构,另外还有一类核蛋白体(snRNP)参与反应。反义RNA通过其碱基序列与相关的mRNA形成互补碱基对的方式影响mRNA的翻译。tRNA是蛋白质生物合成中必不可少的一类RNA。此外,它还有其它重要的生物功能。

蛋白质化学中的比较研究

自从牛胰岛素的一级结构被测定以后,越来越多的多肽和蛋白质的一级结构已为人们所知晓,这也为蛋白质的比较研究展示了新的领域。最先进行的比较研究是不同种属生物中的同一蛋白质的氨基酸的排列顺序。

生物化学的新分枝──古生物化学简介

生物化学的新分枝──古生物化学简介李文杰（中国科学院上海生物化学研究所，２０００３１）关键词化石，古生物化学近年来，分子生物学家们不断从化石中获得了不同的ＤＮＡ片段并成功地对它们进行了顺序分析。这是饶有兴趣的。ＤＮＡ可以很好地保存在博物馆收藏品的干燥...

转基因小鼠肝癌细胞株的建立及生物学特性研究

目的：将细胞因子基因尽快应用于临床基因治疗。方法：用逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ将小鼠γ干扰素基因（ｍＩＦＮγ）导入小鼠肝癌细胞株，建立了转基因的肝癌细胞株Ｈ２２ｍＩＦＮγ，对该细胞株的生长、形态结构、ＤＮＡ 含量及细胞周期的变化、γ干扰素的分泌、细胞的免疫原性及致瘤性等生物学特性进行了研究。结果：发现该株细胞的生长、形态结构、ＤＮＡ含量及细胞周期均无明显改变，细胞能分泌一定活性的γ干扰素，ＭＨＣＩＩ类抗原的表达量增加，细胞致瘤性明显下降。结论：为进一步开展异体乃至自体瘤苗进行基因治疗创造了条件。

日本血吸虫中国大陆株28kDa GST基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌ＴＢ１中表达合日本血吸虫中国大陆株２８ｋＤｅ抗原基因的重组质粒，表达产物是融 合蛋白，分子量为３３ｋＤａ。采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化表达产物。２、４－二硝基氯苯／谷胱 甘肽分光光度测定法和琼脂糖－淀粉凝胶电泳显示重组抗原具有较高的谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ） 活力。酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）结果表明该重组抗原可检测到重组２８ｋＤａ ＧＳＴ或日本血吸虫 虫体ＧＳＴ免疫绵羊血清中的特异性抗体；免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）分析揭示重组抗原的 ３３ｋＤａ抗原分子能被这两种免疫血清识别，证明它具有ＧＳＴ抗原性。