胰岛素分子与其受体的结合部位的研究

胰岛素是一个多生理功能的蛋白质激素,其发挥生理功能的第一步,是与其专一受体结合。60年代末和70年代初相继报道了胰岛素的晶体结构和其靶细胞膜上专一的胰岛素受体的存在。因此,鉴定胰岛素分子上与其受体的结合部位,对深入了解胰岛素的结构与功能关系及其作用原理具有重要意义。胰岛素晶体结构的阐明,为研究胰岛素的受体结合部位提供了良好的基础。但由于受体含量很低,且是膜蛋白,要获得纯的受体,制备“胰岛素-胰岛素受体”复合物,尤其是该复合物的结晶,是很艰难的,以致不能直接通过对“胰岛素-胰岛素受体”复合物的结构分析,认识胰岛素的受体结合部位的组成和性质。这样,通过比较胰岛素及其类似物与胰岛素受体的结合能力和生物活力的关系,成了了解胰岛素受体结合部位的主要途径。

大肠杆菌tRNA^(Leu)的提取、纯化及性质研究

采用高表达大肠杆菌ｔＲＮＡＬｅｕ菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸ｔＲＮＡＬｅｕ１和ｔＲＮＡＬｅｕ２．利用稳态动力学手段研究了ｔＲＮＡＬｅｕ１及脱镁ｔＲＮＡＬｅｕ１在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的氨酰化作用．ｔＲＮＡＬｅｕ１与亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的结合及催化效率均受参与稀土离子的影响，表观Ｋｍ值有较明显的变化．结果表明，亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶催化的ｔＲＮＡＬｅｕ１氨酰化反应所需Ｍｇ２＋能够被稀土离子取代，但亲合性能不同．

重组人胰岛素研究的回顾和展望

胰岛素（ｉｎｓｕｌｉｎ）是由Ａ和Ｂ两条多肽链组成的蛋白质激素，Ａ链含２１个氨基酸残基，Ｂ链由３０个氨基酸残基组成，共有三个二硫键，其中两个连接Ａ链和Ｂ链，一个在Ａ链内。胰岛素是在胰岛的β细胞中被合成和分泌，随血液循环到达靶组织，通过与其专一膜受体结合表现出生理功能的。胰岛素用于临床已有７０多年［１］，由于它是治疗糖尿病的特效药物和糖尿病患者在人口中的比例相当高，所以对胰岛素的需求量很大。这是促使人们不断改进老工艺和采用新的科技成果生产胰岛素的动力。ＤＮＡ重组技术的出现为胰岛素的生产开创了新的途径。第一个重组ＤＮＡ分子［２］报道后不久，Ｕｌｌｒｉｃｈ等［３］，Ｉｔａｋｕｒａ及其同事（１９７８）以及Ｖｉｌ－ｌａ－Ｋｏｍａｒｏｆｆ等（１９７８）就相继报道了胰岛素在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达成功，成为最早在微生物中被表达的哺乳动物蛋白质之一。人胰岛素是第一个被投放市场的生物工程蛋白质药物［４］。十多年来，人们在胰岛素基因的制备，表达体系的选择和改进，表达产物的加工处理等方面进行了卓有成效的探索和研究。不仅实现了人胰岛素在微生物中的生物合成并推向市场，而且推动和加快了其他哺乳动物蛋白质基因工程的研究进程。

编码酵母丙氨酸tRNA两个半分子的DNA的克隆

用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。

tRNA个性研究进展

ｔＲＮＡ参与蛋白质生物合成中至关重要的两个功能上相连的生物化学事件。一种是由氨基酰－ｔＲＮＡ合成酶（ａａＲＳ）催化的ｔＲ－ＮＡ的氨基酰化（ｔＲＮＡ的个性），通过ａａＲＳ对ｔＲＮＡ的序列和结构元件的专一识别和氨基酰化，使ｔＲＮＡ转化为氨基酰ｔＲＮＡ。另...

免疫耐受的基础研究与临床应用

免疫耐受是机体免疫系统接触某—抗原后形成的特异性无应答状态,是免疫应答的一种重要类型,免疫应答和免疫耐受一直是免疫学研究的两个核心主题.免疫耐受的诱导、维持和破坏与许多临床疾病的发生、发展和转归有关.人们企图用诱导和维持免疫耐受性的方法来防治超敏反应、自身免疫病及器官移植排斥反应;对某些感染性疾病及肿瘤,则可通过消除免疫耐受,激发有效的免疫应答来促进病原体的清除及杀伤肿瘤细胞.随着对免疫耐受机理的阐明,可以用诱导免疫耐受的方法,达到定向操纵免疫应答的过程,必将为医学的进步起到重大的推动作用.

新生隐球菌黑素生成的研究进展

新生隐球菌作为一种条件致病菌日益受到重视 ,感染主要在艾滋病和其他免疫功能受损的患者中发生。新生隐球菌产生数种毒力因子 ,而产生的黑素是一明确的重要的毒力因子。本文从黑素的产生、可能的致病机理 ,催化产生黑素的酚氧化酶的特性及其结构基因的研究现状等方面进行综述。

镧离子对溶液中tRNA构象影响的拉曼光谱研究

得到了大肠杆菌亮氨酸转移核糖核酸（ｔＲＮＡＬｅｕ）及镧离子对溶液中ｔＲＮＡ构象影响的激光拉曼光谱，实验发现拉曼光谱能够提供溶液状态中ｔＲＮＡＬｅｕ的核糖磷酸骨架构象、碱基堆积的相对程度、碱基对的一些特殊信息。

细胞周期抑制蛋白p27的研究进展

p27基因位于人类染色体12p13,其编码的蛋白对cyclinsCDKs具有广泛的抑制活性,是细胞周期调控的抑制蛋白。它以化学剂量的方式调节细胞周期的进程,参与细胞的生长、分化等过程。对p27基因的发现、基因结构、对细胞周期和细胞分化的调控机制以及与肿瘤的关系作一介绍。

用聚合酶链反应检测产蛋下降综合症病毒核酸的研究

根据对ＥＤＳ一ＤＮＡ重组质粒ｐＴＥＺ.Ｐ３和ｐＴＥＺ．Ｐ２８的核酸序列分析结果，设计了两对引物，它们均能从ＥＤＳ一ＤＮＡ上扩增出一个特异片段，其长度分别为２３８ｂｐ和２０９ｂｐ。经比较，ＰＣＲ比血球凝集试验至少灵敏２００倍，比核酸杂交试验灵敏千万倍；对１００份自然发病鸡的肛拭子、血液和软壳蛋等样品的检测结果表明：ＰＣＲ的阳性检出率远高于核酸杂交试验，并用病毒分离方法证实了ＰＣＲ对野外病料的检出结果是可信的，对常规的ＰＣＲ条件还作了改进，使试剂的用量减少了１０倍以上，并简化了一些烦琐操作。

乳头瘤病毒E1蛋白研究进展

乳头瘤病毒E1蛋白是该病毒起始DNA复制的关键蛋白,其活性部分主要位于C端2/3序列,作用的发挥是通过与Ori中的E1BS结合后而行使DNA解旋酶功能。在乳头瘤病毒DNA复制中,E1蛋白(E1)发挥作用尚需E2蛋白(E2)的参与,同时,E1对E2介导的转录也有调节作用。研究E1的结构和功能有助于揭开乳头瘤病毒的生活史及其致病的分子机制,为控制该病毒所致的疾病提供依据。

杂交分子“表皮生长因子-胰岛素片段”的酶促合成和性质

通过酶促合成的方法,得到了小鼠表皮生长因子(mEGF)与胰岛素片段B(23-25)GFFNH_2的杂交分子mEGF(1-53)-GFFNH_2和mEGF(1-48)-GFFNH_2。测定了它们的促生长活性及与EGF受体和胰岛素受体的结合能力。结果表明,杂交分子mEGF(1-53)-GFFNH_2和mEGF(1-48)-GFFNH_2仍分别保留有与mEGF(1-53)和mEGF(1-48)基本上相同的生物活力和与EGF受体的结合能力;杂交分子mEGF(1-53)-GFFNH_2也能与胰岛素受体结合。

毛细管电泳技术分析水稻中的总核糖核酸

通过高温干烤和焦碳酸二乙酯 (DEPC)两种技术除去核糖核酸 (RNA)酶 ,在保证RNA的稳定性的情况下 ,在1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )筛分介质中 ,利用无胶筛分毛细管电泳技术对水稻中的总RNA进行了分析 ,整个分析过程在 15min内完成。利用 5 .0 %T ,0 %C线性聚丙烯酰胺筛分介质 ,对水稻中的转移RNA(tRNA)进行了较为详细的分析 ,在 30min内可将tRNA分为两组共 9个峰。该方法可用于植物中RNA的分析 ,具有快速、准确的特点。

羟基磷灰石法和葡聚糖活性炭法测定雌激素受体的比较

目的：建立一种比葡聚糖活性炭（ＤＣＣ）法更灵敏、准确、简便的羟基磷灰石（ＨＡＰ）法测定雌激素受体（ＥＲ）的含量。方法：以ＳＤ雌性大鼠子宫胞浆抽提液为材料，用ＨＡＰ法多点饱和分析和单点饱和分析ＥＲ含量；比较在测定反应中总蛋白量对ＨＡＰ法和ＤＣＣ法测定值的影响，并比较两者在３０例乳腺癌和３０例子宫肌瘤中ＥＲ测定值的差异。结果：大鼠子宫胞浆ＥＲ含量为１３５ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，Ｋｄ＝０．５８ｎＭ。当测定反应中总蛋白量低于２００μｇ时，ＤＣＣ法测定值严重失真，而ＨＡＰ法在总蛋白量为５０μｇ时仍能准确测出真实值。在３０例乳腺癌和３０例子宫肌瘤ＥＲ测定值中，当ＥＲ含量较低时，ＤＣＣ法测定值偏低甚至有假阴性．而ＥＲ含量高时两者接近。在ＥＲ含量较高时，两者测定值相近。结论：ＨＡＰ法比ＤＣＣ法灵敏、可靠。用以测定甾体激素高非特异性结合的靶组织与非靶组织中的ＥＲ低含量时，ＨＡＰ法更有价值。

毛细管电泳技术分析PDGF-B基因启动子与蛋白质的复合物

利用 1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )作为筛分介质 ,对人体血小板长生因子 (PDGF) B基因启动子与核蛋白形成的复合物进行了分析。结果显示主要有两种核蛋白与PDGF B基因启动子具有较强的结合能力 ,能形成DNA蛋白质复合物。所得结论与传统凝胶电泳相似。该方法具有较高的分离度和良好的重现性 ,整个分析可在 5 0min内完成。该方法不失为一种基于PDGF为研究目标、用于PDGF与蛋白质复合物形成及抑制行为分析的快速、准确的实用方法。

稀土离子对tRNA熔融曲线和熔融温度的影响

采用光谱技术就稀土离子对大肠杆菌tRNALeu和酵母tRNAPhe的熔融曲线和熔融温度的影响进行了研究，结果表明：在低浓度（1-50μmol／L）条件，tRNAs在260nm的吸光度值随温度的升高而升高，稀土高于对tRNA分子结构起稳定作用；在较高稀土离子浓度，如在5mmol／RE3+或5mmol／LRE3+和2mm01／L精胺共同存在下，tRNAs在260nm的吸光度数值随温度的升高而降低，tRNA分子展现出的这种低色效应和反Tm现象说明结合到tRNA上的稀土离子对tRNA分子的二级结构起稳定作用。

基因治疗的现状与展望

自从明确了单基因缺陷的疾病；就提出了基因治疗的概念。基因治疗是直接通过基因传递治疗人类疾病的一种手段，还可以理解成临床症状通过基因物质的传递而得到改善。目前在这个领域已经投入了几十亿美元，开展了超过三百例的临床试验，人们正通过不懈努力，期待着基因治疗的美好前景。

阳离子脂质体介导基因转染的最优化条件

阳离子脂质体介导基因转染的最优化条件王瓞林其谁（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室，上海２０００３１）关键词阳离子脂质体基因转染表达真核细胞阳离子脂质体转染的重要参数有：脂质体浓度和ＤＮＡ的浓度、细胞密度以及脂质体－ＤＮＡ复合物与细...

逆转座子样元件Tca1用于白色念珠菌的分类鉴定

已分离到一中等重复序列以及具有逆转座子样结构的元件Tcal(Transposon Candida albicans)。Tcal两端存在两个完全相同同向排列的序列LTR(Long Terminal Repeat)388bp,中间被一5.5kbDNA片段隔开。以alpha及Tcal为探针对40多种来自美国和中国的临床分离到的致病菌株进行杂交分析,根据杂交图谱,这些白色念株菌可被分成若干组,令人感兴趣的是来自同一地区菌种的遗传相关性比来自不同地区的大。比较URA3等基因的杂交结果,支持这种分析。尚未观察到alpha重复序列与其他酵母菌染色体DNA杂交的杂交条带,认为Tcal元件也许与C. albicans的遗传进化及其致病性有某种内在联系。