人参皂苷对吗啡作用影响的研究进展

对人参皂苷拮抗吗啡成瘾有关的药理作用进行了综述 ,主要介绍了人参皂苷对吗啡引起的与成瘾有关的动物行为。

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的 :表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构 (P9TRAF typezincfingerdomain ,简称P9 ZFD)编码的蛋白质 ,制备P9 ZFD多克隆抗体 ,研究P9 ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位。 方法 :应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )克隆编码P9 ZFD的cDNA序列 ,构建pET2 4a P9 ZFD表达载体 ,在E .coliBL2 1(DE3)中胞内诱导表达P9 ZFD蛋白 ,组氨酸亲和色谱法纯化P9 ZFD蛋白并免疫Balb/c小鼠制备其多克隆抗体。ELISA和Westernblot鉴定抗体效价及其免疫特异性。免疫组织化学及免疫电镜观察P9 ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布。结果 :表达、纯化的P9 ZFD蛋白相对分子质量约 30kD ,纯度达 95 %以上。制备的P9 ZFD抗体具有特异的免疫反应性。免疫组织化学和免疫电镜结果显示 ,P9 ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布。结论 :重症肌无力相关的P9 ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达 ,是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分。

不相容双质粒共表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB及其辅因子合成酶基因caiE

基因 cai B和基因 cai E分别编码肉碱脱水酶及其辅因子合成酶 ,携带这两个基因的重组菌可以共表达两个外源蛋白 ,得到高活性肉碱脱水酶。分别构建这两个基因的表达质粒 p ET2 8cai B和 p ET2 2 cai E,利用双抗生素筛选法 ,获得能稳定遗传的双质粒转化子。经 IPTG诱导 ,两个基因共表达 ,表达量分别占菌体总蛋白的 39%和 2 0 % ,共转化菌的酶活力比 p ET2 8cai B单转化菌提高了 2 .3倍 。

建立胶质瘤细胞诱导分化相关基因谱

目的 建立胶质瘤诱导分化相关基因表达谱。方法 用苯丁酸钠诱导胶质瘤细胞分化 ,cDNA阵列检测诱导前和诱导 2h、6d后的 180 0 0个基因表达 ,扫描仪分析结果 ,多点杂交验证。结果 在胶质瘤细胞诱导分化后 ,有 98个基因发生表达变化 ,一些转录和翻译系统相关基因和癌基因表达下调 ,而分化、凋亡基因上调。还有 18个未知基因EST片段分化前后表达差异。结论 含有98个基因的胶质瘤细胞诱导分化相关基因谱可为探讨其分化分子机制提供依据。

重症肌无力P9-ZFD基因片段表达蛋白的研究

目的:探讨P9-ZFD基因片段在人骨骼肌中表达的蛋白质。方法:以MG骨骼肌RNA为模板,扩增编码P9-ZFD片段的cDNA,构建pFT24a-P9-ZFD表达载体,经BL21(DE3)诱导表达P9-ZFD蛋白和组氨酸亲和层析法进行纯化,并制备P9-ZFD抗体。Western blot鉴定MG和对照组骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白组分。结果:骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白质相对分子质量约40000,在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显高于对照组(P<0.001)。结论:骨骼肌中40 000的蛋白是P9-ZFD基因片段的编码产物,该蛋白在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显上调,可能具有重要的病理生理意义。

建立人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱

目的 建立人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱。方法 用微阵列技术对同一胶质瘤患者初发 (WHOⅡ级 )、复发 (WHOⅢ级 )和再发 (WHOⅣ级 )的 3次手术标本中基因差异表达情况进行检测 ,并以第 3次手术时切取的正常脑组织作为对照。结果 全组共获取 16 36 3个数据。 3份肿瘤标本中 ,表达差异≥ 3倍的基因共 197条。将含正常脑组织在内的 4份标本进行两两比较 ,表达差异≥ 3倍的基因共 4 89条 (上调 193,下调 2 96 )。再将已知功能的 10 9条基因按出现频率排列 ,由高到低依次为发育、代谢、分化、信号传导、DNA结合转录、细胞受体、免疫、DNA合成修复重组、离子通道运输、蛋白翻译合成、细胞骨架运动、应激、原癌和抑癌、细胞凋亡、细胞周期相关基因。结论 从处于恶性进展不同阶段的人脑胶质瘤手术标本中发现了 197条表达差异≥ 3倍的基因 ,同时经生物信息学分析 ,发现 17条候选新基因 ,它们在胶质瘤发生与发展的分子机制中起重要作用。