药物安全性评价研究中的大鼠骨髓涂片的评价

骨髓涂片评价是对造血系统评价的重要方法。大鼠为常用的研究用实验动物,而且常常进行骨髓涂片评价。现对大鼠骨髓涂片的评价进行综述,旨在为药物的安全性评价的骨髓涂片评价提供参考。

SPF级F344大鼠的脏器重量和自发性病变的研究

目的建立F344大鼠的背景资料，为药物安全评价的病理学评价提供基础。方法10只溶剂对照用F344大鼠．7—10周龄，体重70—200g，雌雄各半，处死后解剖，称量脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、睾丸或子宫和卵巢的绝对重量并计算相对体重和脑重的相对重量，并对上述称量脏器和胸骨、股骨、眼球、胃肠道、胰腺、附睾和前列腺或阴道、坐骨神经、肌肉、甲状腺进行病理检查。结果雄性大鼠的脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺和睾丸的绝对重量分别为：1．736±0．080，0．597±0．009，5．825±0．305，0．355±0．016，1．267±0．029，0．039±0．006，0．291±0．058和2．087±0．081；对体重的相对重量分别为：1．009±0．027。0．347±0．013，3．385±0．094。0．207±0．010。0．737±0．022。0．022±0．003，0．169±0．032和1．215±0．073；对脑重的相对重量分别为：0．345±0．021，3．356±0．091，0．205±0．015，0．731±0．031，0．022±0．003。0．168±0．034和1．206±0．105。雌性大鼠的脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、卵巢和子宫的绝对重量分别为：1．642±0．066，0．446±0．009，3．677±0．262。0．319±0．012，0．947±0．057，0．041±0．012。0．246±0．043。0．050±0．011和0．267±0．062；对体重的相对重量分别为：1．338±0．100，0．363±0．021，2．996±0．288。0．259±0．016．0．772±0．070．0．034±0．010，0．201±0．038，0．041±0．009和0．217±0．051；对脑重的相对重量分别为：0．272±0．005。2．237±0．101。0．194±0．011，0．577±0．028，0．025±0．008。0．150±0．022。0．030±0．007和0．163±0．042。大体解剖均未见改变．病理组织学检查可见脾脏髓外造血、肝细胞空泡变性、肝脏小灶性炎、肾脏嗜碱性肾小管、肾脏皮髓交界处钙盐沉积、脾脏色素沉积、前列腺间质淋巴组织增生等自发性病变。结论在本试验条件下，10周龄内F344大鼠可出现自发性病变，但程度均较轻；其脏器重量可作为药物安全评价的病理学评价基础。

非甾体抗炎药肝损伤机制的初步研究

目的非甾体类抗炎药(NSAIDs)具有抗炎、镇痛和退热的功效,是临床应用最广泛的一类药物。越来越多的临床案例表明NSAIDs可以引起肝脏损伤,具有肝毒性,但其肝损伤的机制并不明确,因此研究非甾体类抗炎药的肝损伤机制比较重要。方法在我们的研究中,我们使用体外梯度离心得到的肝脏线粒体进行研究。结果二苯胺(Dpa)无法引起线粒体的肿胀,对于线粒体内Ca2+的维持和积累以及线粒体膜电位(MMP)的影响都不大,但是能够引起线粒体活性氧(ROS)的释放及GSH/GSSG比值的下降,推测其引起肝脏线粒体的损伤可能与ROS和线粒体的氧化还原状态有关。双氯芬酸钠(Dcf)可以引起线粒体的肿胀,对线粒体内Ca2+的维持和积累也有一定的影响,会引起GSH/GSSG比值的下降,但是对MMP和ROS释放影响不大。推测其引起肝脏线粒体的损伤可能与线粒体通透性改变(MPT)、线粒体内Ca2+及线粒体氧化还原状态有关。托灭酸(Tol)可以引起线粒体的肿胀,对线粒体内Ca2+的维持和积累也有一定的影响,能够诱导ROS的释放和引起GSH/GSSG比值的下降,但是对MMP的影响不大。推测其引起肝脏线粒体的损伤可能与MPT、ROS、线粒体内Ca2+及线粒体的氧化还原状态都有关系。结论二苯胺,双氯芬酸钠和托灭酸诱发肝损伤的机制可能与MPT及ROS、线粒体内Ca2+及线粒体的氧化还原状态密切相关,但是3种药物引起肝脏线粒体损伤的机制各有不同。

短期大鼠致肝癌模型肝脏线粒体损伤的研究

大鼠短期肝脏致癌模型是用来快速特异检测肝脏致癌物的试验模型,本实验使用此模型以研究癌前病变过程中肝脏线粒体的损伤情况。模型过程中,6周龄雄性SD大鼠40只随机平均分为4组,第0周,模型组大鼠按200mg/kg体重的剂量一次性腹腔注射启动剂二乙基亚硝胺(DEN)。对照组大鼠按1ml/kg体重的剂量一次腹腔注射生理盐水。第2周开始给予促癌剂2-乙酰氨基芴,按0.01%的浓度与饲料混合,给予模型组大鼠直至实验结束。第3周全部大鼠进行肝脏大部分切除术,在8周解剖。使用生化学方法检测线粒体特异性清除自由基的3个相关酶过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽还原酶(GSH-rd),超氧化物歧化酶(Mn-SOD);使用PCR方法检测线粒体DNA(mtDNA)损伤情况。模型组线粒体CAT,GSH-rd,Mn-SOD的活力较对照组有明显的下降,模型组大鼠肝脏线粒体DNA存在缺失。在模型重,模型组大鼠肝脏自由基产生过多而机体内的抗氧化防御系统不能将其消除时,可导致线粒体的氧化损伤;同时由于线粒体DNA容易受到活性氧的攻击,从而造成mtDNA的损伤。结果提示线粒体的氧化损伤及mtDNA的缺失可能癌前病变的产生相关。

Davidson's固定液用于睾丸和眼球固定的优势

Davidsons固定液,又称为Hartmanns固定液,由Moore和Barr在他们著名的性染色质研究中公布于众。目前在临床病理、兽医学和海洋生物科学中均有所应用。现就其基本配方、特点、用途及进行综述,旨在探讨其在药物安全性评价中应用于对睾丸和眼球的固定。

龙胆泻肝丸、关木通、三叶木通及五叶木通的小鼠体内毒性比较

目的目前市售龙胆泻肝丸和含马兜铃酸药物如关木通等中药的安全性问题十分引人关注。本研究比较和评价了连续给予按近期中国药典生产的龙胆泻肝丸,关木通,三叶木通及五叶木通对小鼠所产生的毒性反应及程度,以提供木通类药物和龙胆泻肝丸的安全性资料,确定毒性剂量范围,为临床用药提供参考。方法龙胆泻肝丸、关木通、三叶木通及五叶木通对小鼠连续灌胃28d,观察小鼠的一般情况、进行血液生化学、病理组织学检查等。剩余1/2小鼠进行停药25d恢复期观察。结果龙胆泻肝丸组在整个试验期间未见明显的毒性反应,无毒性反应剂量为〉3.00g/（kg.d）。关木通的无毒性反应剂量为0.06g/（kg.d）;在〉=0.24g/（kg.d）时见体重增长缓慢,耗食量减少,肝、肾功能指标异常,高剂量组明显。病理观察可见明显的肾脏毒性,如肾近曲小管明显扩张,小管上皮细胞变性、坏死,肾间质炎症及明显的纤维化。肾脏病变停药后仍不能完全恢复。三叶木通和五叶木通组在整个试验期间未见与药物相关的毒性反应,无毒性反应剂量分别为0.40和〉10.00g/（kg.d）。结论在本试验条件下,关木通显示出明显的肾脏毒性,其出现毒性的剂量为0.24g/（kg.d）,等于临床用量;而龙胆泻肝丸、三叶木通和五叶木通未见与药物相关的毒性反应,其无毒性反应剂量为临床用量的5-25倍。

生物芯片在遗传毒理学中的应用

目的应用基因芯片技术,探索遗传毒性生物标志物,用于预测和早期发现候选药物的遗传毒性。考察SNP芯片技术在染色体分析中的应用。方法基因芯片试验中,选择7个阳性药物、5个对照化合物作为受试物。使用预试验设计的剂量对小鼠单次给药,采集不同时间点的不同脏器的tRNA,使用Affymetrix基因芯片(MOE430A)进行分析。根据基因表达改变的特异性和改变程度等选择候选基因。对所选择的候选基因用RT-PCR验证芯片结果的重现性。使用其他阳性化合物用RT-PCR考察候选基因的有用性。SNP芯片试验中,以HL60细胞与其亚型HL60RG细胞作为研究对象,使用Affymetrix 10KSNP芯片考察细胞染色体的异常。结果基因芯片试验中,选出约50个标志物基因,RT-PCR试验验证了重现性和有用性。SNP芯片试验中,检测出HL60细胞的18号染色体为3倍体,亚型HL60RG细胞的1号染色体为单亲二倍体,11号染色体短腕缺失。结论基因芯片技术可用于探索药物毒性标志物。SNP芯片技术可检测细胞多倍体、染色体缺失和杂合性缺失(LOH),优于其他染色体分析技术。

SPF级正常SD大鼠骨髓有核细胞分类计数

目的讨论SPF级正常SD大鼠的骨髓有核细胞分类计数的参考值。方法收集2004年-2006年本中心所做实验对照用6周龄SD大鼠骨髓涂片共56例，雌雄各半，其中饲养28d加例，13周16例，26周加例。骨髓涂片制作方法为SD大鼠乙醚麻醉、腹主动脉放血处死后，进行骨髓涂片。采用Gimsa和Wright’s混合染色30min左右。低倍电子显微镜下观察涂片，分类计数500个有核细胞。计数粒细胞系（包括粒母细胞，早幼粒细胞，中晚幼粒细胞，成熟粒细胞，嗜酸或嗜碱粒细胞），红细胞系（红母细胞。早幼红细胞，中幼红细胞，晚幼红细胞），淋系，计算各系细胞所占百分率及粒红比值。各指标均取平均值和标准差范围。结果饲养28dSD大鼠的粒系、红系、淋系细胞占有核细胞百分率和粒红比值在雄性分别为41．4±5．9，38．7±6．4，20．6±4．4和1．23±0．40；在雌性分别为42．5±7．1，36．5±6．6，20．8±4．2，1．11±0．29。各指标在饲养13周雄性分别为45．8±6．4，34．8±6．5，19．0±4．3，1．38±0．40；雌性分别为44．5±8．2，36．9±8．6，18．3±2．8，1．32±0．55。在饲养26周雄性分别为47．0±9．3，36．8±7．9，14．6±6．2。1．3±0．5；饲养26周雌性分别为43．6±10．7，38．9±7．4。16．2±4．3，1．2±0．5。结论大鼠粒红比值波动范围较大。随着大鼠鼠龄的增加，淋系细胞所占百分率略减少。