新现野生动物源性疫病研究

野生动物疫病给人类的健康和生命安全带来许多重大,甚至灾难性的影响。当前,我国新现野生动物源性疫病研究的内容还比较狭窄,技术手段有待改善。最近30年来,发生的野生动物疫病具有病原复杂、反复发作、传播迅速和影响范围广等特点。引起的原因主要有过度开发自然造成野生动物栖息地破坏,滥用抗生素,人类工业污染,国际贸易和人员往来激增等。动物源性疫病防治要设立野生动物疫病专门研究机构,开展野生动物新现疫病的基础研究,加强国际间的相关学术科技交流与合作,保护生态环境和野生动物资源,强化海关检验检疫力度和立法。

野生动物在猴痘病毒传播中的作用

野生动物能够携带许多病原体,并且还可作为中间宿主通过跨种传播将病原体传播给人类或家畜。如新型冠状病毒肺炎(COVID-19)大流行给人类健康带来巨大威胁。与此同时,野生动物日益受到人们的关注,猴痘病毒(MPXV)是一种从野生动物溢出到人体内的一种人兽共患病原体,能引起人类和动物的严重疾病。到目前为止,猴痘已在70多个国家和地区蔓延,然而,猴痘是如何扩散的,野生动物在其中又扮演着怎样的角色目前尚不清楚。本文主要对野生动物在MPXV传播链中的作用进行阐述,以期为MPXV的监测防控提供科学依据,防止MPXV输入我国。

几种中草药复方制剂抗鸡柔嫩艾美耳球虫的研究

研究了几种中草药制剂对抗鸡艾美耳球虫的效果,结果表明:白头翁苦参散和五草汤被认为是最有效的抗球虫药物,但这5种药物均有100%的保护率;柔嫩艾美耳球虫对这几种药物均有不同程度的耐药性,在药物预防过程中应采取轮换用药方案。

猪附红细胞体病的病原形态学研究

用光学显微镜对血液涂片,姬姆萨染液染色涂片中的典型病原进行了观察,并通过扫描电子显微镜研究了病原的超微结构。结果表明:在光学显微镜下观察发现,红细胞严重变形,血液涂片中可见大小不一,大部分为黄褐色闪闪发光的圆形小体;染色血片可见附红体在红细胞表面及边缘呈各种形式排列,也可见到强折光性发亮的圆形小体;扫描电子显微镜下观察发现,附红体寄生的红细胞凹陷区,有大、小球体,且有的小球体与大球体相连。

动物园动物禽流感疫苗免疫后抗体水平检测

为了查明现用禽流感疫苗对野生动物园珍稀动物的保护效果,探讨合理有效的免疫方案,应用血凝抑制试验(HI)对河北、北京、上海、河南等动物园中接种禽流感疫苗的珍稀野生动物进行禽流感抗体检测。结果表明,在禽流感疫苗免疫后21 d,隶属于2纲5目9科20属30种(包括亚种)的121份血清样品中,63.6%的样品血凝抑制价低于6log2,显然现有的疫苗不能对野生动物提供有效的保护力。

生物技术在鸡球虫免疫研究中的应用

就近几年开发的球虫疫苗和球虫免疫中所涉及的分子细胞生物学、分子免疫学和功能基因组学的相关技术进行了阐述。

鸡艾美耳球虫阶段性抗原的分子生物学研究进展

从裂殖子表面抗原、细胞器抗原、子孢子抗原3个方面,综述了鸡艾美耳球虫阶段性抗原的分子生物学研究。

格尔德霉素抑制高致病性禽流感病毒增殖及其所介导炎性反应研究

对高致病性禽流感病毒感染最为有效的治疗应采用抗病毒和抗炎症的联合治疗.本试验用流感病毒H5N1感染不同细胞株(A549细胞和MDCK细胞),采用不同浓度格尔德霉素对病毒感染细胞培养物作用不同时长,检测流感病毒滴度;ELISA检测格尔德霉素作用于流感病毒H5N1感染A549细胞12 h、24 h促炎性细胞因子IFN-α、TNF-α和IL-6水平.结果显示,流感病毒H5N1感染A549细胞和MDCK细胞,格尔德霉素极显著地抑制了流感病毒H5N1在细胞培养物的增殖(P<0.01),而在病毒感染36 h和48 h,格尔德霉素并没有显著抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖(P>0.05).促炎性细胞因子分析结果显示,格尔德霉素在流感病毒感染A549细胞12 h和24 h均显著降低了促炎性细胞因子IFN-α、TNF-α和IL-6的分泌(P<0.05).上述实验结果显示,格尔德霉素具有抑制流感病毒H5N1增殖及其所介导的炎性反应的双重效应,为格尔德霉素成为应对流感病毒流行的备选药物提供基础科学依据.

青海省蜱类分布及蜱传病的研究现状

蜱除了可以通过刺激性叮咬导致宿主失血、皮肤损伤和生长减慢外,还是人类和动物病原体的重要媒介,可以传播广泛的细菌、原生动物、立克次体和病毒等病原体。蜱传病对畜牧业和公共卫生安全具有严重威胁。尽管近年来我国对于蜱及蜱传病的研究越来越多,但是对于蜱及蜱传病的分布特点缺乏系统的总结。论文对青海省蜱及蜱传病的研究进行归纳总结,以便对青海省的蜱和蜱传病的研究现状有一个系统的认识。同时,也为青海省的虫媒疾病的研究和防控提供数据支持。

小反刍兽疫病毒的分子生物学特性及其在全球的流行

小反刍兽疫由副粘病毒科麻疹病毒属小反刍兽疫病毒引起,经直接或间接接触传染,主要感染山羊、绵羊等小反刍动物,严重影响畜牧业,造成巨大经济损失.1942年首次发现于西非科特迪瓦,逐渐扩散至非洲及亚洲大部,涉及四十余国家.2007年7月首次传入中国西藏阿里地区,并于2008年6月再度爆发,且呈由边境逐渐向内传播的趋势.该地区有多种珍贵濒危野生反刍动物,是小反刍兽疫病毒的潜在宿主,它们随季节迁徙及夏季产仔的习性更增加其受小反刍兽疫感染并传播小反刍兽疫的可能.因此,对小反刍兽疫病毒的生物学特征、流行特点和防控措施进行综述,必将有利于正确评估小反刍兽疫对野生有蹄类动物的威胁并采取合适的措施预防与控制小反刍兽疫疫情.

抗堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体的构建及表达

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,通过在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至表达载体pET28a(+)载体中进行表达,用Ni-NTA的金属亲和层析法进行纯化,通过SDS-PAGE和ELISA测定其纯度和生物学活性.电泳结果分析表明重组蛋白的相对分子量为32kDa,纯度为94%;ELISA反应结果证明该单链抗体保持了单克隆抗体的生物学特性,并能与堆型艾美耳球虫子孢子抗原发生特异性反应.

猪附红细胞体特异性PCR检测方法的建立

从猪血中分离附红细胞体,提取其基因组DNA,用EcoRI对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1.8 kb的DNA片段,根据DNA序列分析与GenBank已知基因比较和PCR方法确定该片段具有特异性,以该片段为模板进行PCR,并将其扩增产物与其它猪的其他细菌DNA扩增产物相比较,建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法,并通过斑点杂交试验检测该产物特异性,通过临床应用检验该法的适用性。结果表明:扩增产物大小为782 bp,其序列与已知附红细胞体序列同源性为100%,斑点杂交试验证实该产物为附红细胞体特异性产物,将该方法应用于检测10头临床症状典型的感染猪和10头健康猪的血液,所有感染和隐性带菌猪的PCR检测结果为阳性,健康猪为阴性。猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法适用于检测无临床症状的隐性带菌动物。

鸟类禽流感与野鸟保护

野生鸟类是宝贵的自然资源,一方面由于其活动范围广,特别是候鸟还具有定期长距离迁飞的习性,既存在受禽流感病毒侵染致病的可能,也存在传播禽流感的潜在隐患。只有把病原生态学、流行病学、遗传学以及进化规律综合起来研究与宿主环境生态学之间的关系,才能更清楚的了解禽流感病毒的传播机制。另一方面由于自然因素以及人类不合理的开发利用活动的影响,使野生鸟类资源面临许多生态问题,并由此提出了相应的保护对策。

抗堆型艾美耳球虫子孢子表膜单链抗体基因的构建

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子表膜抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,再通过重叠延伸拼接(Splice overlap extension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至pMD18-T载体中进行测序。经测序,基因全长为744bp,编码248个氨基酸残基;经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。结果表明,成功构建了抗堆型艾美耳球虫子孢子表面蛋白抗体的ScFv基因。

抗堆型艾美耳球虫子孢子单抗对阶段特异性抗原的识别

为了用针对堆型艾美耳球虫子孢子的5株单抗检测各代裂殖子的反应性,分别用甲醇、丙酮、戌二醛和自然干燥等4种固定方法处理裂殖子,观察其对染色结果的影响;并运用免疫荧光技术(IFA),对单抗和裂殖子进行染色。结果显示,5株单抗中,单抗Easp-3H6和单抗Easp-5G10识别堆型艾美耳球虫裂殖子的抗原位于裂殖子的顶端,单抗5B4对各阶段裂殖子有较弱的反应,而单抗Easp-3G3和5G7不与堆型艾美耳球虫任何一代的裂殖子发生反应,表明鸡堆型艾美耳球虫的侵入阶段存在共有抗原,即种内各发育阶段的抗原。

人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体。方法将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109。挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白。结果在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22·3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%。Westernblot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性。通过Ni2+-NTA亲和柱,从1L诱导产物中纯化出约1520mg重组蛋白,纯度在80%以上。结论已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础。

流感病毒唾液酸受体在人、小鼠、鸡及鸭气管和肺组织分布的定性与定量分析

为了准确地检测流感病毒唾液酸α2,3-半乳糖和唾液酸α2,6-半乳糖两种受体在人、小鼠、鸡及鸭气管和肺组织中分布和表达的特征,本研究利用凝集素免疫荧光组织染色方法对各种组织切片进行了系统的定性和定量分析.定性分析的结果,显示两种流感病毒唾液酸受体在人、小鼠、鸡及鸭肺组织和小鼠及鸭气管组织中均有表达,但是,唾液酸α2,6-半乳糖受体只在人气管组织中有表达而唾液酸α2,3-半乳糖受体只在鸡气管组织中有表达.定量分析的结果显示,两种流感病毒唾液酸受体在人和小鼠的气管组织以及人、鸡和鸭的肺组织均有表达.同时,本研究结果还显示了流感病毒受体在同一组织中的分布和表达并不是均匀的,表明它们在各种组织中的分布和表达并非简单的有和无之间的区别,而是一种在表达数量上多和少的差别.

shRNA介导chTERT基因沉默抑制MDCC-MSB1细胞增殖

几乎所有类型的人类肿瘤都可以检测到端粒酶的活性,通过抑制端粒酶逆转录酶基因(TERT)表达降低端粒酶活性可能是进行抗肿瘤治疗的一个新靶点。本试验通过构建靶向端粒酶TERT基因的shRNA(Sh1,Sh2和Sh3)表达质粒载体转染MDCC-MSB1细胞抑制chTERT基因表达,从而降低端粒酶活性及细胞增殖。Real-time PCR结果显示,Sh1和Sh3在质粒载体转染细胞后48,72,96h显著抑制chTERT基因表达(P<0.05),且呈持续效果;TRAP法端粒酶活性分析显示,Sh1和Sh3在质粒转染细胞72h显著降低端粒酶活性;流式细胞分析显示,Sh3在转染后72h显著降低了S期细胞的比例(P<0.01),G2/M期细胞比例显著上升(P<0.01),G0/G1期细胞比例没有明显变化(P>0.05),抑制了MDCC-MSB1细胞的增殖。结果提示,shRNA通过抑制TERT基因表达可有效降低端粒酶活性,阻滞肿瘤细胞的增殖,为抗癌症治疗提供了新的备选方案及具有参考价值的基础科学数据。

格尔德霉素体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖

为了评价Hsp90抑制剂——格尔德霉素体内抗流感病毒的效果,利用高致病性禽流感病毒H5N1鼠适应株感染小鼠,分析格尔德霉素对流感病毒H5N1感染小鼠的死亡保护率以及不同时相肺部病毒负载量的影响.本实验用乙醚麻醉小鼠,流感病毒H5N1滴鼻感染C57BL/6小鼠,于感染后2h腹腔注射格尔德霉素,观察小鼠死亡保护率、体重变化及Real-time PCR检测小鼠肺部病毒负载量.生存分析结果显示格尔德霉素治疗组(80%)与对照组(3%)及奥司他韦治疗组(53%)相比极显著(P<0.01)地延长了流感病毒感染小鼠存活率及存活时间,且平均体重丢失也少于对照组及奥司他韦治疗组;Real-time PCR分析显示格尔德霉素极显著(P<0.01)地抑制了流感病毒H5N1的复制,与奥司他韦治疗组无显著性差异(P>0.05).上述实验结果显示格尔德霉素对流感病毒H5N1感染的小鼠提供了很好的保护作用,且显著抑制了流感病毒H5N1的增殖,可能作为一种新的、高效的抗流感病毒备选药物.