内毒素血症时大鼠肝细胞线粒体损伤及其机制的研究

目的 :观察急性感染性内毒素血症大鼠肝细胞线粒体呼吸链的损伤及其机制。方法 :将体重在 2 50- 2 80g健康SD大鼠随机分为空白对照组、内毒素组。提取内毒素血症大鼠肝细胞线粒体 ,测定其超氧阴离子O 2生成量 ,同时测定线粒体呼吸链功能 :复合体Ⅱ +Ⅲ的电子传递与质子转移定量关系 (H+ / 2e- )、ADP/O、呼吸控制率(RCR)。结果 :内毒素血症大鼠肝细胞线粒体电子漏显著增加 ;大鼠肝细胞线粒体以琥珀酸为底物的态 4和态 3呼吸速率增加 ,ADP/O、RCR及复合体Ⅱ +Ⅲ的H+ / 2e- 显著降低。结论

^125I粒子持续低剂量率照射胰腺癌细胞株PANC-1相对生物效应的研究

目的探讨国产6711型^125I粒子的相对生物效应，并对其照射杀伤PANC-1细胞的效果进行了初步探讨。方法PANC-1细胞处于指数生长期时，行^125I粒子离体照射；在初始剂量率为2．59cGy／h时，分别给予1、2、4、6、8和10Gy照射。^60Co照射作为对照组，吸收剂量率为2．21Gy／min，给予相同剂量照射。用锥虫蓝染色法检测细胞死亡比率，并比较在4Gy照射后培养12、24、48和72h细胞死亡率随时间变化。采用克隆形成实验，计算细胞克隆形成率，绘制生存曲线，得出生物学参数，并测定^125I粒子与^60Co的相对生物效应。结果在相同剂量照射下，^125I持续低剂量率照射与^60Co照射相比，当≥4Gy时，细胞死亡率明显增高。在4Gy照射后，随着时间延长细胞死亡率增高，两者相比有明显差异。从生存曲线分析，^125I粒子持续低剂量率照射细胞存活分数比^60Co低，^125I粒子相对于^60Co的生物效应为1．45。结论^125I粒子持续低剂量率照射与^60Co高剂量率照射相比，细胞杀伤效应更强；测定的相对生物效应与其他研究者测量的结果相似；将为临床^125I粒子治疗肿瘤提供一定的参考价值。

内毒素血症对大鼠肝细胞线粒体质子ATP酶的影响及中药912液的干预作用

目的 :观察内毒素血症模型大鼠肝细胞线粒体质子 ATP酶的损伤及中药 912液的保护作用。方法 :将大鼠随机分为正常对照组、内毒素组、912液组。提取内毒素血症大鼠肝细胞线粒体测定其超氧阴离子 (O÷2 )及丙二醛 (MDA)生成量 ,同时测定线粒体质子 ATP酶 ,并观察中药 912液的保护作用。结果 :内毒素血症大鼠肝细胞线粒体 O÷2 及 MDA量明显升高 ;肝细胞线粒体质子 ATP酶明显减少。经 912液治疗后大鼠肝细胞线粒体 MDA和 O÷2 量明显减少 ,线粒体质子 ATP酶明显增加。结论 :在内毒素血症的发病机制中存在由于肝细胞线粒体内源性氧自由基生成增加及其所引发的脂质过氧化反应增强对线粒体所造成的氧化损伤 ,中药 912液可以减少肝细胞线粒体内源性氧自由基生成 。

内毒素血症对大鼠肝细胞线粒体的损伤及其机制

目的 :观察内毒素血症大鼠肠粘膜与肝细胞线粒体氧化磷酸化功能的损伤及其机制。方法 :测定血PaO2 和肠黏膜Phi,提取肝细胞线粒体测定其超氧阴离子O- 2 生成量 ,同时测定线粒体呼吸链功能 :ADP/O、呼吸控制率 (RCR)。结果 :在内毒素血症大鼠动脉血氧分压尚正常时 ,其肝细胞线粒体O- 2 生成量显著增加。结论 :在内毒素血症的发病机制中存在由于肝细胞线粒体内源性氧自由基生成增加对线粒体呼吸功能所造成的氧化损伤。肠粘膜酸中毒的发生提示细胞利用氧的功能障碍。

Captopril对缺血再灌心肌线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化的影响

为研究ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对缺血／再灌注心肌的保护机制，本实验用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ无作功非循环式离体心脏灌流模型，琥珀酸为底物，分别用氧电极法和铁氢化钾脉冲法检测缺血再灌注中ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对心肌线粒体呼吸链复合体Ⅱ＋Ⅲ＋Ⅳ段氧化磷酸化和复合体Ⅱ＋Ⅲ段质子电子偶联的影响ｑ结果发现：缺血及再灌注时呼吸控制率（ＲＣＲ）、ＡＴＰ合成速度升高的现象在保护组不出现，说明ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对心肌线粒体呼吸功能有保护作用，ｃａｐｔｏｐｒｉｌ对缺血时线粒体复合体Ⅱ＋Ⅲ质子泵出速度和电子传递速度升高有进一步的调节作用，使质子电子偶联更紧密，Ｈ＋／２ｅ－恢复至对照水平。再灌时质子泵出速度的降低可被ｃａｐｔｏｐｒｉｌ逆转。

糖尿病小鼠线粒体氧化磷酸化功能与自由基的关系

[目的]用四氧嘧啶(Alloxan)建立实验性糖尿病小鼠模型,探讨糖尿病状态下线粒体氧化磷酸化功能改变的机理和自由基的关系。[方法]分别从整体、组织和线粒体水平测定抗氧化酶活性,线粒体水平测定:①以琥珀酸(S)为底物的呼吸控制:态3呼吸速率(R3)、态4呼吸速率(R4)、呼吸控制比(RCR)和磷氧比(P/O);②H+-ATPase合成活力;③测定O·2-的生成量。[结果]糖尿病小鼠ATP合酶活性显著降低45.99%;O2·-含量增加35.8%;线粒体呼吸链RCR、P/O显著降低(P﹤0.01),State4显著增高(P﹤0.01);血清和肝组织、线粒体SOD活性,GSH含量显著降低(P﹤0.001)。[结论]证明实验性糖尿病小鼠肝功能损伤是氧化性损伤,氧化应激又是该损伤的结果,其原因以电子漏增加为主,导致质子漏增加,自由基生成量增多,ATP合酶活性下降,无效耗氧增加、线粒体受损。

冬虫夏草提取液对糖尿病小鼠肝线粒体氧化损伤的保护效应

目的:从线粒体呼吸链角度分析中药冬虫夏草提取液对糖尿病引起的氧化损伤的保护作用。方法:实验于1998-03/2000-07在中国科学院动物研究所生物膜与膜生物国家重点实验室完成。雄性昆明小白鼠32只,随机分为4组,每组8只。正常对照组不加任何处理因素,虫草组、维生素E组和糖尿病组小鼠用四氧嘧啶建立实验性糖尿病小鼠模型,分别给予口服虫草提取液(1mL/只)和皮下注射维生素E溶液(4mg/kg),糖尿病组不用任何保护作用药物。利用比色法从线粒体水平测定抗氧化酶活性,用铁氰化钾脉冲法测定线粒体呼吸活链Ⅱ+Ⅲ电子传递与质子泵出偶联状况(H+/2e)。结果:32只小鼠均进入结果分析。①小鼠谷胱甘肽含量,谷胱甘肽过氧化物酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量比值:糖尿病组低于正常对照组,虫草组、维生素E组高于糖尿病组,差异有显著性意义(P<0.05～0.001)。②丙二醛含量:糖尿病组高于正常对照组,虫草组、维生素E组低于糖尿病组(P<0.001)。③糖尿病组线粒体呼吸链复合体Ⅱ+Ⅲ电子传递与质子泵出总比值、净比值低于正常对照组,降低了24.76%,32.31%(P<0.001)。虫草组、维生素E组线粒体呼吸链复合体Ⅱ+Ⅲ电子传递与质子泵出总比值、净比值显著回升,高于糖尿病组(P<0.001)。结论:线粒体呼吸过程产生的自由基在糖尿病的肝损伤中可能具有重要的作用,其原因与电子漏增加、电子传递与质子泵出脱偶联有关;同时也证明了虫草提取液能有效的拮抗由糖尿病引起的肝线粒体的氧化损伤。

125I粒子对大肠癌CLl87细胞杀伤作用的实验研究

目的 探讨125I粒子持续性低剂量率照射下肿瘤细胞的凋亡和周期改变.方法 采用CL187人结肠癌细胞系体外培养,分为空白对照组、60Co单次高剂量率照射组、125I低剂量率照射组.单次高剂量率组以2 Gy/min给予细胞1、2、4、6、8和10 Gy的照射,低剂量率组以2.77 cGy/h的初始剂量率给予相同剂量照射,照射后24 h根据肿瘤细胞死亡率和14 d克隆形成率评价不同照射方式对肿瘤细胞的杀伤效果.同时,用放射性125I粒子以2.77 cGy/h的剂量率,给予细胞2、5和10 Gy的照射,应用流式细胞术测量其凋亡和细胞周期的变化.结果 低剂量率组照射后细胞死亡率在1 Gy时低于60Co单次高剂量率组,随着剂量的上升,2 Gy后,超过单次高剂量率组,但整体上125I粒子照射后细胞死亡率高于60Co组(P=0.011).125I持续性低剂量率照射组的克隆增殖率明显低于60Co单次高剂量率组(P=0.0021).低剂量率照射下,2 Gy时仅能引起G2/M期阻滞和凋亡,5 Gy时达到峰值,10 Gy时细胞周期阻滞和凋亡的比率依然很高,但相对于5 Gy有所下降;同时G2/M期阻滞和凋亡变化呈现出相同的趋势.结论 在相同剂量条件下,125I粒子持续照射低剂量率照射比60Co单次高剂量照射对CL187肿瘤细胞具有更强的杀伤效应;G2/M期阻滞引起的凋亡是低剂量率照射杀伤肿瘤细胞的主要机制.

糖尿病小鼠肝线粒体氧化损伤及其机制

目的:糖尿病是威胁人类健康的主要疾病之一,为了证明糖尿病的发生发展与氧化应激密切相关,从线粒体呼吸链角度探讨其机制。方法:用四氧嘧啶(Alloxan)建立实验性糖尿病小鼠模型,利用比色法分别从整体、组织和线粒体水平测定抗氧化酶活性,用铁氰化钾脉冲法测定线粒体呼吸活链II+III电子传递与质子泵出偶联(H+/2e)。结果:糖尿病小鼠GSH、GSH-Px分别比对照组显著降低(P<0.001),血清和肝组织、线粒体GSH-Px/MDA比值分别降低59.89%、40.69%和59.65%;线粒体呼吸链II+III总H+/2e显著降低24.76%(P<0.05),净H+/2e显著降低32.31%(P<0.05)。结论:实验性糖尿病小鼠肝功能损伤是氧化性损伤,氧化应激又是该损伤的结果,其原因与质子漏增加,电子传递与质子泵出脱偶联有关,导致自由基增加,无效耗氧增加,线粒体受损。

大鼠内毒素血症早期肝细胞线粒体的氧化损伤及中药912液的干预作用

目的 通过动物实验观察内毒素血症早期大鼠肝细胞线粒体的氧化损伤及中药912液的保护作用。方法 将大鼠随机分为空白对照组、内毒素组、内毒素 +912液组、内毒素+盐水对照组。提取内毒素血症大鼠肝细胞线粒体测定其超氧阴离子生成量 ,同时测定线粒体及血清中GSH Px、SOD ,并观察中药 912液的作用。结果 内毒素血症大鼠肝细胞线粒体超氧阴离子生成量及MDA明显升高 ;血清中MDA增多 ,而SOD减少。 912液治疗后内毒素血症大鼠肝细胞线粒体MDA及超氧阴离子生成量明显减少 ,但SOD及GSH Px不增加 ;血清中MDA减少 ,而GSH Px及SOD增多。结论 在内毒素血症的发病机制中存在由于肝细胞线粒体氧自由基生成增加及其所引发的脂质过氧化反应增强所造成的氧化损伤 ,表明肝细胞线粒体的损伤在其发病机制中的重要作用。中药 912液可以提高肝细胞线粒体的抗氧化潜能 ,具有保护肝细胞的作用。

脂多糖促进小肠缺血再灌注损伤的机制探讨

目的观察脂多糖(LPS)处理对于小肠缺血再灌注损伤(IRI)的影响及其机制的初步探讨。方法实验分为3组:LPS组(腹腔注射LPS100μg/只)、缺血再灌注(I/R)组(肠系膜上动脉夹闭30min后恢复血供)以及LPS+I/R组(肠系膜上动脉夹闭30min后恢复血供,并立即给予腹腔注射LPS100μg/只),于再灌注后各时间点,获取全小肠,留取病理组织,并分离黏膜固有层细胞,提取总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR检测各炎性细胞因子mRNA的表达水平。结果与I/R组、LPS组比较,I/R+LPS组小鼠小肠黏膜固有层各主要细胞炎性因子呈现提前上调表达趋势,病理结果证实再灌注后48h,I/R+LPS组较之I/R组和LPS组小肠损伤显著加重。再灌注后48h结果显示,与I/R组比较,LPS组IL-17AmRNA水平无显著变化[(6.20±0.32)与(5.79±0.30),t=3.117,P>0.05];而LPS+I/R组与其余两组相比,IL-17AmRNA表达水平均明显上调[(14.22±0.5)与(6.20±0.32),t=59.047,P<0.05],[(14.22±0.5)与(5.79±0.30),t=134.754,P<0.05],其差异有统计学意义。结论小肠缺血后外源性LPS可加速并加重再灌注损伤,这可能与IL-17A表达上调,促进相关免疫细胞浸润有关。

髓系抑制性细胞与肿瘤

髓系抑制性细胞（MDSC）是一群髓系来源具有抑制功能的天然免疫细胞，在肿瘤进展中发挥负向免疫调控作用。MDSC具有强大的抑制功能及显著的异质性，通过多种机制调控固有免疫及适应性免疫系统，发挥促肿瘤作用，同时可通过非免疫机制促进肿瘤血管生成及肿瘤转移等。近年来对其分化、增殖、抑制功能等的研究日趋成熟，由此衍生的靶向针对MDSC的肿瘤免疫治疗研究将为肿瘤疫苗的增效及肿瘤的治疗等带来新的希望。