KCTD15基因调控3T3-L1脂肪前体细胞分化的研究

目的探讨含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的作用。方法①采用半定量逆转录PCR检测在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中KCTD15mRNA表达变化。②在3T3-L1脂肪前体细胞增殖早期通过RNA干扰技术靶向敲低KCTD15基因的表达,在靶向敲低KCTD15基因后的转染KCTD15siRNA48h后通过半定量逆转录PCR验证KCTD15基因的敲低效果。用油红O染色法观察KCTD15敲低后3T3-L1细胞第0天和第10天的细胞形态学改变。③采用半定量逆转录PCR检测KCTD15基因敲低后PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ成脂基因的变化。结果在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中,KCTD15mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05);KCTD15敲低能显著抑制3T3-L1脂肪前体细胞分化;KCTD15敲低后PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ成脂基因无明显变化。结论在分化早期阶段敲低KCTD15基因能抑制3T3-L1脂肪前体细胞分化。

染色质构象调控真核基因的表达

真核基因的表达受到各种顺式调控元件、反式作用因子、染色质DNA以及组蛋白表观遗传修饰等多因素、多层次的调控。染色质三维空间结构的变化在调控真核基因表达方面也发挥了至关重要的作用。染色质构象的变化一方面可以使增强子等调控元件与靶基因相互靠近,从而促进基因表达;同时也可能通过形成空间位阻结构阻碍调控元件作用于靶基因,抑制基因表达。虽然染色质结构变化调控真核基因表达的机制仍缺乏较为精确的分子模型,但在组蛋白修饰、核小体定位、染色体领域以及染色质间相互作用等表观遗传学研究中,已经发现有诸多证据支持染色质构象在真核基因表达调控中的重要地位。文章主要综述了染色质结构及其构象的变化等对真核基因表达调控的影响。

表达谱芯片分析KCTD15对3T3-L1前体脂肪细胞的影响

目的通过筛选分析3T3-L1前体脂肪细胞中KCTD15基因敲低后的差异表达基因研究其细胞生物学功能,探讨KCTD15基因与肥胖发生的关联。方法①运用RNA干扰技术在3T3-L1前体脂肪细胞中特异性敲低KCTD15基因表达,并用半定量RT-PCR技术检测KCTD15基因敲低效率。②用Illumina表达谱芯片检测基因表达。③筛选差异表达基因后,运用Gene Ontology(GO)和KEGG pathway进行功能聚类分析。④挑选部分差异表达基因进行半定量RT-PCR验证。结果①KCTD15基因敲低后筛选到833个差异表达基因(差异倍数值≥2或≤0.5)。②GO功能分析显示差异表达基因主要富集在以下相关通路:细胞黏附(34个)、细胞骨架组装(26个)、生物膜组装(26个)、染色体组装(20个)、脂肪细胞分化(6个);KEGG pathway分析则显示半乳糖代谢和二羧酸代谢受到影响。③对MTHFD1、MDH1、VSP4B、CUX1、ABCA7 5个基因表达的半定量RT-PCR与芯片测试结果相符。结论 KCTD15基因功能与生物膜和细胞骨架有关且能够影响细胞能量代谢过程。