人血栓调节蛋白基因的表达及转基因小鼠的建立

用 PCR方法从人的基因组 DNA中扩增了人血栓调节蛋白 (h TM)基因 ,将其克隆到带有人 EF- 1α启动子的p EF- neo哺乳动物表达载体上 ,得到表达质粒 p EF- TM。在转染 p EF- TM的 COS- 1细胞中 ,h TM得到了瞬时表达 ,并且正确地定位到细胞膜上。用 p EF- TM转染猪内皮细胞 (PEC) ,经 G4 18筛选得到稳定转染的克隆。凝血活性测定结果显示 ,表达 h TM的 PEC凝血时间明显延长 ,表明其抗凝血能力增强。通过显微注射方法 ,得到了 1只 F0代 h TM转基因小鼠。 Southern杂交结果表明 ,该转基因小鼠整合了 9个拷贝的 p EF- TM DNA,并能将外源 DNA遗传给后代。