假单胞菌ND6菌株水杨酸羟化酶基因(nahG)的核苷酸序列分析和酶鉴定

水杨酸羟化酶是细菌萘降解途径中的关键酶,它能催化水杨酸脱羟和羟化,生成儿茶酚.假单胞菌(Pseudomonas)DN6菌株的萘降解基因位于102kb的质粒pND6-1上,以pUC18质粒为载体,制备了含有1～3kbpND6-1DNA随机片段的基因文库,通过DNA测序和DNA序列同源性分析,从基因文库中筛选出含有水杨酸羟化酶基因nahG的克隆.nahG基因的大小为1305bp,编码的水杨酸羟化酶(NahG)由434个氨基酸组成,与PseudomonasputidaNCIB9816-4菌株的水杨酸羟化酶基因相比,核苷酸序列的同源性为100%,与其它10种细菌的水杨酸羟化酶基因相比,核苷酸序列的同源性为32%～99%.酶学实验表明,ND6菌株的水杨酸羟化酶具有广泛的底物特异性,它不仅能代谢水杨酸,还能代谢多种水杨酸的衍生物,如乙酰水杨酸、黄基水杨酸、3-甲基水杨酸、5-甲基水杨酸和5-氯水杨酸等.

人类基因组3pter-p26区域的序列比较分析

对人类基因组3号染色体短臂的3pter-p26区域进行了初步分析，序列组装后整个区域全长约为8．1kb，靠近端粒区还存在一个约20∽30kb的空洞．序列比较分析表明：(i)该区域的GC含量为38．5％，为人类基因组所有近端粒区域最低；(ii)共含有42个基因，平均大小为97．5kb，以前通过基因连锁分析定位于该区域的基因Cntn3存在定位错误，应位于3p12．3；(iii)该区域散在重复序列活跃程度高于全基因组平均水平，其中(TA)n含量是全基因组平均水平的2倍；(iV)该区域在小鼠6号染色体104．1∽112．4Mb的位置有一个保守的同源序列；通过染色体进化分析推断，3pter-p26区域可能于最近的一次染色体重排之后才转移到染色体的末端，其发生时间应在人与小鼠的基因组分离之后，在这次重排过程中，染色体断裂点附近的一些序列，连同所包含的基因发生了丢失，而丢失的基因总拷贝数却在基因组的其他地方得到了增加；(v)3pter-p26区域较低的GC含量可能不利于保持染色体末端的稳定，容易发生DNA丢失，而这又可能是引发基因表达异常导致疾病的原因之一。

应用FP-TDI技术进行高通量单核苷酸多态分型

FP TDI (fluorescencepolarizationtemplate directeddye terminatorincorporation)是一种操作简单、实验投入少、适于高通量反应的单核苷酸多态等位基因分型技术 .使用两种评价分型图像质量的数值指标 ,可以有效地对分型结果进行评价 ,使该技术得到了改进 .在此基础上优化了实验条件 ,并应用该技术 ,对人类基因组 3号染色体上随机选取的 337个单核苷酸多态性位点进行了高通量分型 ,反应的一次成功率达到 5 9 94 % .