1例遗传性异常纤维蛋白原血症的鉴定及分子发病机制研究

目的对1例遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行表型、基因型分析,并研究其致病机制。方法采集先证者及其父母的外周血并进行常规出凝血、血浆纤维蛋白原(Fib)活性和抗原检测。对Fib的基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行PCR扩增及测序。采用Fib凝固率测定、纤维蛋白聚集曲线和电镜扫描纤维蛋白凝块等方法研究其致病机制。结果先证者活化部分凝血酶原时间、凝血酶原时间正常,凝血酶时间延长,Fib抗原正常、活性降低;其父亲表型与之相似。先证者及其父亲FGA基因第2外显子均存在A1211G杂合碱基置换,导致Fibα链Arg19Gly错义突变。western-blot检测显示,先证者及其父亲血浆Fib无异常条带出现。先证者血浆Fib凝固率为20.8%,凝血酶或爬虫酶诱导的聚集曲线严重受损,纤维蛋白凝块的纤丝直径大于健康人对照(P<0.001),密度小于健康人对照。结论鉴定该病例为遗传性异常纤维蛋白原血症,Fibα链Arg19Gly杂合错义突变导致Fib功能受损,为该病例及相应临床症状的原因。

瓦里安Acuity模拟定位机射野灯昏暗故障的电路维修

瓦里安模拟定位机是以色列瓦里安公司开发的集计划、模拟和验证为一体的系统,它支持最基本模拟定位和复杂治疗计划验证,而且能对调强放射治疗(intensity modulated radiation therapy,IMRT)和图像引导放疗(image guided radiation therapy,IGRT)进行优化,可以帮助临床医师切实有效地准备和验证患者治疗计划,有助于提高治疗效率[1]。

基于SNP共表达网络肝癌分子分型及预后分析

基于SNP突变数据与mRNA表达谱关联分析,构建一种肝癌分子分型方法并对比不同分型预后的差异,并对不同分型肝癌的发生发展机制进一步研究。首先通过TCGA数据库收集359例肝细胞癌患者的SNP突变数据和mRNA表达数据,采用Wilcoxon秩和检验,筛选突变后差异表达基因,并通过生物信息学工具String和Cytoscape构建差异表达基因的蛋白互作网络,筛选连接度最高的10个Hub基因。利用Consensus Cluster Plus软件包,基于Hub基因mRNA表达水平构建NMF分子分型模型,再结合生存数据评估各分型患者的预后。最后利用加权基因共表达网络分析(WGCNA),识别与肝癌分子分型相关的模块,并针对关键模块的基因进行通路富集,从而对不同分型肝癌的基因表达谱进行比较。结果:NMF模型将肝癌分为高危、低危2个分型,其中CDKN2A和FOXO1基因对分型贡献度高。生存分析显示低危组患者的生存情况显著优于高危组,高危组富集多个与肿瘤细胞侵蚀、转移、复发过程相关的信号通路,低危组则与细胞周期和胰液分泌相关。本研究在无先验性信息的前提下,基于突变后显著差异表达的Hub基因表达水平构建的肝癌分子分型对肝癌患者预后评估具有一定的指导意义,其中CDKN2A和FOXO1突变是肝癌患者的不良预后因素,针对二者的靶向药研发,可能为肝癌患者提供新的治疗策略。

一个纤维蛋白原γ链Gln195Arg突变所致的遗传性异常纤维蛋白原血症家系的分析

目的对一个遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行表型和基因型分析,并探讨其发病的分子机制。方法家系分析。采集先证者家系成员(3代7人)的外周血进行常规出凝血检查,用凝血酶凝固法(Clauss法)和免疫比浊法分别检测纤维蛋白原(Fg)的活性(Fg︰C)和抗原水平(Fg︰Ag),用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血浆Fg三条肽链的相对分子量。对Fg的FGA、FGB和FGG基因的所有外显子及其侧翼序列进行PCR扩增并测序分析。采用纤维蛋白原凝固率测定、纤维蛋白聚集曲线和扫描电镜观察纤维蛋白凝块等方法,研究其致病机制。结果先证者活化部分凝血活酶时间(APTT)正常,凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和爬虫酶时间(RT)延长;Fg︰Ag(1.6 g/L)轻度降低,Fg︰C(0.7 g/L)明显降低。其父亲和祖母APTT和PT正常,TT和RT延长;Fg︰Ag(分别为2.0 g/L和2.2 g/L)正常,Fg︰C(分别为1.0 g/L和1.1 g/L)明显降低。家系其他成员各项凝血指标均正常。先证者FGG基因第6外显子存在A4774G杂合碱基置换,导致Fgγ链Gln195Arg杂合错义突变;其父亲和祖母亦为Gln195Arg杂合子。Western blot检测结果显示,先证者及其父亲、祖母血浆Fg均无异常条带出现。先证者血浆的Fg凝固率为49.3%,健康对照者为98.9%;凝血酶或爬虫酶诱导的聚集曲线严重受损;与健康对照者相比,先证者纤维蛋白凝块的纤丝直径增大(P<0.001),纤丝密度减小、排列稀疏。结论Fgγ链Gln195Arg杂合错义突变导致Fg功能受损,是引起该家系遗传性异常纤维蛋白原血症的原因,该突变尚未见报道。

多种来源干细胞治疗终末期肝病的研究进展

终末期肝病(ESLD)是指由各种慢性肝损伤所造成的肝病晚期阶段,严重时可使肝功能极度减退甚至导致肝衰竭,进而危及生命。目前,肝移植治疗ESLD效果显著,但由于供体短缺,手术损伤大,排斥风险高,手术成本高等缺点,限制了其在临床上的应用。因此,在临床上急需找到ESLD的治疗手段。此时,干细胞治疗作为一种新疗法进入人们的视野。干细胞由于具有自我更新和多向分化潜能等特性,可用于再生受损的肝组织。近些年,在临床上利用不同来源干细胞治疗肝相关疾病的研究取得了很大的进展,干细胞治疗ESLD具有很好的疗效。该文旨在阐述不同来源干细胞在ESLD治疗中的进展,提出研究存在的问题并展望未来的应用前景,为临床治疗ESLD提供了新的思路。

镍暴露通过细胞凋亡、自噬诱导肺癌发生及相关信号通路

镍(nickel)是一种众所周知的有毒金属,在生产、回收和处置过程中导致了广泛的环境污染。流行病学及动物实验已经证明,镍及其化合物暴露会增加肺癌风险。细胞凋亡和自噬是维持细胞内稳态的两种重要的分子机制,当两者出现异常调节时可能会诱发癌变。近年来,镍致肺癌机制的研究受到广泛关注,已证实细胞的凋亡及自噬过程参与其中,且两者可能存在相互调节关系。本文就镍暴露通过细胞凋亡、自噬诱导肺癌发生的研究进展进行综述,并着重讨论了丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路、p53信号通路对镍暴露致肺癌的意义。

光动力疗法联合NS-398抑制Bcl-2促进QBC939细胞凋亡的机制研究

目的研究光动力疗法(PDT)和选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398联合对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其机理。方法 QBC939细胞体外培养后分组:光动力组、NS-398组、联合实验组和空白对照组,分别将0、2、4、6、8、10μg/mL浓度的血卟啉衍生物(HPD)在0、5、10、15 J/cm2的光照强度和0、25、50、100、200μmol/L浓度的NS-398联合作用于QBC939细胞;采用细胞增殖实验(CCK8)检测生长抑制率(R);流式细胞法检测细胞凋亡;荧光定量RT-PCR检测Bcl-2基因表达;免疫细胞化学测定细胞浆中Bcl-2表达;ELISA测定细胞上清中Bcl-2蛋白。结果 PDT和NS-398在体外均能抑制QBC939细胞生长,当HPD浓度8μg/mL,光照强度5 J/cm2联合50μmol/L的NS-398,R值约达95%,联合实验组与其他3组比较均有统计学差异(P<0.05),继续增加2种强度,R变化不明显;流式细胞法表明PDT和NS-398联合能促进QBC939细胞早期凋亡(F=3 224.753,P<0.001)。荧光定量RT-PCR显示联合能抑制细胞中Bcl-2表达(F=6 262.227,P<0.001);SP免疫细胞化学显示联合能抑制细胞浆中Bcl-2表达(F=1 355.577,P<0.001);ELISA显示联合能抑制细胞上清中Bcl-2分泌(F=5 123.387,P<0.001)。结论 PDT和NS-398联合可明显抑制QBC939细胞生长,诱导早期凋亡,对生长的抑制可能是通过抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,促进其早期凋亡实现的。