腺苷酸激活蛋白激酶对缺氧H9c2心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡的影响

目的探讨腺苷酸激活蛋白激酶[adenosine 5′-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]对缺氧H9c2心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡的影响及可能机制。方法实验分为对照组、模型组、AMPK特异性阻断剂(Compound C)组和AMPK激活剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸转甲酰酶(5-amino-4-imidazolecarboxamide riboside,AICAR)组,采用免疫荧光染色检测线粒体自噬水平;Rhodamine-123和mitotracker双染色及线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位变化;磷脂结合蛋白V(AnnexinⅤ)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡率;Western blot检测AMPK、p-AMPK蛋白表达。结果免疫荧光染色结果显示,与对照组、模型组或Compound C组相比,AICAR组心肌细胞自噬体数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。线粒体膜电位变化结果显示,与模型组或Compound C组相比,AICAR组心肌细胞膜电位正常的线粒体比例增加,差异有统计学意义(P<0.05);AICAR组心肌细胞去极化细胞比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。AnnexinⅤ-PI染色结果显示,与模型组或Compound C组相比,AICAR组心肌细胞细胞凋亡比例明低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组或Compound C组相比,AICAR组心肌细胞AMPK激活水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在慢性缺氧条件下,AMPK激活能增强线粒体自噬,促进缺氧条件下心肌细胞的存活与适应,降低细胞凋亡。