miR-127靶向驱动蛋白KIF3B调控肺鳞癌紫杉醇药物敏感性的研究

目的探讨microRNA-127(miR-127)通过靶向调控驱动蛋白Kinesin家族成员3B(KIF3B)增强肺鳞癌细胞对紫杉醇(PTX)敏感性的作用机制研究。方法通过实时荧光定量PCR法和Western blot法检测人肺鳞癌细胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-127和KIF3B蛋白表达量。采用PTX长期浓度梯度递增法体外建立SK-MES-1/PTX耐药细胞株,分为空白组、阴性组、miR-127 mimics组和miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B组。TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因测定分析miR-127对KIF3B可能的靶向调控关系。采用MTT法和流式细胞术法检测各组细胞对紫杉醇的敏感性。结果与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,人肺鳞癌细胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1中miR-127表达量降低,KIF3B蛋白表达量升高(P<0.05)。体外成功建立SK-MES-1/PTX耐药细胞株,与SK-MES-1细胞相比,SK-MES-1/PTX细胞miR-127表达量降低,KIF3B蛋白表达量升高(P<0.05)。经TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-127存在与KIF3B基因靶向结合的互补序列。经不同浓度PTX作用后,miR-127 mimics组SK-MES-1/PTX细胞IC 50为(115.35±10.94)nmol/L,100 nmol/L PTX作用48 h的凋亡率为(33.69%±5.48%),均高于空白组(P<0.05);而miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B组SK-MES-1/PTX细胞IC 50为(220.47±15.86)nmol/L,100 nmol/L PTX作用48 h的凋亡率为(15.72%±2.67%),则较miR-127 mimics组显著降低(P<0.05)。结论肺鳞癌SK-MES-1/PTX耐药细胞中miR-127表达量降低,同时KIF3B蛋白表达量升高。上调miR-127表达可通过抑制驱动蛋白KIF3B转录提高SK-MES-1/PTX耐药细胞对PTX的敏感性。