姜黄素联合5-氟尿嘧啶对结肠癌SW620细胞体外抑制的影响

目的探索姜黄素与5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用。方法应用MTT法检测5-FU和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响;Compu Syn软件分析姜黄素增敏效果;流式细胞仪检测药物作用对SW620细胞凋亡的影响;Western blot法检测联合用药对SW620细胞caspase家族蛋白表达的影响。结果 5-FU对SW620细胞抑制作用较弱,处理48 h,IC50为(367. 20±16. 80)μmol/L,姜黄素预处理与5-FU联用协同增强对SW620细胞株的杀伤作用。姜黄素预处理与5-FU联用诱导SW620细胞凋亡,促进SW620细胞内凋亡相关蛋白(cleaved-PARP、cleaved-caspase3、cleaved-caspase6、cleaved-caspase9)的表达(P<0. 05,P<0. 01)。结论姜黄素预处理与5-FU联合应用可协同抑制结肠癌细胞的增殖,诱导凋亡,并上调SW620细胞内caspase家族的表达。

姜黄素逆转结肠癌HCT-116/5FU细胞耐药作用机制研究

目的探讨姜黄素逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU耐药的作用机制。方法姜黄素、5-FU诱导耐药细胞HCT-116/5FU凋亡,按对照组、5-FU组、姜黄素组及联合用药组分为四组,对照组予普通培养基;5-FU组予含5-FU 200μM培养基;姜黄素组予姜黄素20μM培养基;联合用药组予含5-FU 200μM和姜黄素20μM培养基。采用MTT法检测细胞增殖以明确最佳实验条件;AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡率;Western blot检测亲本株及耐药细胞株内cleaved-Caspase3、IL-6、STAT3蛋白表达水平。结果姜黄素联合5-FU干预人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU后细胞增殖受明显抑制;联合用药组HCT-116/5FU细胞凋亡率为(56.0±12.1)%,明显高于5-FU组(6.5±3.2)%和姜黄素组(19.9±7.2)%(P<0.05);耐药细胞株IL-6、STAT3蛋白表达明显高于亲本株;姜黄素降低耐药细胞株IL-6、STAT3的蛋白表达量,诱导cleaved-Casepase 3蛋白表达。结论姜黄素能逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5FU耐药,其机制可能与下调IL-6/STAT3有关。

姜黄素联合氟尿嘧啶对结肠癌细胞增殖凋亡迁移作用

目的:探索姜黄素调控上皮细胞间质转化(EMT)增敏5-FU的抗肿瘤作用。方法:采用姜黄素、5-FU不同给药浓度诱导结肠癌细胞株HCT8的凋亡,MTT法及克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;Compusyn软件分析姜黄素的增敏效力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;WesternBlot检测E-Cadherin、N-Cadherin、vimentin、cleaved-Caspase3、snail、β-catenin蛋白的表达量。结果:姜黄素能抑制HCT8细胞的增殖;6μmol/L姜黄素显著促进8μmol/L 5-FU对HCT8细胞的生长抑制和凋亡作用,联合药物指数(CI)值=0.7576;联合用药后降低HCT8细胞迁移能力,上调cleaved-Caspase3、E-Cadherin蛋白表达,同时抑制N-Cadherin、snail、β-catenin、vimentin蛋白表达。结论:姜黄素增加5-FU对HCT8细胞的敏感性,其机制可能与抑制EMT、诱导细胞凋亡有关。

基于糖酵解相关基因模型的乳腺癌患者预后及免疫功能综合分析

目的探讨肿瘤有氧糖酵解对乳腺癌患者预后及其免疫微环境的影响。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中获取1988年1月至2013年12月1 097例乳腺癌组织及112例癌旁正常组织的mRNA表达谱和相应临床数据。利用基因集富集分析(GSEA)软件筛选具有显著差异性的糖酵解相关基因(GRG)。利用单/多因素Cox回归分析及最小绝对收缩和选择算法(LASSO)筛选出与OS相关的GRG后生成6-GRG模型并绘制列线图。按模型算得中位风险值划分高/低风险组,提取不同组患者的相关GRG表达量后生成热图并进行了Kaplan-Meier生存分析。受试者操作特征(ROC)曲线分析及校准图用以验证模型准确性。用实时荧光定量PCR分析三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231及正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A中相关GRG的表达量。最后将不同风险组的差异表达基因(DEG)进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析及免疫微环境分析。结果共有6个GRG与OS相关,包括CACNA1H(HR=1.12,95%CI:1.03~1.20,P=0.009)、SDC1(HR=1.22,95%CI:1.06~1.40,P=0.008)、SDC3(HR=0.74,95%CI:0.61~0.90,P=0.003)、NUP43(HR=1.42,95%CI:1.07~1.90,P=0.015)、PGK1(HR=1.74,95%CI:1.36~2.20,P<0.001),CHST1(HR=1.14,95%CI:1.03~1.30,P=0.009),从而构建了6-GRG预后模型。根据模型测算的中位风险值,分为低风险组(n=576)和高风险组(n=521)。基因表达热图发现高风险组中SDC3表达减少,其余5个基因表达增加。生存分析发现低风险组患者的总生存率高于高风险组(χ^(2)=7.314,P<0.001),低风险组与高风险组患者的总生存期分别为(17.23±0.89)年和(8.75±1.71)年。校准图显示该模型对患者1、3、5年OS的预测准确率曲线与理想曲线(45度角灰线)贴合。ROC曲线显示,乳腺癌患者1、3、5年OS的曲线下面积分别为0.68、0.71和0.72,提示本模型具有较好的预测精准性。相较于正常乳腺细胞MCF-10A,乳腺癌MDA-MB-231细胞中CACNA1H、SDC1、NUP43、CHST1、PGK1均表达增高(F=15.36、30.73、1.08、14.92、12.93,P均<0.050),而SDC3的表达减少(F=17.50,P=0.038)。GO及KEGG结果显示不同风险组中DEG多在免疫学功能或通路显著富集。低风险组患者的正性免疫细胞比例高于高风险组,包括初始B细胞[0.037(0.011,0.095)比0.031(0.004,0.069),Z=-3.928,P=0.012]、记忆性B细胞[0.010(0.002,0.104)比0.004(0.001,0.411),Z=-5.175,P<0.001]、CD8^(+)T细胞[0.103(0.077,0.329)比0.073(0.012,0.136),Z=-4.904,P<0.001]、滤泡辅助性T细胞[0.068(0.000,0.117)比0.057(0.001,0.128),Z=-2.363,P<0.001]、γδT细胞[0.017(0.000,0.180)比0.010(0.000,0.140),Z=-1.491,P=0.001]、活化自然杀伤细胞[0.031(0.000,0.141)比0.021(0.000,0.099),Z=-1.667,P<0.001]、单核细胞[0.017(0.000,0.101)比0.015(0.000,0.085),Z=-1.093,P=0.047]、中性粒细胞[0.048(0.011,0.122)比0.021(0.008,0.069),Z=-2.776,P<0.001]。结论6-GRG预后模型具有良好的预测效能,乳腺癌患者的高糖酵解水平与不良预后及抗肿瘤免疫的功能下降密切相关。